不同生长阶段家蚕1-脱氧野尻霉素富集与食桑量的相关性研究

为了研究家蚕富集1-脱氧野尻霉素(DNJ)的机制,采用柱前衍生化高效液相色谱法分析不同生长阶段家蚕及其代谢产物和所食桑叶中DNJ的含量,研究家蚕幼虫体1-脱氧野尻霉素富集与食桑量的相关性。结果显示不同生长期家蚕及其副产物中DNJ的累积量有较大差异,且呈一定规律性变化,先上升后下降,于四龄时最高。家蚕幼虫期蚕体及其副产物中DNJ总累积量与其在该阶段所食桑叶中DNJ总量相当,且家蚕的任一成长发育阶段(蚁蚕和熟蚕不吃桑叶除外),其蚕体DNJ含量均大大高于桑叶中的DNJ含量,表明家蚕具有累积或富集DNJ的机能,本研究结果为进一步研究家蚕富集DNJ的机制提供了理论依据。     

应用比色法检测枯草芽孢杆菌变异菌株中1-脱氧野尻霉素含量

为寻找测定枯草芽孢杆菌黑色变种突变株Bacillus subtilis var.niger-231(B-231)的发酵液中1-脱氧野尻霉素(1-Deoxynojirimycin,DNJ)的新方法并提高其产发酵液中DNJ的含量。在有铜离子的存在下,DNJ与二硫化碳反应,用有机溶剂对产物萃取后在440 nm进行光度测定,得到DNJ含量。再采用紫外诱变方法处理突变株B-231。绘制了检测DNJ标准品的标准曲线,对测定DNJ的新方法做了精密度、灵敏度、准确度以及产物的稳定性的探讨,设计正交试验优化了反应条件,并将此方法运用到细菌发酵液中DNJ含量的测定中,通过遗传诱变手段处理原始细菌B-231,最终筛选到一株高产DNJ的菌株,命名为B.subtilis var.niger-431(B-431),DNJ含量达87.3 mg/L,其产生DNJ的量较原始菌株原突变株提高了4.2倍。首次提出了一种快速测定细菌发酵液中的1-脱氧野尻霉素的新方法,紫外诱变手段使细菌产生DNJ的能力有较大提高。     

应用柱前衍生化高效液相色谱法开辟了一种简单、快速的DNJ产生菌的筛选途径

【目的】应用柱前衍生化高效液相色谱法筛选产1-脱氧野尻霉素(DNJ)菌株,并对其进行系统鉴定。【方法】利用芴甲氧酰氯(FMOC-Cl)柱前衍生化高效液相色谱法筛选DNJ产生菌;通过形态特征、培养特征、生理生化特征以及16S rRNA序列相似性分析等多项分类方法对DNJ产生菌进行鉴定;在10 L发酵罐水平进行发酵研究,利用FMOC-Cl柱前衍生化高效液相色谱法测定DNJ含量。【结果】从80株具有α-糖苷酶抑制剂活性的土壤放线菌中筛选得到一株DNJ产生菌,菌株编号为PW409,初步确定为戈壁三素链霉菌(Streptomyces gobitrici);发酵研究表明,DNJ为链霉菌PW409的次级代谢产物,发酵液中DNJ浓度为12.1 mg/L。【结论】首次将FMOC-Cl柱前衍生化高效液相色谱法应用于DNJ产生菌的筛选,并首次报道从戈壁三素链霉菌发酵液中鉴定到DNJ。     

沉淀聚合法制备1-脱氧野尻霉素分子印迹聚合物微球及其性能研究

本研究制备了1-脱氧野尻霉素分子印迹聚合物微球,考察溶剂、反应时间对分子印迹聚合物产率以及性能的影响。以1-脱氧野尻霉素为模板分子,α-甲基丙烯酸(MAA)为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)为交联剂,采用沉淀聚合法合成分子印迹微球,采用静态吸附及扫描电镜(SEM)的方法对微球进行表征。结果表明,当反应时间为24 h、乙腈为溶剂时,所制得印迹聚合物微球的形貌和吸附性能较好,对1-脱氧野尻霉素与N-甲基-1-脱氧野尻霉素的选择性分离因子α为2.26,说明分子印迹聚合物微球对1-脱氧野尻霉素分子有特异性吸附和识别能力。     

桑枝中脱氧野尻霉素的提取及其降血糖效果的研究

从桑不同组织部位中提取1-脱氧野尻霉素（DNJ）,测定其含量,并通过动物实验分析桑枝提取液的降血糖效果。结果表明：桑芽、桑枝和发芽前桑皮中DNJ含量高于桑根和发芽后桑皮,而桑枝的DNJ含量最高,可达0．15％。60℃、80％乙醇、时间2h为夏伐桑枝中DNJ的最佳提取条件,提取率达0．176％。而在同等条件下,乙醇溶剂的提取效果好于蒸馏水。灌胃等量桑枝水提液、二倍量桑枝水提液、盐酸二甲双胍片的高血糖小白鼠组的血糖值四周后分别下降了7．63％、15．72％、18．41％,说明桑枝提取液有明显的降血糖效果。     

反相高效液相色谱法测定不同品种花椒中芦丁和槲皮素的含量

目的:建立RP-HPLC测定花椒中芦丁与槲皮素含量的方法,并对不同种花椒的中芦丁与槲皮素含量进行测定与比较。方法:Zorbax Eclipse C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相∶甲醇-0.4%磷酸(50∶50);流速1 mL/min;检测波长:360 nm;柱温25℃。结果:芦丁在0.25~5.0μg,r=0.999 9峰面积与质量浓度呈良好的线性关系;平均回收率为99.1%,RSD为4.3%(n=3)。槲皮素在0.25~0.5μg,r=0.999 9峰面积与质量浓度呈良好的线性关系;平均回收率为111.2%,RSD为5.1%(n=3)。结论:该方法可用于花椒中芦丁和槲皮素的测定。测定结果表明,韩城红花椒中芦丁含量最高,茂汉红花椒次之,四川青花椒较少,云南青花椒最低。槲皮素在韩城红花椒中含量较高,在其他三种花椒中差别不大。     

高效液相色谱法测定降糖1号胶囊中淫羊藿苷的含量

目的:建立测定降糖1号胶囊中淫羊藿苷含量的方法。方法:室温条件下超声提取降糖1号胶囊中的淫羊藿苷,用D101大孔吸附树脂柱纯化提取物,高效液相色谱法(HPLC)测定含量,色谱柱:Hypersil ODS2(4.6mm×200mm,5μm);流动相:乙腈-水(30:70);流速:1ml/min,检测波长270nm;柱温:30℃。结果:淫羊藿苷的进样量在0.08μg-0.28μg范围内线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率(n=6)为96.66%,RSD为2.14%。结论:该方法简便、准确、重复性好,可用于降糖1号胶囊的质量控制。     

高效液相色谱法测定消瘀跌打药酒中姜黄素的含量

目的建立高效液相色谱法测定消瘀跌打药酒中姜黄素的含量。方法采用Agilent Eclipse XDB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-4%冰醋酸溶液(47∶53),检测波长430 nm,流速为1 ml·min~(-1),柱温为30℃。结果姜黄素的进样浓度在0.2114～5.2850μg·ml~(-1)范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系,回归方程:Y=1.4044X-0.0780(r=0.9997);平均加样回收率为99.57%,RSD=1.19%(n=6)。结论该方法稳定、简便,可用于消瘀跌打药酒的质量控制。     

新药23-羟基白桦酸的含量及其他三萜的RP-HPLC测定

目的:建立23-羟基白桦酸及有关物质的RP-HPLC测定方法。方法:高效液相色谱法,色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18(250 mm×4.60 mm,5μm),流动相:乙腈-0.2%醋酸水溶液(62∶38),流速为0.8 mL.min-1;检测波长204 nm。结果:23-羟基白桦酸进样量与峰面积呈良好线性关系,线性范围为0.20~4.0μg,r=0.999 9(n=5);回收率为97.4%~104.7%(n=9)。结论:本法快速,简便,重复性好,可用于23-羟基白桦酸的含量测定和有关物质检查。     

RP-HPLC法测定茜草中1,3,6-trihydroxy-2-methylanthraquinone-3-O-[3-O-acetyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside]的含量

首次采用反相高效液相色谱法测定茜草根中1,3,6-trihydroxy-2-methylanthraquinone-3-O-[3-O-acetyl-αL-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside]的含量.色谱柱为Purospher star RP C18色谱(250 mm×4.6mm,5 μm),流动相为甲醇:水:四氢呋喃(65:34.7:0.3),流速为1.0 mL/min,检测波长为276 nm,柱温为25℃.该方法的线性范围为0.020～0.160μg,r=0.9998,平均回收率为101.5%,RSD为2.0%(n=6).该方法测定1,3,6-trihydroxy-2-methylanthraquinone-3-O-[3-O-acetyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside]含量灵敏、准确、重现性好.     

Simple and rapid determination of 1-deoxynojirimycin in mulberry leaves

A simple and rapid method for determining 1-deoxynojirimycin (DNJ), a potent glucosidase inhibitor present in mulberry leaves (Morus alba and Morus bombysis), by high performance liquid chromatography coupled to an evaporative light scattering detector (ELSD) has been developed. DNJ was separated from extract of mulberry leaves on TSK gel Amide-80 column, which is a representative column for hydrophilic interaction chromatography. During post column detection, DNJ was detected by ELSD and concurrently identified by mass spectrometry. The detection limit was 100 ng. This method is sufficiently sensitive for determining DNJ in mulberry leaves and other related products.     

HPLC法分析不同年限及不同部位掌叶大黄9种成分的积累特征

为研究不同年限及部位掌叶大黄9种成分含量及其变化特征。利用HPLC法进行分析,色谱柱为武本C18 (5μm,4.6 mm×250 mm),流动相为甲醇-磷酸水(0.2%),检测波长260 nm,柱温30℃,体积流量1.0 mL/min,进样量10μL。线性范围良好(R^2>0.995),精密度、稳定性、重复性RSD均小于2%,加样回收率97.30%~108.20%。含量分析表明:同一部位,随着年限增加,除根中没食子酸、根茎中大黄素、叶片中大黄酚的含量无变化外,其他8成分的含量均随年限增加而增加或者第4年增加、第5年无显著变化。同一年限,大黄酚-8-O-葡萄糖苷、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量次序为根>根茎>叶片;3年生芦荟大黄素,4年生没食子酸、番泻苷B叶片中含量与根中大致相等且高于根茎;5年生大黄素-8-O-葡萄糖苷的含量次序为叶片>根茎>根,根与根茎中没食子酸、大黄酚的含量相当且高于叶片。本实验成功建立简便快捷、重现性好的HPLC分析方法,明确了不同年限及部位掌叶大黄9种成分积累特征,为大黄质量评价和药材高效生产提供理论依据。     

额济纳绿洲胡杨（Populus euphratica）酚类物质含量和分布及其与土壤水分的关系

采用分光光度法测定了额济纳绿洲胡杨(Populus euphratica)的披针形叶、卵圆形叶、嫩枝、枝(D《5 mm)、枝(5～10 mm)、主干树皮、根(D《2 mm)、根(2～5 mm)和根(5～10 mm)9类器官中的总酚、黄酮和缩合单宁含量.结果表明,总酚含量较高的器官为皮(27.93 mg/s),叶、根、枝中总酚含量分别为17.64 mg/g(两类叶均值)、16.72mg/g(三类根均值)、12.19 mg/g(三类枝均值);黄酮含量较高的器官为皮(51.30 mg/g),叶、根、枝中黄酮含量分别为28.45 mg/g(两类叶均值)、39.99 mg/g(三类根均值)、23.67 mg/g(三类枝均值);根中缩合单宁含量较高,三类根均值为22.10 mg/g,皮、叶、枝中缩合单宁含量分别为8.41 mg/g、4.03 mg/g(两类叶均值)、4.47 mg/g(三类枝均值).披针形叶和卵圆形叶中酚类物质含量没有显著性差异(P》0.05);随着枝不断成熟,嫩枝、枝(D《5mm)、枝(5～10mm)中酚类物质逐渐减少;随着根直径减少,根中缩合单宁逐渐增加,细根(D《2mm)中的缩合单宁含量最高(25.95 mg/g).分析胡杨各器官中酚类物质含量与土壤水分的关系,结果表明卵圆形叶中酚类物质含量与土壤水分含量成显著负相关关系(P《0.05,总酚:r=-0.949;黄酮:r=-0.923;缩合单宁:r=-0.944).研究揭示了极端干旱地区胡杨各器官中酚类物质的变化规律,及其与环境因子的相互作用关系.     

魔芋中神经酰胺类物质的HPLC-ELSD分析及其含量测定

建立高效液相色谱-蒸发光散射检测器分析神经酰胺的方法并进行了含量的测定.色谱柱:ZORBZX Eclipse XDB-C18(4.6mm×250mm,5μm),洗脱方法:梯度洗脱,柱温:35℃,流动相:甲醇/水,流速:1ml/min;检测器:蒸发光散射检测器,漂移管温度:40℃,氮气流速:1.5L/min.系统探讨了梯度洗脱的起始浓度、洗脱的时间和洗脱梯度的程序设置,最佳的梯度洗脱条件为5min内,甲醇浓度从60%线性增加为90%,从5min到25min,甲醇浓度线性增加为95%,在此条件下样品和标准品的分离色谱峰对称性较好.随后测定了各种样品中神经酰胺的含量,并进行了方法学验证,结果神经酰胺在0.2～2μg之间线性关系良好,最低检测限为0.01mg/ml,R2=0.9992;平均回收率为93.3%,RSD=1.65%(n=5).本法灵敏、方便、准确,重现性好,可用于魔芋神经酰胺类物质的分离及其含量的测定.     

Determination of iminosugars in mulberry leaves and silkworms using hydrophilic interaction chromatography-tandem mass spectrometry

Mulberry 1-deoxynojirimycin (DNJ, a potent α-glycosidase inhibitor) has been investigated thoroughly for its analytical methods and therapeutic potential against diabetes, whereas little attention has been given to other iminosugars such as 2-O-α-d-galactopyranosyl-DNJ (GAL-DNJ) and fagomine. For instance, concentration and composition of these iminosugars in mulberry leaves as well as sericulture products have not been fully characterized due to lack of suitable analytical methods. Here we developed a simultaneous determination method for DNJ, GAL-DNJ, and fagomine using hydrophilic interaction chromatography (HILIC) with tandem mass spectrometry (MS/MS). When mulberry leaf extracts were subjected to HILIC-MS/MS with multiple reaction monitoring (MRM), individual iminosugars could be separated and detected. The developed method is sufficiently sensitive for determining iminosugars in mulberry leaves as well as silkworms, providing new information (e.g., different amounts of iminosugars in mulberry leaf varieties; high DNJ and low GAL-DNJ in the silkworm body, especially in the blood) that is useful for producing iminosugar-rich products for nutraceutical purposes.     

梯度洗脱高效液相色谱法测定桑叶中3种活性成分的含量

建立同时测定桑叶中绿原酸、芦丁和槲皮素含量的分析方法。色谱柱为NUCLEODUR C18 RP(250 mm×4.6 mm,5μm),光电二极管检测器,流动相为甲醇-质量分数0.5%磷酸水溶液,梯度洗脱程序为0 min(30:70)-15min(30:70)-25min(50:50)-35min(85:15)-40min(30:70);流速0.8 ml.min-1,检测波长为350 nm。绿原酸、芦丁和槲皮素的线性范围分别为0.1144~1.0296μg(r=0.9996)、0.0436~0.3924μg(r=0.9999)和0.0452~0.4068μg(r=0.9997),平均回收率分别为97.7%(RSD=1.7%)、98.4%(RSD=2.2%)和100.6%(RSD=1.5%)。方法快速简便,专属性强,重复性好,可作为桑叶中绿原酸、芦丁和槲皮素的定量分析方法。     

Comparisons of accumulation and excretion of iminosugars among mulberry-feeding specialist Bombyx larvae and non-specialist larvae

Silkworms (Bombyx mori L.) accumulate 1-deoxynojirimycin (DNJ), a mulberry iminosugar, by feeding on mulberry leaves. DNJ is a potent α-glucosidase inhibitor that helps prevent diabetes. However, iminosugars are toxic to many insects. In this study, we analyzed the concentrations of three major mulberry iminosugars—DNJ, 2-O-α-d-galactopyranosyl-DNJ (GAL-DNJ), and fagomine—in the larvae of mulberry-feeding insect species (two mulberry specialists and six non-specialists), to clarify the differences in accumulation, metabolism, and excretion of iminosugars between specialists and non-specialists. DNJ and fagomine concentrations in the two Bombyx larvae were much higher than those in the other larvae. GAL-DNJ concentrations were low in all species. DNJ and fagomine concentrations in the excrements of Agrotis segetum (Denis and Schiffermüller) and Sarcopolia illoba (Butler) larvae were lower than in those of the other larvae. Further, iminosugar concentrations in the hemolymph of B. mori, B. mandarina Moore, and S. illoba larvae were analyzed. DNJ and fagomine concentrations in the hemolymph of the two Bombyx larvae were much higher than in that of S. illoba. DNJ concentrations in the whole bodies of the two Bombyx larvae decreased as they developed. Similarly, DNJ, and fagomine concentrations in the hemolymph of B. mori larvae decreased with growth.     

HPLC测定葛花中6″-O-木糖鸢尾苷的含量

本文建立了葛花中6″-O-木糖鸢尾苷含量测定的HPLC方法。采用GRACE C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-水梯度洗脱,流速为0.8 mL/min,紫外检测波长为265 nm,柱温为室温。6″-O-木糖鸢尾苷的峰面积(Y)与浓度(X)在10.33～185.99μg/mL范围内线性关系良好,Y=30731X–216635,r=0.9992(n=7);平均回收率为100.2%,RSD<2%(n=9);测得8批葛花药材中6″-O-木糖鸢尾苷含量为11.08～48.23 mg/g。方法学验证结果表明该法准确、可靠,可用于葛花中主要成分6″-O-木糖鸢尾苷的含量测定。     

八角茴香春果和秋果以及不同部位的莽草酸含量分析

采用HPLC法对不同季节和不同部位的八角茴香药材主成分莽草酸的含量进行分析,发现枝条、叶片、春果、秋果的莽草酸含量依次为2.64%、4.94%、8.63%、12.16%;色谱条件:Venusil HILIC(5μm,4.6 mm×250 mm)色谱柱,流动相:乙腈-0.5%三氟乙酸(95:5),流速1.0 mL·min~(-1),检测波长为210 nm。莽草酸进样量在0.001～6μg范围内线性关系良好。莽草酸的线性回归相关系数r=0.9984,平均回收率为98.4%,相对标准偏差(RSD)为1.26%。该研究为制定八角茴香药材质量检测标准提供了简便、快速、准确的方法。     

大气氟污染源附近食桑昆虫中氟的积累和分布

对大气F污染源附近野桑蚕,桑赤蠖和桑蚕体内的氟化物含量和器官分布进行了研究,结果表明,污染源附近食桑昆虫体有较高的氟化物含量,且食桑昆虫体的氟化物含量随着离污染源的距离增大而降低,野桑蚕,桑赤蠖和桑蚕的氟化物含量与桑叶的氟化物含量有极显著的线性正相关性,食桑昆虫不同器官间的氟化物积累量也存在较大差异,其消化管是食桑昆虫的主要氟化物积累器官。