用细胞游走抑制试验研究带移植肝癌大鼠的免疫状态

引言致敏淋巴细胞和抗原接触时能释出淋巴因子,使巨噬细胞或白细胞的游走受到抑制。这现象最早为Rich和Lewis(1932)所发现。1962年George 和Vanghan建立了细胞游走抑制试验的毛细管法,成为研究细胞免疫的一个新方法。一般认为这方法和迟发性过敏反应比较相符(Thor等,1968;Rosenberg和David,1970;Ramsey等,1976),可用于检测淋巴细胞对抗原的致敏性和效应反应。目前已应用于细胞免疫和肿瘤免疫方面。方法学上有巨噬细胞游走抑制试验(Macrophage mi-gration inhibition test,MMIT)和白细胞     

免疫诊断细胞方法(续八)

<正>(二)用毛细管测定白细胞移动的方法 1.用水平毛细管,细胞在表面上移动的方法测定抗原的效果。 原理 放在毛细管的细胞象在玻璃表面一样形成移动带,白细胞移动比其它细胞好。如培养液中存在致敏淋巴细胞和其它白细胞(粒细胞,巨噬细胞),则加入相应抗原时,致敏淋巴细胞随之分泌出MIF。因此,根据抑制白细胞移动程度可评价抗原对淋巴的致敏效果。     

免疫诊断细胞方法(续九)

<正>七、淋巴活性因子和胸腺刺激素分离制备和检查 原理 淋巴细胞体外培养受到刺激后,上清液出现生物活性因子(淋巴因子),这种因子通常认为是迟发型超敏反应的介质可作为淋巴细胞刺激原的,有可使淋巴细胞致敏的特异性抗原或非异性致有丝分裂原。被致敏的淋巴细胞在该抗原作用下可分泌淋巴因子。     

免疫诊断细胞方法(续四)

<正> (四)有受体与无受体的T和B型淋巴细 胞的检查 1.淋巴细胞各受体的联合检查法。 原理。检查一个型淋巴细胞的抗原或受体,通常不妨碍同时检查该细胞或另一个细胞的其他受体。 白细胞悬液之准备。与检查T和B淋巴胞细的方法相同,可使用纯淋巴细胞悬液或白细胞悬液。     

抗大鼠巨噬细胞和多形核白细胞单克隆抗体的制备和应用

前言在研究工作中应用单克隆抗体在许多实验动物中鉴定淋巴细胞的群体和亚群是极其有用的。在一些实室验里已经制备成功几种与大鼠淋巴细胞表面抗原相反应的单克隆抗体OX—1 OX—6及抗T细胞的单克隆抗体。但是,迄今尚未涉及到抗大鼠巨噬细胞和多形核白细胞的单克隆抗体。而单核巨噬细胞和多形核白细胞则是免疫反应的重要组成部分。因此制备针对这些细胞的单克隆抗体,已成为大鼠角膜移植实验和其他有关实验的当务之急。这些单克隆抗体将会成为有用的标志,运用到实验大鼠模型中,以鉴定多形核白细胞、单核/巨噬细胞和淋巴细胞。本文将叙述     

白细胞介素1和糖皮质激素对免疫调节可组成反馈回路

白细胞介素1(IL-1)是单核吞噬细胞受刺激后产生的一种蛋白,对淋巴细胞激活和淋巴因子生成有刺激作用;还有诱发肝合成急性相反应蛋白、升高体温等多种生物作用。最近,美国 Dinarello 研究组报告,将人白细胞与新城病毒温育的上清液注入大鼠可使血浆皮质酮含量增加,而 IL-1抗体完全消除上消液的这种效应。以高度纯化或重组的人 IL-1注入 C3H/HeJ 小鼠,血清 ACTH 和皮质酮含量在注后2h 前后达到     

白细胞间质素-1不止一种

白细胞间质素[Interleukin-l(IL-1)]以淋巴细胞活化因子,B-细胞活化因子,白细胞内源介体、内源热原和单核细胞因子等不同的名称见诸于书刊。IL-1由活化的巨噬细胞合成和分泌,可刺激免疫和炎症反应。诸如淋巴细胞活化、发热、肝细胞功能、从骨髓中产生和释放嗜中性白细胞及结缔组织细胞增生均由IL-1调节。     

低血压灌注对无心跳大鼠肺支气管肺泡灌洗液中不同白细胞及HMGB1 的影响

目的:研究低血压灌注对无心跳大鼠肺支气管肺泡灌洗液中不同白细胞及HMGB1的影响。方法:将32只180-200g SD雄性大鼠随机分成对照组[sham]、缺血30min组[30I]、缺血60 min组[60I]和缺血90 min组[90I](n=8),4组大鼠分别接受麻醉后持续机械通气,测定并统计各组支气管肺泡灌洗液中总白细胞计数及不同白细胞计数,免疫印迹法检测支气管肺泡灌洗液中HMGB1蛋白的表达。结果:总白细胞、巨噬细胞、淋巴细胞计数及HMGB1蛋白表达均随着低血压灌注时间的延长而逐渐增加,尤其在[60I]和[90I]两组,灌洗液中巨噬细胞和淋巴细胞计数有显著增高,并且巨噬细胞和淋巴细胞与HMGB1蛋白表达呈正相关。结论:本研究证实HMGB1蛋白表达和巨噬细胞,淋巴细胞计数在低血压灌注缺血期内升高,提示HMGB1蛋白可能具有驱动炎症反应的作用。     

CD8+T淋巴细胞与高血压心肌纤维化的研究进展

血管生长因子增多,血管平滑肌细胞增殖和炎症在血管重塑方面起到了关键的作用。这种低级的炎症反应导致粘附分子表达,白细胞的侵入,细胞因子的产生,氧化应激的增加,从而激活免疫细胞和血管炎症信号通路,使T淋巴细胞及巨噬细胞等细胞活化,产生和释放多种活性因子,激活心肌的细胞外基质生成细胞,引起胶原形成及代谢异常,并可导致心肌实质细胞的变性、坏死或亚细胞结构变化等,从而引起心肌纤维化一系列病理生理变化。本文主要就CD8+T淋巴细胞在高血压心肌纤维化炎症反应中的细胞毒性作用、诱导细胞凋亡作用、分泌大量的炎症因子、增加MMPs的活性从而影响心肌纤维化的形成等方面做一综述!     

黄芪甲苷对马兜铃酸诱导的巨噬细胞M1型极化的作用及机制研究

目的:探讨黄芪甲苷对马兜铃酸诱导的RAW264.7细胞向M1型极化的影响,并初步探索其可能的作用机制。方法:分别采用马兜铃酸和脂多糖(LPS)刺激RAW264.7细胞24 h,伴或不伴黄芪甲苷进行药物干预处理。采用细胞计数检测试剂盒-8(CCK 8)检测细胞活性变化,流式细胞仪检测巨噬细胞分型,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌量。反转录实时定量PCR(RT-qPCR)技术检测RAW264.7细胞IL-6、TNF-αmRNA表达。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测RAW264.7细胞p-p38和p38 MAPK蛋白表达水平。结果:CCK8结果提示黄芪甲苷在5~50μg/mL浓度范围对RAW264.7巨噬细胞无明显毒性,本研究选取10μg/mL作为实验干预浓度。黄芪甲苷能够显著改善马兜铃酸诱导的巨噬细胞活性(P<0.05),同时减少IL-6和TNF-α的分泌水平和mRNA表达水平(均P<0.05),抑制马兜铃酸和LPS诱导的M1/M2巨噬细胞比例(P<0.05)。黄芪甲苷可部分抑制马兜铃酸诱导的巨噬细胞p38 MAPK磷酸化水平(P<0.05)。结论:黄芪甲苷可减少巨噬细胞M1型极化,降低炎症因子IL-6和TNF-α水平,减少巨噬细胞的活性,从而起到减缓马兜铃酸肾损害的作用,其作用机制可能与部分抑制p38 MAPK信号活性有关。     

兔抗人外周血单核细胞、兔抗猴脾脏淋巴细胞免疫血清的制备及其在分离人和猕猴胚胎内细胞团中的应用

采用梯度离心的方法用淋巴细胞分离液从浓缩的人白细胞悬液中分离人外周血单核细胞,从猕猴新鲜脾脏中研磨分离猕猴脾脏淋巴细胞;分别将人外周血单核细胞和猕猴脾脏淋巴细胞作为免疫原,每次通过耳缘静脉注射4×108个细胞免疫日本大耳白兔,每周免疫一次,共免疫3次,制备兔抗人外周血单核细胞和兔抗猕猴脾脏淋巴细胞免疫血清。体外培养人和猕猴胚胎至囊胚,采用制备的免疫血清,分离人和猕猴囊胚内细胞团,用于建立人和猕猴胚胎干细胞系。结果如下:(1)用半微量细胞毒实验法测得兔抗人外周血单核细胞免疫血清和兔抗猕猴脾脏淋巴细胞免疫血清的效价分别为1∶320和1∶640;(2)两种免疫血清成功地裂解了15个人囊胚和33个猕猴囊胚的滋养层细胞,分离出了内细胞团,表明免疫血清的制备取得了成功,为建立人和猕猴胚胎干细胞系奠定了基础。     

白细胞介素2的抗肿瘤活性

<正>大量实验证明白细胞介素2(IL—2)在免疫活性细胞微环境精密调节中占有重要地位。在细胞毒T细胞(CTL)和自然杀伤细胞(NK)等淋巴细胞的成熟和分化中,IL—2是不可或缺的。在研究IL—2的过程中又发现了只有在IL—2作用下才能活化的淋巴因子活化的杀伤细胞(LAK)和淋巴因子诱导的细胞毒细胞(LICC)。这些淋巴细胞在宿主体内抗细胞突变的免疫监视作用中可谓独占鳌头。故此,关于IL—2的抗肿瘤活性及其在癌症免疫治疗中的实用价值的研究就提到了重要议程上来了。     

HMG盒蛋白1抑制巨噬细胞移动抑制因子启动子的转录激活

HMG盒蛋白1（HMG box-containing protein 1, HBP1）是一种转录抑制因子. HBP1表达上调可抑制肿瘤细胞的增殖和转移,并且在肿瘤细胞中HBP1常常发生丢失或转位,这表明HBP1是一种抑癌基因. HBP1所调节的靶基因无疑将为HBP1的肿瘤抑制机制提供新的线索.本研究通过生物信息学分析发现,在促细胞增殖基因 巨噬细胞移动抑制因子（macrophage migration inhibitory factor, MIF）启动子区域-811 bp至-792 bp发现高亲和力的HBP1反应元件.缺失和突变分析表明,HBP1通过该元件抑制MIF启动子活性.此外,免疫共沉淀研究显示,HBP1在细胞内与该元件结合,并且抑制MIF的转录.功能分析进一步证实,在细胞培养液中加入重组MIF可部分消除HBP1对大肠癌细胞LOVO的抑制作用.这些结果提示,MIF是HBP1的一个靶基因.HBP1通过抑制促细胞增殖基因MIF的表达抑制肿瘤细胞生长.     

抗菌免疫核糖核酸组份的分离及其活性测定

<正> 抗菌免疫核糖核酸(iRNA)已用于条件致病菌感染的临床治疗,并对其免疫活性做了全面的研究。现已证实iRNA能够诱导特异性抗体的产生和传递特异性的细胞免疫,并能诱生干扰素和白细胞间素Ⅰ、Ⅱ等淋巴因子和单核因子。但制备的iRNA是含有多种RNA种类的混合物,为明确各组份的免疫学功能,我们对iRNA进行了分离,并测定不同组份的免疫活性。     

单克隆抗体技术简介

1980年,人-人B淋巴细胞杂交瘤融合成功,获得人的特异性单克隆抗体。它可以避免动物外源蛋白在人体内的过敏反应,用于人类疾病的诊断和治疗。今将制备技术及其在医学方面的应用简介如下: 1.制备技术与原理制备技术关键是细胞融合与融合细胞的培养、抗体筛检与细胞克隆化两步。细胞融合与融合细胞的培养取新制备的脾细胞悬液和处于生长对数期的鼠骨髓细胞悬液(活率均须>95％),按2∶1—10∶1(脾细胞∶骨     

小鼠胸腺基质细胞系分泌的趋化因子的分析

利用Boyden小室法和FACS分析法,我们分析了五株小鼠胸腺基质细胞系(MTSC)培养上清液对中性粒细胞,单核巨噬细胞和淋巴细胞的化学趋化因子(Chemokines)活性,及定向迁移的淋巴细胞中B细胞、CD 4~ CD 8~-和CD4~-CD8~ T细胞的比例。结果显示,五株MTSC的培养上清液对上述靶细胞均有不同程度的趋化作用.MTSC细胞分泌趋化因子的情况可分为三类:1.MTEC 1和MTEC 2产生的Chemokine(s)对中性粒细胞和淋巴细胞的趋化作用相对较强;2.MTDC 4分泌的Chemokine(s)主要作用于单核巨噬细胞;3.MTEC 3和MTEC 5分泌的Chemokine(s)对多种类型的靶细胞,包括中性粒细胞、单核巨噬细胞和淋巴细胞,表现的趋化作用没有明显的强弱之分。MTSC-SN对B细胞的趋化活性普遍高于对T细胞的趋化活性,对CD 4~-CK 8~ T细胞的趋化活性高于对CD 4~ CD 8~-T细胞的趋化活性。MTSC-SN中趋化因子的分析,有利于新型chemokines的发现及其生物功能的阐明,并可进一步研究Chemok-ine(s)在T细胞发育中的作用。     

免疫诊断细胞方法(续一)

<正> 二,抗人的T和B淋巴细胞与其它白细胞抗血清的获得 各淋巴细胞群体和其他型白细胞特异性抗血清,首先必须与相应的细胞起反应。此外,这些抗血清应当除去非特异的抗淋巴细胞作用,从而加强其免疫抑制的特异性。用相应的材料通过免疫动物获得抗血清。因输血姙娠和某些疾病出现的抗淋巴细胞抗体也能用作试剂。 (一)抗T淋巴细胞血清(ATC) 的制备 1.免疫动物的材料。 可用胸腺细胞或无细胞的胸腺组织。作     

免疫诊断细胞方法(续五)

<正>6.分离T和B淋巴细胞的方法。 为检查T和B淋巴细胞的一系列特性,应使用仅含1—5％另一型淋巴细胞和其他白细胞的纯悬液,这种悬液是利用T和B淋     

细胞因子和天然杀伤(NK)细胞

随着 NK 细胞的发现。NK 细胞克隆的建立以及细胞因子(cytokines)中有些活性分子的高度纯化和分子克隆,为细胞因子和 NK 细胞相互关系的研究提供了不少新的认识。本文将对上述研究的一些新进展作概要综述。一、一般概念1.细胞因子:1966年,一些科学工作者发现,淋巴细胞体外激活后释放了非免疫球蛋白的糖蛋白分子能够抑制巨噬细胞的迁移,从而引起了研究淋巴细胞来源的活性因子的兴     

母牛分枝杆菌制剂对T淋巴细胞增殖反应影响的研究

以氚标记胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)掺入法检测每分钟脉冲数(CPM),比较母牛分枝杆菌活菌悬液、辐射杀死菌悬液及高温杀死菌悬液对健康人外周血T淋巴细胞增殖反应的影响.以此作为评价治疗以细胞介导免疫为主的结核病免疫功能障碍免疫制剂效力的一个重要参数.在加入单一刺激因子实验中,对照组CPM为448±131;加入BCG、母牛分枝杆菌活菌悬液、辐射杀灭菌悬液以及高温杀死菌悬液的CPM分别为1037±194,2299±140,1819±528,994±186.这4种制剂的刺激指数均在2.0以上,尤其是母牛分枝杆菌活菌悬液、辐射杀死菌悬液分别为5.13,4.06.结果表明,母牛分枝杆菌3种制剂与BCG基本相似,在体外对T淋巴细胞增殖反应有明显的促进作用,其中以活菌悬液和辐射杀死菌悬液更为显著.另一试验中,以重组白细胞介素-2(rIL-2)作对照,BCG、母牛分枝杆菌悬液、辐射杀死菌悬液及高温杀死菌悬液分别加入rIL-2,目的在于观察菌体抗原加淋巴因子对T淋巴细胞增殖反应有无协同刺激作用.对照组的CPM为3721±1336,BCG加rIL-2组CPM为6904±1218;母牛分枝杆菌3种制剂的CPM分别为9544±172…