顺丁烯二酰亚胺氮氧自由基的合成及自旋标记的血清白蛋白

本文报道制备顺丁烯二酰亚胺氮氧自由基纯品的方法。本方法为Hamilton-McConnell法的改进。在温和条件下,该化合物以共价键形式自旋标记到血清白蛋白的硫氢基和氨基等活性基团上。为利用自旋标记顺磁共振技术研究蛋白质分子的构象,提供了必要前提。经顺丁烯二酰亚胺氮氧自由基自旋标记的牛和羊血清白蛋白,由于标记位点和标记物所处的周围环境不同,给出了两类ESR波谱:即强固定化作用型和弱固定化作用型。用0.5 mMHgCl_2预处理牛血清白蛋白,阻断其硫氢基以后再自旋标记,仅给出弱固定化型波谱。从而进一步证明强固定化作用型波谱主要来自标记在蛋白质深层中的硫氢基;弱固定化作用型波谱则来自标记在靠近蛋白质表层的非硫氢基团上。通过对羊血清白蛋白自旋标记以后,再用8M尿素破坏其氢键的试验,发现原样品中强固定化型的谱线消失,仅剩下三条弱固定化型谱线。表明自旋标记物对蛋白质构象变化的反应是十分灵敏的。文中,对两类ESR波谱用自旋哈密尔顿理论进行了描述。     

顺丁烯二酰亚胺氮氧自由基的合成及自旋标记的血清白蛋白

本文报道制备顺丁烯二酰亚胺氮氧自由基纯品的方法。本方法为Hamilton-McConnell 法的改进。在温和条件下,该化合物以共价键形式自旋标记到血清白蛋白的硫氢基和氨基等活性基团上。为利用自旋标记顺磁共振技术研究蛋白质分子的构象,提供了必要前提。经顺丁烯二酰亚胺氮氧自由基自旋标记的牛和羊血清白蛋白,由于标记位点和标记物所处的周围环境不同,给出了两类ESR 波谱:即强固定化作用型和弱固定化作用型。用0.5mMHgCl_2预处理牛血清白蛋白,阻断其硫氢基以后再自旋标记,仅给出弱固定化型波谱。从而进一步证明强固定化作用型波谱主要来自标记在蛋白质深层中的硫氢基;弱固定化作用型波谱则来自标记在靠近蛋白质表层的非硫氢基团上。通过对羊血清白蛋白自旋标记以后,再用8M尿素破坏其氢键的试验,发现原样品中强固定化型的谱线消失,仅剩下三条弱固定化型谱线。表明自旋标记物对蛋白质构象变化的反应是十分灵敏的。文中,对两类ESR 波谱用自旋哈密尔顿理论进行了描述。     

化学发光和发光标记技术

化学发光免疫分析是继放射免疫分析和酶联免疫分析后建立起来的一种高灵敏、高特异性的免疫分析技术。化学发光标记是化学发光免疫分析的关键技术,不仅在小分子、大分子物质的标记分析中用于标记物的制备,而且在基因探针标记、肿瘤标记和诊断以及导向药物研究中广为采用。本简要介绍了化学发光和发光标记技术。     

临床生化标记免疫分析技术的一些新进展

二十多年来,临床生物化学在诊断应用和化学病理学的研究方面有了显著进展,其中起重要促进作用的是同位素、非同位素标记免疫分析技术的推广和应用。有人认为,标记免疫分析技术的建立和应用是生化分析的一次革命。看来这种说法似乎并不过份。本文拟就临床生化工作者所重视的放射免疫分析、酶免疫分析、荧光免疫分析和化学发光免疫分析等标记免疫分析技术有关方法学方面的新进展做一扼要介绍。     

内分泌学和免疫学的关系

内分泌学的进展很大一部分受益于现代免疫学,例如放射免疫测定法的建立,导致肽类激素研究的进展,从而改变了整个内分泌学的面貌。又如血中一些特异性抗体的发现,改变了对一些内分泌疾病的认识。一、免疫学技术在内分泌学中的应用Yalow和Berson第一次提出的放射免疫测定法(RIA)就是应用于内分泌学的。此法的特点是将抗体的特异性和放射活性测定的敏感性相结合。此法已广泛应用;但有许多缺点,主要是因使用放射性物质带来的损害及标记物的不稳定性,因而需寻找其他的标记物。近十年来应用较广的其他标记法是用荧光团标记的荧光免疫测定法和用酶标记的酶免疫测     

时间分辨荧光免疫分析技术研究现状及进展

时间分辨荧光免疫分析是一种新型的超微量的免疫标记分析方法,集酶标记免疫分析和放射免疫分析等优点于一身,且无放射性污染等.本文主要介绍了时间分辨荧光免疫分析的原理、优点,螯合剂的种类,以及各种分析技术及其应用现状和进展.     

胸腺肽α_1活性片段和其自旋标记衍生物的合成及免疫活性研究

报道了胸腺肽α_１活性片段Ｔｈｙｍｏｓｉｎα_１［Ｌｙｓ（２３）］（２３－２７）ＯＨ和其自旋标记衍生物的合成及对实验动物免疫功能的影响。其氨基酸序列分别为Ｈ_２Ｎ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ａｌａ－Ｇｌｕ－ＯＨ,用Ｔｈｙα_１［Ｌｙｓ~（２３）］表示,修饰物为Ｇｌｕ－ＯＨ）,用Ｔｈｙα_１［Ｌｙｓ~（２３）］·Ｒ表示。ＨＰＬＣ测得该肽的纯度在９０％以上,ＥＳＲ谱测定自旋标记衍生物给出氮氧自由基信号,氨基酸组成与预期值相符。实验小鼠腹腔连续注射剂量为０．１、１、１０、１００和１０００μｇ／ｋｇ的该肽１０天后,发现腹腔巨噬细胞吞噬功能、ＥＲＦＣ阳性率及血清溶血素含量明显升高,且最佳剂量在０．１－１０μｇ／ｋｇ范围。实验结果表明人工合成胸腺肽α_１活性片段及其自旋标记衍生物具有显著的免疫促进活性。     

胸腺肽α1活性片段和其自旋标记衍生物的合成及免疫活性研究

报道了胸腺肽α１活性片段Ｔｈｙｍｏｓｉｎα１ＯＨ和其自旋标记衍生物的合成及对实验动物免疫功能的影响。实验结果表明人工合成胸腺肽α１活性片段及其自旋标记生物具有显著的免疫促进活性。     

标记抗体技术与病毒快速诊断

病毒性感染的快速诊断技术通常检测体液标本中的微量病毒抗原和早期IgM抗体,在病毒感染后几天内就可作出诊断。检测微量病毒抗原和早期IgM抗体,要求检测技术敏感性高,特异性强,重复性好,方法简便。近几年来发展起来的标记抗体技术能够满足上述要求。 荧光素、酶或核素能与抗体结合成标记抗体,标记抗体仍然具有与特异性抗原结合的免疫学特性,形成一种标记的免疫复合物。这种标记的免疫复合物可以用仪器来检测。 标记抗体技术包括免疫荧光技术、免疫酶技术和放射免疫分析。 一、免疫荧光技术 将荧光素与特异性抗体共价结合,成为荧光抗体。荧光抗体再与标本中抗原形成抗原抗体复合物,借助荧光显微镜观察标本中所显示的荧光。免疫荧光技术用于检测细胞内微量病毒抗原,对不产生细胞病变的病毒更具有诊断价值。也可用于病毒抗原的定位和检测体液中的特异性抗体。在几小时内可获得实验结果,已广泛用于病毒实验室快速诊断。 常用的荧光素有异硫氰酸荧光素和罗丹明,异硫氰酸荧光素的荧光呈黄绿色;罗丹明的荧光显红色。     

动脉自旋标记技术及其衍生技术

动脉自旋标记成像技术利用内源示踪剂标记血液,主要用于定量测量区域脑灌注。近年来,该技术发展出多种成像采集序列,并通过结合测量大脑静脉血氧饱和度的成像技术衍生出脑氧代谢定量测量方案。本文对三种典型的动脉自旋标记序列的成像原理及动脉自旋标记的衍生技术做简单介绍。     

用定点自旋标记的方法研究天青蛋白疏水区的结构及其与P53蛋白的相互作用

定点自旋标记技术结合电子顺磁共振(ESR)波谱技术已成为检测蛋白质结构的有力工具.本文使用该方法研究了天青蛋白疏水区的结构特征及其与p53蛋白的相互作用.围绕天青蛋白疏水区构建了6个突变体,并对其进行自旋标记.溶液中标记位点的自旋谱线表明,45及63位自旋探针的运动受到很大限制,而59及65位的标记探针是在一个宽松的环...     

高效价兔抗小鼠IgG抗血清制备

在免疫学技术中,如放射免疫,免疫酶标技术,免疫荧光等方法常用标记的第二抗体来检测小鼠抗原特异性抗体,包括单克隆抗体的产生。如何获得高效价的兔抗小鼠抗血清,是一个重要的技术问题。经常遇到的一个问题就是所获抗血清的效价常不够理想。我们在     

光学椭偏成像技术在生物分子研究中的应用

光学椭偏显微成像是一种新型超薄膜及表面显示技术,是研究生物分子与固体表面吸附以及生物分子之间相互作用的一种简单、快速和可靠的手段。它不仅能够大面积精确显示超薄膜的厚度分布,而且能够用于表面实时吸附的动力学研究。在抗原抗体检测分析方面,它不需要像酶联免疫法、荧光免疫法和放射免疫法那样对待测物作标记,也不会对待测生物分子活性造成任何扰动和损伤,操作简单,费用低廉。另外,它还弥补了传统的椭偏法的不足之处,能够有效地区分非特异性吸附、脱吸附或表面污染带来的干扰。     

白内障形成过程中晶状体细胞膜上脂类与蛋白质氧化的时间差异性

用马来酰亚胺及５恶唑氮氧自由基硬脂酸分别标记晶状体细胞膜中蛋白质及脂类,以电子 自旋共振方法研究在三硝基甲苯、亚硒酸钠、半乳糖、平阳霉素及紫外线等白内障诱发剂作用下,晶状体细胞膜氧化损伤变化,结果发现当晶状体细胞暴露于空气中时,晶状体细胞膜脂类氧化早于蛋白质的氧化;在五种白内障诱发剂作用下,均是如此,这说明白内障的形成首先是由膜中脂类氧化所引起。     

一种固相~(125)I标记抗球蛋白的技术

近十年来,广泛应用放射免疫技术的同时,也建立了免疫放射的分析方法(Mi-les and Hales,1968),利用标记抗体先直接和一特定抗原相结合,再在反应系统中,加入联结于吸附剂上的该抗原,结合剩余的游离抗体,分离后者,从而了解待测抗原的含量。但标记特异性抗体的免疫放射法,和放射免疫法中标记抗原一样,在研究不同实验系统时,需标记不同的抗体,在使用上不便。免疫放射分析技术中的标记     

酶免疫分析法(EIA)

1959年来,放射免疫分析法发展迅速,应用广泛,几普及于生物体内各种微量成分的测定。该法应用抗体抗原反应,故特异性强;用放射性同位素标记,因而灵敏度高。但是也有它的缺点,一是需有一定设备,操作人员需经特殊的技术训练,另一是长期使用时,操作人员的保健与可造成公害的废     

骨髓造血细胞动力学研究——小鼠骨髓造血细胞细胞周期的测定

五十年代成功地解决了核乳胶和核素标记化合物的制备,为放射自显影术在生物学研究中的应用创造了必要的条件。1955年Hughes用氚标记胸腺嘧啶核苷(以下简称_3H-TdR)成功(Cronkite et al., 1959),它是参与胞核DNA合成代谢的特异性大分子核苷类标记化合物,为细胞动力学研究提供了新的较好的试剂。但计数标记的核分裂象或标记的细胞数工作量较大。1956年Friedkin等成功地用~14C-TdR先后掺入到鸡胚羢毛-尿囊膜、鸡骨髓、胸腺、睾丸、肺、小肠粘膜、兔胸腺等组织DNA中。以后~14C-TdR广泛用于细胞动力学的研究。它比用~3H-TdR简便、省时,对环境污染易于监测(Cronkite     

一种测定固氮酶含钼组分中~(99)Mo的γ射线计数器

利用同位素标记,示踪原子在生物体内的代谢行径是一种既简便又准确的技术方法,这种技术方法能广泛地应用于医学、生物学,特别是生理生化有关机制方面的研究。放射性同位素能自发地放射出诸如α、β、γ粒子,这些射线对人体均有伤害,其中γ射线穿透力最强。因此在示踪技术中,计数放射γ粒子的脉冲时,对于仪器的自动测量、灵敏度、快速、简便等性能就显得特别重要。我们使用的西安262厂生产的γ免疫计数器是较为理想的一种仪器。虽然这种仪器原为医疗卫生系统的放射免疫测定所设计,但对于γ射线能量在20keV至500kV范围内标记的同位素均可应用。它具有较高探测效率和较低本底计数的γ射线探测性能,自动换样,自动扣除本底而计数,并通过打印机给出结果。     

血卟啉光动力作用对小鼠腹水肝癌细胞膜损伤的ESR波谱研究

已知血卟啉衍生物(以下简称HPD)能较长时间潴留在癌组织内,在可见光或低能量激光照射下受激,可以破坏生物分子和杀伤癌细胞。细胞膜在此过程中有肿胀和通透性发生改变等现象。然而,HPD对细胞膜类脂分子的物理性质有何影响未见报道。为此,我们用脂肪酸噁唑氮氧自由基自旋标记小鼠     

蚕豆（Vicia faba L．）叶肉细胞中ABA的胶体金免疫电镜定位

利用胶体金免疫电镜定位技术对蚕豆叶肉细胞中ＡＢＡ定位的研究表明,在以ＡＢＡ抗体处理的切片中,叶绿体有大量的金颗粒标记,细胞质和细胞核也有金颗粒标记,但液泡和细胞壁中没有金颗粒标记。免疫染色前用胰蛋白酶处理可显著增强金颗粒标记密度,而不用ＥＤＣ固定或以免疫前兔血清处理的切片中几乎没有金颗粒标记。本实验为蚕豆叶肉细胞中ＡＢＡ的分布提供了直接的证据并说明了该技术是研究ＡＢＡ定位的一种可靠的方法。