免疫诊断细胞方法(续八)

<正>(二)用毛细管测定白细胞移动的方法 1.用水平毛细管,细胞在表面上移动的方法测定抗原的效果。 原理 放在毛细管的细胞象在玻璃表面一样形成移动带,白细胞移动比其它细胞好。如培养液中存在致敏淋巴细胞和其它白细胞(粒细胞,巨噬细胞),则加入相应抗原时,致敏淋巴细胞随之分泌出MIF。因此,根据抑制白细胞移动程度可评价抗原对淋巴的致敏效果。     

免疫应答调节中独特型的专一性抑制及其抑制性细胞

抗原与免疫系统接触,能选择性地与相应淋巴细胞结合,并引起淋巴细胞克隆增殖和分化,产生抗体(体液免疫)或形成致敏淋巴细胞(细胞免疫),从而表达免疫系统的效应功能。这就是克隆选择学说的主要含义,也就是所谓     

细胞免疫功能的体外测定方法

<正> 机体的免疫反应主要包括细胞免疫与体液免疫两大类。但这只是为免疫学研究的方便而分类的,实际上,机体的免疫反应乃是一个系统的、完整的、统一的整体反应。细胞免疫与体液免疫在全部免疫反应过程中,既是相互关连,相互促进,又是相互制约的。 参与免疫反应的细胞主要有两大类。一类为吞噬细胞,包括巨噬细胞,组织中具有吞噬能力的细胞,以及血液中的单核细胞和粒细胞等。这些细胞在免疫反应中的主要作用乃是捕获抗原、处理抗原,使处理后之抗原更加有效地作用于淋巴细胞。吞噬细胞处理抗原乃是非特异免疫反应,在重复处理抗原的过程中,也参与了特异免疫反应。 第二类为淋巴细胞。这是一群极为复杂的不均一的细胞。依其功能特征又可分为T淋巴细胞和B淋巴细胞,在抗原的激发下,T细胞分化成为致敏淋巴细胞,并产生和释放各种活性淋巴因子;而B细胞则分化成为浆细胞,产生和分泌各种免疫球蛋白。     

免疫诊断细胞方法(续二)

<正> (一)皮肤试验 皮肤对抗原阳性反应说明存在过敏,如果抗原材料不引起类似反应说明该个体对该抗原不存在过敏。过敏反应的强度不仅决定于淋巴细胞的致敏程度,而且决定于皮肤组织生理学、血管反应和其他因素。广泛存在着对PPD和某些细菌抗原的过敏性。所以过敏试验可以用于评价免疫活性,对全部被试抗原不呈阳性反应说明免疫反应性被抑制(不是对所有的人)。读取4-6小时和24-48小时出现的超敏反应直径。根据充血颜色、出血,浸润的mm~2等程度打0-4个加号。 用抗原作皮肤试验必须在采血为采血作体外试验之后进行,因为甚至给机体注射微量抗原都会改变淋巴细胞反应性。     

免疫诊断细胞方法(续完)

<正>(二)测定被刺激淋巴细胞上清液中淋巴因子活性的方法 1、白细胞移动抑制因子的鉴定方法。 籍指示细胞移动抑制来测定上清液淋巴因子活性。为此可用第六章的方法。 (1)白细胞移动抑制的间接反应。 指示细胞 使用人白细胞悬液或豚鼠腹腔渗出液巨噬细胞判定上清液白细胞移动抑制因子的活性。制备这些悬液与制备抑制白细胞移动的直接反应相同。可使用精制巨噬细胞或多核白细胞悬液,因为正是这些细胞对MIF起反应。因此,如果不用精制多核白细胞,则必须注意用于指示白细胞悬液的细胞组成。淋巴细胞占多数的悬液不能用于检     

巨噬细胞游走抑制因子在肿瘤中的作用研究进展

巨噬细胞游走抑制因子是一种具有多种生物学效应的糖蛋白,可以调节不同的下游信号如ERK/AKT、NF-κB等通路参与肿瘤细胞增殖、侵袭、转移、血管形成和自噬等生物学过程。临床相关研究表明巨噬细胞游走抑制因子与肿瘤发生发展关系密切,且在乳腺癌、肺癌、前列腺癌、甲状腺癌、结肠癌等多种肿瘤中高表达,因此以巨噬细胞游走抑制因子为靶点的相关肿瘤治疗逐渐受到重视。有关巨噬细胞游走抑制因子拓扑异构酶活性抑制剂及巨噬细胞游走抑制因子中和抗体在肿瘤治疗中的研究越来越多。本文对巨噬细胞游走抑制因子在肿瘤发生发展中的作用以及针对巨噬细胞游走抑制因子进行的肿瘤治疗研究作一综述。     

表达小鼠白细胞介素21的Sp2/0细胞体外对鼠肿瘤特异性淋巴细胞增殖及功能的影响

目的:研究表达小鼠白细胞介素21(mIL-21)的Sp2/0细胞与用Sp2/0细胞预先免疫的小鼠淋巴细胞体外共培养,是否对预致敏淋巴细胞增殖及功能有影响.方法:获取灭活Sp2/0细胞免疫的小鼠淋巴细胞,在mIL-2存在的条件下,以miL-21转染的Sp2/0细胞为刺激细胞,用流式细胞术检测CFSE标记的淋巴细胞增殖和7-AAD标记的细胞毒活性;用ELISpot法确定分泌IFN-y/的淋巴细胞数量.结果:转染mIL-21的Sp2/0细胞对预致敏的淋巴细胞增殖有明显影响,活化的淋巴细胞对靶细胞的杀伤率(39.57%±4.72%)与对照组(23.18%±2.94%)相比有较大的提高(P＜0.05),且分泌IFN-y的细胞数量明显增加.活化增殖后的淋巴细胞回输至环磷酰胺预处理的小鼠,能延长小鼠的成瘤时间.结论:表达mIL-21的Sp2/0细胞可有效促进肿瘤抗原特异性淋巴细胞活化及增殖,并增强其对肿瘤细胞的杀伤功能.     

从肿瘤病人少量外周血淋巴细胞克隆抗体基因

建立杂交瘤单抗亲和层析纯化抗原、体外抗原致敏淋巴细胞和RT-PCR克隆人抗体基因的技术.将亲和层析纯化的大肠癌相关抗原CA-Hb3经SDS-PAGE和免疫印迹鉴定后,与IL-2和丝裂原于体外致敏大肠癌病人10 ml外周血淋巴细胞(PBL),出现淋巴母细胞化和集落形成现象.致敏PBL的总RNA比未致敏PBL的量增加了2.5倍.致敏后RT-PCR扩增的人抗体VH-CH1(IgG)和VL-CL(κ)基因的量比未致敏者多1.3倍.该技术可将鼠源杂交瘤单抗人源化.     

STAT3小分子抑制剂FLLL31对卵白蛋白致敏小鼠气道炎症治疗活性的初步研究

目的:研究新结构化合物FLLL31抑制卵白蛋白(OVA)致敏引发的小鼠气道炎症的活性,探讨FLLL31治疗哮喘的初步疗效。方法:雄性BALB/c小鼠(18~20 g)随机分为4组,每组10只,包括正常对照组(Control组)、模型对照组(OVA组)、地塞米松组(1 mg/kg,腹腔注射)和FLLL31组(15 mg/kg,口服灌胃)。各组小鼠分别于第0 d和第14 d致敏,每只鼠腹腔注射20μg OVA和2.25 mg Al(OH)3凝胶,FLLL31自致敏第24 d开始给药,给药周期为7 d;于第28、29、30 d以气管滴入OVA进行攻击,攻击前1 h给予受试化合物FLLL31及阳性药地塞米松。结果:小鼠肺灌流液炎症细胞分类计数、肺组织病理分析等实验结果证明,FLLL31以15 mg/kg连续给药7 d后,与模型组相比,抑制了小鼠肺部气道中炎症细胞的浸润,明显改善OVA致敏引发的小鼠气道炎症症状;ELISA结果证明FLLL31降低小鼠肺灌流液中炎症因子白细胞介素6的含量;免疫组化结果显示FLLL31降低OVA致敏小鼠肺部白细胞介素6受体浓度,减少中性粒细胞标志物淋巴细胞抗原6G(Ly6G)的表达(P0.05)。结论:特异抑制STAT3的新结构化合物FLLL31在体内对OVA致敏小鼠模型气道炎症有较好的改善和免疫调节活性。     

免疫诊断细胞方法(续九)

<正>七、淋巴活性因子和胸腺刺激素分离制备和检查 原理 淋巴细胞体外培养受到刺激后,上清液出现生物活性因子(淋巴因子),这种因子通常认为是迟发型超敏反应的介质可作为淋巴细胞刺激原的,有可使淋巴细胞致敏的特异性抗原或非异性致有丝分裂原。被致敏的淋巴细胞在该抗原作用下可分泌淋巴因子。     

甲型肝炎、乙型肝炎病毒混合抗原的细胞免疫学研究

评价甲型肝炎病毒和乙型肝炎病毒混合抗原对细胞免疫反应的影响。采用小鼠迟发型超敏反应(DTH)、脾脏淋巴细胞增殖实验和淋巴细胞亚型分群实验 ,对甲肝抗原 (HAAg)、乙肝表面抗原 (HBsAg)和甲乙肝混合抗原 (HAAg +HBsAg)进行检测 ,并进行统计学分析。混合抗原没有降低相应单价抗原的各项细胞免疫反应强度 ,且较单一 ,HBsAg表现出了显著的抗原特异性T淋巴细胞和Th2细胞增殖作用 (P <0 .0 5 )。混合抗原表现出良好的细胞免疫反应原性 ,同时可能辅助B细胞 ,增强体液免疫应答能力。     

乙脑E蛋白与结核杆菌HSP70的融合蛋白对BALB/c小鼠特异性免疫的影响

研究酵母表达的乙脑病毒(JapaneseEncephalitisvirus)E蛋白主要抗原片段与结核杆菌热休克蛋白70 (hsp70 )形成的融合蛋白对小鼠细胞免疫和体液免疫的影响。采用腹膜内注射蛋白的方法免疫小鼠,以直接免疫E蛋白主要抗原片段和以E蛋白主要抗原片段和单独表达的hsp70两者均以5 0pmol的量进行混合后的蛋白免疫的小鼠作为对照,用半定量RT PCR检测细胞免疫因子IL 2mRNA的水平,IL 2是细胞介导的免疫反应和巨噬细胞激活中的关键分子,MTT法检测淋巴细胞的增殖情况以及通过ELISA检测抗体水平,从这3个方面来评价融合与未融合蛋白以及等量混合后的免疫效果。结果E蛋白主要抗原片段与结核杆菌hsp70重组后,mIL 2 ,淋巴细胞的增殖以及抗体水平均较重组前明显升高,因此,以乙脑E HSP70融合蛋白免疫能增强小鼠针对E蛋白主要抗原片段的细胞免疫和体液免疫     

小鼠对天花粉蛋白体内及体外免疫应答的基本特点

C 57 BL/6 J小鼠在应用弗氏全佐剂或铝矾为佐剂结合天花粉蛋白免疫后都能引起抗原特异的IgE类抗体的反应以及其它Ig类抗体的反应;IgE的滴度和总的抗天花粉蛋白抗体的滴度的动态变化趋势基本一致,但并不完全同步。IgE类上升得较IgG等类抗体为慢,但上升的速度要快。脾和肠系膜淋巴结细胞分泌抗体的动态变化也和血清并不完全一致。天花粉蛋白在一定浓度下能抑制小鼠T淋巴细胞在体外的抗原特异的增殖反应和ConA反应。这抑制并不限于增殖过程的启动。补充外源性的IL-2也不能消除这抑制作用。天花粉蛋白加热变性后丧失了对小鼠淋巴细胞的毒性,并能引起经未变性天花粉蛋白体内致敏的小鼠的T淋巴细胞在体外的明显增殖。应用微量的天花粉蛋白为抗原,以及少量的无凝集素的conA条件培液等能在体外诱发致敏的B淋巴细胞产生二次抗体应答。     

妊娠期间的结核菌素试验与卡介苗接种

<正> 曾接种过卡介苗(BCG)的第三世界民族的妊娠保健人员,其结核菌素(Tuberculn,TB)皮肤试验的转归,是复杂而具多因素的。主要问题有:(一)TB皮肤试验对孕妇是否安全?纯化蛋白衍生物(PPD)结核菌素注射局部皮内后,在一小时内,大部分由淋巴细胞清除。剩余部分由巨噬细胞吞噬。未致敏     

水苏冲剂免疫调节作用的研究

目的研究以水苏糖为主要功能组分的水苏冲剂的免疫调节作用.方法通过实验鼠进行免疫调节实验,观察该微生态调节剂的作用.结果细胞免疫功能测定:小白鼠迟发型变态反应(DTH)结果为阳性;ConA诱导小白鼠脾淋巴细胞转化试验(MTT)结果为阳性.体液免疫功能测定:(1)抗体生成细胞检测(PFC)结果为阳性,(2)血清溶血素测定结果为阳性.单核-巨噬细胞功能测定:小白鼠碳粒廊清试验结果为阴性;小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验结果为阴性.脏/体比值测定结果为阴性.结论该次实验观察到"水苏牌水苏冲剂"对小白鼠细胞免疫和体液免疫功能试验结果均为阳性,故证明"水苏牌水苏冲剂"具有免疫调节作用.     

重组CHO细胞乙肝表面抗原诱导小鼠细胞免疫应答的研究

为了研究重组CHO细胞乙肝表面抗原(CHO-rHBsAg)在小鼠中诱导T细胞免疫应答的能力,全面评价疫苗的免疫原性,以CHO-rHBsAg免疫BALB/c小鼠,常规制备小鼠脾脏淋巴细胞并在体外以抗原或特异多肽刺激;采用ELISA法测定抗原特异性T淋巴细胞分泌的细胞因子,乳酸脱氢酶法(LDH)测定抗原特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)活性,酶联斑点法(ELISPOT)测定CTL频数(CTLp),应用流式细胞仪分析T淋巴细胞亚群。结果显示,rHBsAg可在小鼠中诱导Th1及Th2类细胞因子;加铝佐剂的rHBsAg较未加佐剂的抗原可诱导较高水平的IFN-γ、CTL克隆及较高百分比的CD8+T淋巴细胞亚群。重组CHO细胞来源的HBsAg可在BALB/c小鼠中诱导一定程度的细胞免疫应答。     

乳杆菌对牛乳β-乳球蛋白致敏小鼠淋巴细胞分泌Th1/Th2型细胞因子和抗体的体外影响

为了分析乳杆菌对致敏小鼠脾淋巴细胞分泌Th1/Th2细胞因子及抗体的体外影响,用牛乳β-乳球蛋白腹腔注射BALB/c小鼠建立过敏症模型,造模成功后,分离致敏小鼠的脾淋巴细胞并与4种活/死乳杆菌(107 CFU/mL)体外共同孵育,ELISA法检测细胞上清液中细胞因子(IL-12、IFN-γ和IL-4)和抗体(总IgE、β-Lg特异性IgE和总IgG)含量。4种活/死乳杆菌均可体外调节致敏小鼠脾淋巴细胞分泌细胞因子和抗体的水平,特别是热致死的发酵乳杆菌和嗜酸乳杆菌可提高淋巴细胞IL-12和IFN-γ的分泌,抑制IL-4的分泌,使其IFN-γ/IL-4比值(代表Th1/Th2细胞平衡)高于活菌,与空白对照组比较差异显著(P<0.05)。同时,这两株热致死菌还可显著下调细胞上清液中总IgE、特异性IgE和总IgG抗体的浓度(P<0.05)。试验结果表明乳杆菌可提高牛乳β-乳球蛋白致敏小鼠脾淋巴细胞的IFN-γ/IL-4比值,进而纠正Th2占优势的Th1/Th2失衡,下调抗体分泌量,且具有菌株特异性。     

半胱胺盐酸盐减缓山羊手术后细胞免疫抑制效应的实验研究

16只摄食干草+精料日粮的成年阉公山羊随机分为试验(n=8)和对照组(n=8)分别接受瘤胃、十二指肠两次瘘管安装手术.试验组自手术前至试验结束给予口服半胱胺(15 mg·kg·goat-1·d-1)处理.两组分别于手术前1天、第一次(瘤胃瘘管)手术后第8天,第二次(十二指肠瘘管)手术后第4天和第13天经颈静脉采血,测定血清白细胞介素-2(IL-2)、考的松(Cortisol)浓度和淋巴细胞转化率(SI).手术前,试验和对照组之间IL-2(0.82±0.1 vs1.03±0.22 μg/L)、Cortisol浓度(20.48±4.52 vs20.80±9.93μg/L)、淋巴细胞转化率(90.72±7.25 vs 129.22±18.59)没有显著差异(p＞0.05).手术后对照组血清IL-2浓度(p＜0.05)和外周淋巴细胞转化率(p＜0.05)严重下降,Cortisol浓度上升(p=0.08);试验组各指标变化不大.两组相比,试验组IL-2浓度高于对照80-90%(p＜0.05),淋巴细胞SI高3倍左右(p＜0.05);Cortisol浓度则呈减少趋势(p=0.11).结果表明半胱胺制剂阻止手术后山羊外周白细胞介素-2和淋巴细胞的降低,减轻手术应激对细胞免疫的抑制.     

仿刺参多糖抗肿瘤及对荷瘤小鼠免疫调节作用

目的 观察仿刺参多糖(AJPS)抗肿瘤及免疫调节作用.方法 采用MTT法检测AJPS对人肝癌HepG-2细胞抑制率;以Hca-F肝癌小鼠为模型,采用MTT法、放免法测定荷瘤小鼠细胞免疫指标.结果 AJPS抑制HepG-2细胞生长,抑制小鼠移植瘤生长;增强脾淋巴细胞和巨噬细胞活性,促进TNF-α和IL-2的产生.结论 AJPS具有对HepG-2细胞的直接杀伤作用;AJPS对荷瘤小鼠有免疫调节活性,在肿瘤的免疫治疗中发挥作用.     

流行性出血热冻干致敏人O型血球的研制及其应用

本文应用致敏的人O型血球研究反向间接血凝(RPHA)和反向间接血凝抑制(RPHI)方法用以检测流行性出血热抗原抗体,并试验成功用pH9.0硼酸盐水制备灭活鼠脑病毒液作为抗原。为抗原制备提供了一种简便的方法。以上RPHA法用于检测组织培养内病毒与用荧光法检测细胞内病毒抗原法结果一致,用RPHI检测病人血清抗体效价,特异性高,敏感性与IFA相同。该致敏血球和抗原是冻干制品,稳定性好、使用方便,是一种代替荧光检测病毒抗原和抗体的良好制品。