苎麻不同组织总RNA的有效分离

从植物组织中提取总RNA是进行植物分子生物学某些方面研究的必要前提,通过选用5种不同的试剂,我们找到一种新的RNAplant分离试剂,可以很有效的提取苎麻叶、茎皮、雌花、果的RNA,且质量很好,可以进行cDNA的合成和RT—PCR等下游实验,并对不同试剂提取和多糖、多酚的去除进行了讨论．     

二维液相色谱法在羊草地上部总蛋白分离中的应用

取8周龄羊草的地上部分,用三氯乙酸-丙酮法沉淀总蛋白,沉淀裂解后将缓冲液置换为起始缓冲液,进行第一维色谱聚焦分离。将第一维分离收集的pH值为8.5至4.0之间的组分分别进行第二维无孔硅胶反相高效液相色谱分离,利用ProteoVue软件获得羊草植株总蛋白pI/UV图谱,即羊草植株总蛋白质表达谱。文中对二维液相色谱法分离羊草蛋白质进行了方法学的研究,在第二维分离中尝试用3种不同的洗脱梯度条件进行分离,优化二维液相色谱分离条件并与传统凝胶双向电泳进行了比较,另外还对二维液相色谱的重现性和准确性进行了检验。实验建立了利用二维液相色谱分离羊草总蛋白的技术方法。     

植物病毒双链RNA提取、研究进展

植物病毒病在世界各地广泛分布,大约90%的植物病毒基因组为单链RNA,当病毒侵染植物后利用寄主成分进行复制时,首先产生与基因组RNA互补的链,配对成双链模板,再以互补链为模板转录出子代基因组RNA。而正常的植物中往往不产生,而且ds-RNA对酶具有一定的抗性。通过对植物组织中ds-RNA的分析,可用于植物病毒的检测和诊断等研究。因此,植株中病毒ds-RNA的分离和鉴定,对病毒的研究和基因组解析具有重要意义。     

大叶蛇葡萄多种来源组织RNA提取效果比较

本研究以大叶蛇葡萄为材料,采用RIN值作为总RNA质量评价的主要标准,并结合凝胶电泳图谱和Agilent 2100电泳图谱进行对照分析,比较了大叶蛇葡萄不同采样时间、器官及个体植株的RNA提取效果差异。结果表明:5月份采样中提取的RNA质量优于8月份、10月份;果实中提取的RNA质量优于花和叶;低海拔植株中提取的RNA质量优于高海拔植株。该研究以同一种RNA提取方法为基础,对各种来源的植物材料进行比较分析,为研究植物RNA提取效果的影响因素提供了新的参考。     

一种适用于RT-PCR的杉树类植物中总RNA提取的方法

杉树类植物含大量的多糖、多酚类物质,这使得此植物的总RNA提取较困难。研究通过比较几种有代表性的提取植物总RNA的方法,建立了一种酸酚法和PEG8000沉淀法相结合的改良的CTAB法。此方法操作简单,使用的试剂均为常规试剂,成本低,能够有效去除植物组织中多糖和多酚类等次生物质,从而得到高质量的RNA。使用这种改良的方法制备的总RNA产物对P450基因成功地进行了反转录聚合酶链式反应(reverse transeriptase-polymerase chain reaction,RT—PCR),证明此方法是一种适用于RT—PCR的杉树类植物组织中总RNA提取的方法。     

RNA沉默机制及其抗病毒应用

RNA沉默是发生在植物 (转录后基因沉默或共抑制 )、动物 (RNA干扰 )和真菌 (消除作用 )等真核生物细胞中的一种对外源遗传因子 (转座子、转基因或病毒 )的特异性和高效率的降解机制。随着对植物病毒分子遗传学认识的加深和对寄主防御系统研究的深入 ,发现了许多控制植物病毒病的方法 ,不过迄今为止最为成功的是通过RNA沉默机制获取抗病毒工程植株。在陈述了RNA沉默机制的研究最新进展基础上 ,提出了如何充分利用该机制进行植物抗病毒转基因研究。     

从荞麦中提取总RNA的有效方法

介绍了一种简单快速的从荞麦中提取总RNA的方法。经SDS、KAc和异丙醇等常规试剂提取高纯度的荞麦RNA,对产物进行琼脂糖凝胶电泳分析表明,其28S RNA与18S RNA的比值约为2：1,紫外吸收值A260/A290为1.91-2.06,产率为69.2-87.5μg RNA/g植物材料。用该法提取的总RNA可满足RT-PCR和cDNA文库构建等的需要,是一种高效的荞麦RNA提取法。     

RNA沉默与植物病毒

植物中RNA沉默（RNAsilencing)亦称为转录后基因沉默（PTGS）或共抑制,是植物抵抗外来核酸（转座子、转基因或病毒）入侵,并保护自身基因组完整性的一种防御机制。RNA沉默是近十年来发现的植物界中普遍存在的现象,已成为植物分子生物学领域的一个新的研究方向。对RNA沉默特点和机制的研究表明,植物病毒与（转基因）植物内发生的RNA沉默有着密切的联系,作者从病毒对RNA沉默的诱导、抑制、防御等方面,简述了RNA沉默与病毒的关系。并对病毒载体所诱导的RNA沉默在植物发育和基因组功能分析等方面的应用价值进行了讨论。     

红景天UGTs基因与有效成分含量的相关性研究

本研究采集青藏高原地区不同种的红景天植株,采用改良CTAB法提取红景天总DNA。PCR扩增UGTs基因片段,对扩增产物进行序列测定,分析红景天UGTs基因多态性。同时,采用高效液相色谱法(HPLC)测定不同植株中红景天苷、酪醇、没食子酸的含量,分析三种有效成分的含量差异。结果表明:不同红景天植物UGTs基因序列存在多样性,三种有效成分的含量也存在一定差异。7个样品为7种不同的单倍型,不同种的红景天中有效成分的含量与地理分布有一定的联系,不同植株不同单倍型和同一植株不同单倍型所含的红景天苷、酪醇和没食子酸的含量都存在一定的差异,选用的红景天植物材料所对应的单倍型与红景天苷含量、酪醇含量之间无显著性差异,与没食子酸含量之间差异显著。     

双链RNA和植物对病毒的抗性

双链RNA能诱导转录后的基因沉默,是生物抵御病毒入侵、维持自身基因稳定的一种自我保护机制.把源自病毒的基因构建成反向重复结构转入植物体内,其转录出的RNA会通过分子内序列互补形成双链,将入侵病毒的同源序列降解,使转基因植株获得对病毒的高抗性.RNA干扰型抗病毒转基因植株中,转病毒基因的mRNA不存在或存在量很少,也不会翻译成有功能的病毒蛋白,因此不存在病毒RNA重组、异源包装及协生作用的潜在风险,具有较高的生物安全性.双链RNA抗病毒转基因正在成为一种高效、安全的植物抗病毒策略.     

茶树不同器官组织总RNA提取方法的研究

从茶树组织中提取高质量的总RNA,是开展茶树基因组学、功能基因组学研究的重要前提,而RNase、多酚类物质严重干扰茶树总RNA的分离提取。鉴于茶树组织总RNA提取过程难易不一、总RNA提取质量良莠不齐的现状,现对材料用量、提取液、DNA和蛋白质抽提液、RNA沉淀试剂、多酚氧化抑制剂等进行了比较研究,建立了一种适合茶树各器官组织总RNA提取的简单高效的方法(简易CTAB-LiCl法),并与实验室常用的改良Tri-Reagent法、改良CTAB法进行了比较。核酸定量和琼脂糖凝胶电泳检测结果显示,简易CTAB-LiCl法从茶树各器官组织中提取到的总RNA质量高、得率高。总RNA的得率是改良CTAB法的1.6-5倍。因此,简易CTAB-LiCl法具有效率高、适用范围广,且操作简单、实验成本低的特点。RT-PCR和cDNA-AFLP实验表明,提取的总RNA能够用于后续的分子生物学研究。     

9203菌株RNA对蕃茄花叶病（TM）的防治作用

对真菌9203菌株进行液体培养,从其菌丝体中分别用稀碱法、浓盐法、酚水法及酚试剂法提取RNA．用核酸粗提液及KNA提取液,在蕃茄植株上进行病毒免疫抑制试验,证明9203菌株RNA对番茄花叶病（TM）的防治有一定的效果．     

VIGS技术在甜菜上的应用

病毒诱导基因沉默(VIGS)是一种应用于研究植物基因功能的反向遗传学手段。相对于基因敲除及转基因等方法,它具有时间短、成本低、高通量等优点。随着甜菜全基因组的测序完成,为尽早对大量序列信息进行注释和功能鉴定,急需建立甜菜VIGS体系。本文采用目前应用最广泛的烟草脆裂病毒载体在农杆菌的介导下侵染甜菜幼苗叶片,同时设立对照。提取甜菜幼苗叶片总RNA,并反转录成c DNA,设计特异引物进行RT-PCR检测。结果表明:在侵染植株上检测到了烟草脆裂病毒特异条带,证明该病毒可以对甜菜进行侵染,这一结果为下一步建立甜菜VIGS体系奠定了基础。     

何首乌总RNA提取方法的比较及改进

目的：探讨不同提取方法对提取何首乌总RNA的质量影响,寻找适于何首乌成熟叶组织RNA的提取方法。方法：以何首乌成熟叶组织为材料,采用SDS／酸酚法、常规CTAB法及改良的TRIzol试剂法分别进行实验,并对所提取RNA的质量进行验证。结果：采用3种方法都能提取出RNA,但质量差异较大。其中改良的TRIzol试剂法能有效抑制次生物质的影响,提取的RNA产量可达70-110μg／g,纯度高于其他2种方法,D260nm／D280nm值为1．85～1．97。结论：改良的TRIzol试剂法操作简便,提取的RNA完整性和纯度较高,可以满足下一步实验的要求。     

植物病毒沉默抑制因子研究进展

RNA沉默是广泛存在于真菌、动物和植物中的一种特异序列降解机制.在植物中,RNA沉默是一种抵抗外界植物病毒入侵的自然机制.但是,植物病毒通常也会采取编码沉默抑制因子的相应机制来抵抗基因沉默,以便能够入侵植物.论述了主要沉默抑制因子的机制、特点和相关确认沉默抑制因子实验,并对沉默抑制因子的研究前景进行了展望.     

红树植物叶片总RNA提取方法比较与优化

分别采用三种植物RNA提取试剂盒、改良的CTAB-LiCl法和CTAB-异丙醇法五种方法提取四种红树植物叶片总RNA,并用紫外光谱、琼脂糖凝胶电泳、cDNA合成和real-time PCR等手段对提取效果进行鉴定.反复试验表明:五种方法对白骨壤Aricennia marina叶片总RNA提取均有良好的效果.Tiangen RNA提取试剂能够成功提取秋茄Kandelia candel、桐花树Aegiceras corniculatum、白骨壤的总RNA,提取的木榄Bruguiera gymnorrhiza总RNA浓度低、杂质较多,且稳定性较差,在对该方法改良后则能够成功提取木榄的总RNA.Invitrogen试剂盒对木榄和秋茄叶片均有良好的提取效果,但是对桐花树提取的RNA易受到蛋白的污染.CTAB-LiCl法和CTAB-异丙醇法提取的RNA总产量偏低,提取时间较长,且实时定量结果表明,两种方法反转录效率较试剂盒方法也偏低.     

拟南芥六个新的small RNAs 的克隆和功能预测

以模式植物拟南芥为例, 建立了一种克隆small RNA 分子的技术平台, 为今后开展small RNA 分子的生物学功能研究提供技术支撑。通过用抗病信号分子水杨酸(SA) 处理拟南芥叶片后, 进行small RNA 分子群体的分离与接头连接、PCR 扩增、T - 载体克隆与检测、测序分析和生物信息学分析等一系列实验, 成功地克隆了一些small RNAs, 并对其表达和功能进行了分析。     

BYL无细胞系统对植物RNA病毒翻译复制机制的研究进展

无细胞翻译系统是高效表达重组蛋白质的体外分子研究系统,BYL是一种通过密度梯度离心法脱去液泡的烟草BY-2裂解液无细胞系统。BYL系统可支持外源m RNA以及多种植物RNA病毒的蛋白质表达,由于BYL系统中保留植物RNA病毒复制所需的胞内膜结构,所以该系统可支持RNA病毒核酸负义链、正义链和亚基因RNA的合成。综述了BYL系统应用于植物RNA病毒翻译和复制等机理以及RNA干扰机制方面的研究进展,并对其研究前景进行展望,旨在便于更多的研究者系统了解BYL无细胞系统,将其更广泛地应用于其他RNA病毒的翻译复制机制研究中。     

番茄感染双生病毒对叶毛密度和海氏桨角蚜小蜂搜寻行为及适合性的影响

植物病毒可通过影响植物形态和生理特性从而对媒介昆虫和寄生性天敌产生作用。然而, 在植物 媒介昆虫 寄生蜂三营养级关系研究中有关植物病毒的影响很少被考虑。本研究测定和分析了番茄植株感染番茄黄化曲叶病毒（tomato yellow leaf curl virus, TYLCV)后叶毛密度的变化及对烟粉虱Bemisia tabaci (Gennadius)重要寄生性天敌海氏桨角蚜小蜂Eretmocerus hayati Zolnerowich and Rose行为与适合性的影响。结果表明： 携带TYLCV病毒番茄植株叶毛密度显著增加, 为健康植株叶毛密度的1.8倍。海氏桨角蚜小蜂在带毒植株叶片上的寄主处置时间和寄主块停留时间显著长于其在健康植株叶片上的时间, 分别为其2倍和1.5倍, 但寄生蜂的寄生率、 羽化率及发育历期差异不显著(P>0.05)。本文首次报道了双生病毒侵染可引起叶毛密度的增加, 对理解植物-双生病毒-烟粉虱-寄生蜂四方关系提供了新的数据。     

Emaravirus属新病毒:中国枣树花叶伴随病毒全基因组测序

[目的]2016年以来,新疆阿克苏等地区出现了一种新的枣树病害,严重威胁当地及周边红枣产业。本研究旨在鉴定引起此次病害的病原,探究病原体的传播方式,为生物防治策略的开发提供研究基础。[方法]对发病植株进行小RNA测序以鉴定病原体;对新鉴定的病毒,通过RNAseq和反转录PCR获取病毒全序列;体外表达重组的病毒结构蛋白并制备特异性抗体,通过Western斑点杂交法在发病植株中确证病毒蛋白;收集发病区域的媒介昆虫,通过反转录PCR在昆虫体内检测病毒的基因组,鉴定可能的传毒介体。[结果]本研究鉴定一种新的欧洲山梣环斑病毒属病毒为新疆新发枣树病害可能的病原体,命名为中国枣树花叶伴随病毒(Chinese date mosaic-associated virus,CDMaV)。CDMaV是一种多分段单链RNA病毒,基因组由5条负义RNA组成;RNA1-RNA5大小分别为7160、2224、1230、1493、971 nt,每条基因组RNA的互补链包含一个开放阅读框,共编码5个蛋白,依次为依赖RNA的RNA聚合酶、包膜糖蛋白、核衣壳蛋白和两个未知功能蛋白。在枣树寄生虫枣瘿螨体内扩增到病毒序列,表明该病毒可能以枣瘿螨为介体在枣树间进行传播。[结论]本研究为新疆新发枣树病害鉴定了相关病原体CDMaV,完成CDMaV全基因组测序,并鉴定枣瘿螨为可能的传毒介体。鉴定病原体和传播介体是建立病害防治方法的必要基础。