葡萄叶中总黄酮的提取工艺研究

目的：从葡萄叶中提取总黄酮。方法：采用正交试验法研究葡萄叶总黄酮的最佳提取工艺条件,考察了乙醇浓度、回流温度、回流时间及料液比四因素对葡萄叶总黄酮提取率的影响。结果：确立了葡萄叶总黄酮最佳提取条件为：45％的乙醇为溶剂、液料比为1：40、提取温度为60％、提取时间2h,在最佳工艺条件下葡萄叶总黄酮含量为5．329mg／g。     

莲子心总黄酮的超声波萃取工艺研究

研究了超声波萃取法从莲子心中提取总黄酮的最佳工艺。通过单因素控制法和正交试验,以乙醇为溶剂,总黄酮提取率为考察指标,在超声波辅助下研究了乙醇浓度、提取时间、料液比和提取温度对总黄酮提取率的影响。结果表明影响莲子心中总黄酮提取率的主要因素是乙醇的浓度,其次依次为提取温度、料液比、超声波萃取时间;提取的最佳条件是:乙醇的浓度为60%,提取温度是70℃,料液比为1:24,超声波萃取时间为30 min,此条件下得到的总黄酮的提取率是10.86 mg/g。     

正交试验法优选三七茎叶中总黄酮的提取工艺

目的：从三七茎叶中提取总黄酮。方法：采用正交试验法研究三七茎叶总黄酮的提取工艺,考察了浸提用水的pH值、浸提温度、浸提时间、浸提次数、液料比五个因素对三七茎叶总黄酮提取率的影响。结果：确立了三七茎叶总黄酮最佳提取条件为：用pH10的稀碱水作溶剂,液料比30：1,浸提温度为80℃,回流提取2次,提取时间为每次40min。     

正交试验法优选烟草中辅酶Q10的匀浆提取工艺

以烟草叶片为原料,用正交试验法优化了烟草中辅酶Q10的匀浆提取工艺,考察了匀浆时间、乙醇体积分数、液料比和提取次数4个因素对辅酶Q10提取率的影响,确立了烟草中辅酶Q10的优化匀浆提取工艺条件为:提取溶剂为85%乙醇,匀浆时间6 min,液料比9∶1(mL/g),提取次数2次。将该法与索氏提取进行了对比。结果表明,匀浆提取烟草中辅酶Q10的提取率为12.82μg·g-1,与索氏提取的提取率相当,但匀浆提取所用提取时间短,提取溶剂用量少,因此匀浆法具有明显的优势。     

超声波法提取野生石蒜中加兰他敏

石蒜是我国丰富的野生资源之一,其鳞茎富含重要药用成分加兰他敏。为了获得石蒜中加兰他敏的超声波提取方法,以野生石蒜为原料,用乙醇作提取剂,探讨了超声波提取加兰他敏的工艺条件,并与常规溶剂法进行了比较。分析了料液比、超声波功率、提取温度、提取时间、提取次数等因素对加兰他敏提取效果的影响,运用正交实验L9(34)确定了最佳提取工艺条件。结果显示,超声波提取加兰他敏的最佳工艺条件为:料液比1:6,超声波功率250 W,提取温度60℃,提取时间1.5 h,提取2次;加兰他敏的提取率为94.6%,产率为0.0543%;提取物中加兰他敏含量为15.53%。与常规溶剂法相比,超声波法具有用时少、提取率高、提取次数少等优点,整体效果优于常规溶剂法。     

红松树皮中原花青素提取工艺研究

采用溶剂回流提取的方法,以红松树皮中原花青素的提取率为考察指标,考察了提取溶剂种类、溶剂浓度、提取温度、料液比、提取时间、提取次数等因素对原花青素提取效果的影响.通过正交实验,确定红松树皮中原花青素的最佳提取工艺条件为:提取溶剂60%乙醇,提取温度50℃,料液比1:7,提取时间60 min.     

枇杷叶中黄酮类化合物提取工艺研究

以枇杷叶为原料,对黄酮类化合物的提取工艺进行研究,考察乙醇浓度、提取温度、提取时间、料液比对枇杷叶中黄酮类化合物提取率的影响,并采用正交实验进行优化。结果表明四种因素对枇杷叶中黄酮类化合物提取率影响的大小顺序为:乙醇浓度>提取时间>提取温度>料液比,枇杷叶中黄酮类化合物提取的最佳工艺条件为提取时间30min、提取温度80℃、乙醇浓度40%、料液比1:20(g/mL),最佳条件下黄酮类化合物提取率为6.92%。     

响应面法优化超声波法提取红枣多糖工艺

以新郑红枣为原料,利用响应面法优化超声波提取红枣多糖工艺。以红枣多糖的提取率为参考指标,研究料液比、提取次数、提取时间3个因素对红枣多糖提取率的影响。在单因素试验的基础上,利用Box-Behnken中心组合试验设计及响应面分析,对料液比、提取次数和提取时间进行优化组合,考察3个因素对红枣多糖提取率的影响。结果表明:提取红枣多糖的最佳工艺条件为液料比16∶1(m L/g)、提取次数2次、提取时间38 min,在此最佳条件下,红枣多糖的实际提取率为7.25%;证明此工艺可应用于红枣多糖的大规模提取。     

基于绿色低共熔溶剂法高效提取鸡骨草中的黄酮和皂苷

为了研究鸡骨草中总黄酮和总皂苷的最佳提取工艺,通过单因素试验和星点设计-响应面法,对低共熔溶剂的性质(如种类、组分摩尔比、含水量)、提取温度、提取时间、液料比等多个因素进行考察。结果显示,总黄酮的最佳提取条件为:摩尔比1∶2、含水量30%的氯化胆碱/乙二醇作溶剂,提取温度80℃,提取时间40min,液料比15∶1(mL/g);总皂苷的最佳提取条件为∶摩尔比1∶4、含水量25%的氯化胆碱/乳酸作溶剂,提取温度80℃,提取时间64min,液料比56∶1(mL/g)。在最佳条件下,总黄酮和总皂苷的提取率较传统提取溶剂分别提高了33.3%和96.4%。本研究为鸡骨草中黄酮和皂苷的高效、安全提取提供了一条新思路。     

银耳子实体多糖高温高压提取工艺研究

通过对银耳子实体多糖高温高压提取工艺中,提取温度、料液比、提取时间,提取次数等影响因素的实验分析,确定银耳子实体多糖高温高压提取的最佳条件为:提取温度110℃(对应压力0.04 MPa);料液比为1∶70;提取时间为2 h;提取次数为2次,在此条件下,银耳子实体多糖提取率可达36.5%。     

益生菌的功能基因导入和基因编辑

益生菌已经在临床和食品领域应用多年,其安全性和有效性已经获得人们的认可。随着分子生物学技术的发展,采用益生菌作为载体进行基因导入或基因编辑,这些遗传改造的益生菌一部分已经作为新的药品或疫苗进入到临床应用阶段。携带功能基因的益生菌定殖于肠道进行表达和缓慢释放,这类益生菌作为活体药物获得益生菌和功能基因的双重功效,可用于治疗某些疑难病症。携带蛋白质抗原基因的益生菌定殖于肠道进行表达,可诱导肠道黏膜免疫、细胞免疫和体液免疫,这是一条更安全的口服疫苗途径。成簇的规则间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)及其相关蛋白(CRISPR-associated protein,Cas)以其高效与便捷性推动了益生菌基因编辑的发展。这篇综述介绍了CRISPR-Cas9操作系统在益生菌方面的应用。对传统遗传操作较难的益生菌采用CRISPR-Cas9技术进行基因编辑,使其基因敲除和基因突变,基因敲入和基因调控等更为简单、高效和易操作。这些CRISPR/Cas9、CRISPRa和CRISPRi技术在益生菌的基因表达调控和代谢工程等领域具有巨大的应用潜力,例如医药、食品以及工业等相关重要产品的获得。本文总结了益生菌基因导入和基因编辑在生物制品生产中的相关应用,最后对其未来的研究方向进行展望。     

CRISPR/Cas9系统的分子机制及其在人类疾病基因治疗中的应用

CRISPR/Cas系统是广泛存在于细菌和古生菌中的适应性免疫系统,用来抵抗外来病毒或质粒的入侵。近几年,由Ⅱ型CRISPR/Cas适应性免疫系统改造而来的CRISPR/ Cas9基因组编辑技术蓬勃发展,被广泛地应用于生命科学研究的各个领域,并取得了革命性的变化。文章主要综述了CRISPR/Cas9基因组编辑技术的起源与发展及在生命科学各研究领域的应用,重点介绍了该系统在人类疾病基因治疗方面的最新应用及脱靶效应,以期为相关领域的科研人员提供参考。     

基于CRISPR/Cas9的基因编辑技术研究进展及其在植物中的应用

CRISPR/Cas9技术是利用RNA靶向引导Cas9核酸酶对基因组中的目标基因进行编辑的生物技术。近年来, 该技术的多种新型基因编辑器更新迅猛, 编辑效果愈加精细和高效, 在作物定向分子设计育种中展现出巨大的应用前景。该文对CRISPR/Cas9及其相关编辑器的技术原理、编辑效果和应用情况进行综述, 并探讨了该技术在应用中面临的问题、应对措施和发展前景, 旨在为相关领域的科研工作者提供参考。     

CRISPR/Cas9技术在非模式植物中的应用进展

基因组编辑技术的出现对植物遗传育种及作物性状的改良产生了深远意义。CRISPR/Cas(clustered regularly interspaced short palindromic repeat)是由成簇规律间隔短回文重复序列及其关联蛋白组成的免疫系统,其作用是原核生物(40%细菌和90%古细菌)用来抵抗外源遗传物质(噬菌体和病毒)的入侵。该技术实现了对基因组中多个靶基因同时进行编辑,与前两代基因编辑技术:锌指核酶(ZFNs)和转录激活因子样效应物核酶(TALENs)相比更加简单、廉价、高效。目前CRISPR/Cas9基因编辑技术已在拟南芥(Arabidopsis thaliana)、烟草(Nicotiana benthamiana)、水稻(Oryza sativa)、小麦(Triticum aestivum)、玉米(Zea mays)、番茄(tomato)等模式植物和多数大作物中实现了定点基因组编辑,其应用范围不断地向各类植物扩展。但与模式植物和一些大作物相比,CRISPR/Cas9基因编辑技术在非模式植物,尤其在一些小作物的应用中存在如载体构建、靶点设计、脱靶检测、同源重组等问题有待进一步完善。该文对CRISPR/Cas9技术在非模式植物与小作物研究的最新研究进展进行了总结,讨论了该技术目前在非模式植物、小作物应用的局限性,在此基础上提出了相关改进策略,并对CRISPR/Cas9系统在非模式植物中的研究前景进行了展望。     

基于CRISPR/Cas系统的病原微生物检测体系构建研究进展

规律成簇间隔短回文重复序列及其相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein,CRISPR/Cas)自发现以来,其应用范围在不断拓宽。除在基因编辑方面出色的应用能力外,近年来Cas12、Cas13等蛋白反式切割活性的发现,使其在病原微生物快速检测方面也显现出巨大的应用潜力。基于CRISPR/Cas系统建立的病原微生物检测技术具有灵敏度高、特异性强、操作简单等特点,通过设计不同靶向的引导RNA能够对不同的目标进行快速检测,是一种极具应用潜力的检测技术。本文对基于CRISPR/Cas开发的部分代表性病原微生物检测技术类型进行总结。由于引导RNA在CRISPR/Cas系统中具有重要作用,但目前鲜见相关总结文章,本文对部分Cas蛋白引导RNA特点以及特异性靶标的获取也进行了重点阐述,以期为开发基于CRISPR/Cas系统新型病原微生物检测技术提供参考和依据。     

CRISPR/Cas9技术在微生物研究中的应用进展

CRISPR(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats)/Cas(CRISPR associated proteins)系统是在细菌和古生菌中发现的一种RNA指导的降解入侵病毒或质粒DNA的适应性免疫系统。由II型CRISPR/Cas系统改造而成的CRISPR/Cas9技术已经被开发成一种强大的基因组编辑和表达调控工具,并且广泛应用于基因功能研究、代谢工程和合成生物学等领域。本文从CRISPR/Cas9系统的发现过程、分类、作用原理、在微生物研究中的应用进展等方面进行总结,并展望了该技术的应用前景。     

Large fragment deletion using a CRISPR/Cas9 system in Saccharomyces cerevisiae

Large chromosomal modifications have been performed in natural and laboratory evolution studies and hold tremendous potential for use in foundational research, medicine, and biotechnology applications. Recently, the type II bacterial Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeat and CRISPR-associated (CRISPR/Cas9) system has emerged as a powerful tool for genome editing in various organisms. In this study, we applied the CRISPR/Cas9 system to preform large fragment deletions in Saccharomyces cerevisiae and compared the performance activity to that of a traditional method that uses the Latour system. Here we report in S. Cerevisiae the CRIPR/Cas9 system has been used to delete fragments exceeding 30 kb. The use of the CRISPR/Cas9 system for generating chromosomal segment excision showed some potential advantages over the Latour system. All the results indicated that CRISPR/Cas9 system was a rapid, efficient, low-cost, and versatile method for genome editing and that it can be applied in further studies in the fields of biology, agriculture, and medicine.     

基于CRISPR/Cas9的激活系统研究进展

基因编辑技术自问世以来就一直作为生物技术领域的研究热点。基因编辑工具成簇的规律间隔短回文重复序列及其相关系统(CRISPR/Cas系统)具有特异性、简便性和灵活性等优点,为研究人员提供了丰富的遗传操作工具,也让CRISPR/Cas系统的应用在多种生物中得到了飞速发展。特别是将转录激活因子与失活的Cas蛋白结合,可在RNA转录水平实现基因表达特异性调控,为生物技术在医学研究及农业领域的发展做出了重要的贡献。外源基因的过表达是验证基因功能和基因调控的常用方法,然而由于载体容量的限制难以实现多基因过表达。基于CRISPR/Cas9激活系统可在不同向导RNA的引导下对多个基因进行调控,实现调控水平验证基因功能。本文通过对CRISPR/Cas9激活系统组成及不同激活策略进行总结,整理针对过度激活的解决方案,为CRISPR/Cas9激活系统应用于棉花遗传改良及除草剂抗性研究提供更多参考。     

CRISPR/Cas技术在抗除草剂作物育种中的研究与应用进展

CRISPR/Cas系统是一种简单、低成本、高效、精准的基因编辑技术,该技术能够进行基因的定向改造,加速新品种培育进程,在种质资源创制中的应用潜力较高。概述了CRISPR/Cas系统的技术原理及其在作物抗除草剂育种中的应用,简要指出了目前CRISPR/Cas技术在抗除草剂种质创制及应用过程中存在的问题及发展方向,以期为今后利用CRISPR/Cas技术创制抗除草剂新种质提供理论依据。