胃癌治疗候选新药GX1-rmhTNFα一般药理学研究

目的:通过研究GX1-rmhTNFα对动物重要生命功能的影响,观察其主要药效学以外的药理作用,为临床研究和安全用药提供信息。方法:分别取大鼠、小鼠肌肉注射,测试GX1-rmhTNFα对动物中枢神经系统、心血管系统、呼吸系统的影响。结果:GX1-rmhTNFα三个剂量组对动物中枢神经系统,呼吸系统,心血管系统无明显影响,与生理盐水对照组比较P>0.05。结论:在本实验中,GX1-rmhTNFα对小鼠的中枢神经系统无明显影响,对大鼠呼吸系统,心血管系统无显著性影响,提示其不良反应小。     

GFE-1多肽与重组人肿瘤坏死因子α融合蛋白的构建及其体外活性和体内分布研究

目的:构建 GFE-1多肽与重组人肿瘤坏死子α(rmhTNF-α)融合蛋白(GFE-1-rmhTNF),研究该融合蛋白的体外活性和体内分布.方法:利用基工程方法,将人工合成的编码 GFE-1的寡核苷酸片段连接在 rmhTNF-α序列的3'端,转入大肠杆菌中诱导表达,采用 Q-Sepharose FF 离子层析柱和 SP-Sepharose FF 阳离子层析柱纯化蛋白,SDS-PAGE 和 Western 印迹鉴定,测定该融合蛋白的体外活性,观察其在小鼠体内的分布情况.结果:构建了融合蛋白 GFE-1-rmhTNF,并在大肠杆菌中获得高效表达.体外活性实验显示,GFE-1-rmhTNF 对 L929细胞有明显的杀伤活性;体内分布实验证实,GFE-1-rmhTNF 在小鼠肺组织的富集高肝肾组织.结论:构建了融合蛋白 GFE-1-rmhTNF,可显著杀伤 L929细胞并特异性富集小鼠肺组织.     

国产人尿激酶原的药效学、药理学和毒理学研究

通过对重组人尿激酶原（rhRhpro-UK）不同剂量（8万IU/kg和16万IU/kg）对家兔纤溶功能的影响并与尿激酶（UK）（8万IU/kg）比较实验显示,rhpro-UK和UK都能明显缩短兔优球蛋白溶解时间,rhpro-UK对纤溶参数影响比UK小.rhpro-UK对体外血栓的溶解作用随剂量增加而增加,与同剂量UK比较有显著差别.rhpro-UK和UK对猪冠脉血栓都有明显的溶栓作用,对猪的纤溶指标纤维蛋白原（FG）、纤溶酶原（PLG）和α2抗纤溶酶（α2-AP）无明显影响.rhpro-UK对出血时间、凝血时间、单位时间内出血量均明显低于UK.表明rhpro-UK的副作用明显低于UK.rhpro-UK对小鼠、大鼠、犬和豚鼠回肠的一般药理学实验表明,rhpro-UK对受试动物的一般行为、状态及中枢神经系统、心血管系统、呼吸系统、消化系统等均无明显影响.仅发现犬实验中手术创面有渗血现象,对全身血液有类似肝素化状态.rhpro-UK的毒理实验表明,rhpro-UK的半数致死量为97.5mg/kg;Beagle犬接受2,8,28mg/kgrhpro-UK后,除8mg和28mg组有一过性牙龈充血,凝血时间明显延长,Tchol,TP和Alb含量有升高趋势外,未观察到明显毒性反应,病理学检查也未观察到药物造成直接的脏器损伤,2mg/kg组未观察到任何毒副反应.特殊毒性实验表明,rhpro-UK没有致突变和致畸作用.     

木犀草苷的药理作用研究

通过对木犀草苷在呼吸系统、心血管系统、中枢神经系统以及解热抗炎、抗病毒、抗肿瘤等方面作用的分析,为木犀草苷的开发利用提供依据。     

PCDHα在髓鞘形成和少突胶质细胞发育中的作用

该文通过免疫组化及蛋白免疫印迹的方法分别对Pcdhα基因敲除和对照组小鼠的中枢神经系统内的髓鞘碱性蛋白表达以及少突胶质细胞的发育进行了测定。结果表明:1)Pcdhα基因缺失小鼠中枢神经系统中的髓鞘碱性蛋白较对照组小鼠明显减少;2)Pcdhα基因敲除可导致少突胶质细胞发育异常:在小脑中,处于成熟期的少突胶质细胞减少,而处于前体细胞阶段的少突胶质细胞增多。上述结果提示Pcdhα可以通过调控少突胶质细胞的成熟过程进而影响髓鞘的形成。     

巨噬细胞迁移抑制因子拮抗剂对子宫内膜异位症的影响

目的：探讨巨噬细胞迁移抑制因子拮抗剂（ISO-1）对子宫内膜异位症的影响。方法：以裸鼠为研究对象,构建子宫内膜异位元症动物模型,应用巨噬细胞迁移抑制因子拮抗剂进行干预,观察子宫内膜异位症小鼠的成活率和体重变化;采用RT-PCR检测基质金属蛋白酶-2（MMP-2）,基质金属蛋白酶抑制剂-2（TIMP-2）,血管内皮细胞生长因子（VEGF）,TNF-αmRNA的表达,ELISA检测TNF-α蛋白的表达。结果：ISO-1对子宫内膜异位症小鼠的存活率无明显影响,但可增加其体重（P〈0.05）。ISO-1减少子宫内膜异位症小鼠受损组织中MMP-2、VEGF、TNF-α的表达（P〈0.05）,但对TIMP-2的表达无明显影响。结论：巨噬细胞迁移抑制因子被特异性阻断后,可明显抑制受损组织的重构、血管生成和炎症,最终影响子宫内膜异位症的组织生长及进一步恶化,这可能是临床治疗子宫内膜异位症的新策略。     

胸腺素α1二聚体蛋白的初步毒理学研究

目的:对胸腺素α1二聚体蛋白开展初步的毒理学研究,为后续系统地进行临床前研究提供依据。方法:将BALB/c小鼠随机分为生理盐水对照组和胸腺素α1二聚体蛋白高、中、低剂量组,观察胸腺素α1二聚体蛋白给药后小鼠的一般行为,进行血液生化学指征及组织病理学检测。结果:动物未见明显的中毒症状和死亡,与对照组相比,高、中、低各剂量胸腺素α1二聚体蛋白注射组的动物行为、活动、体重、进食量等与对照组无显著差异,血液生化指标与主要脏器组织形态学检查也均未见异常。结论:未发现胸腺素α1二聚体对小鼠有明显的毒性作用。     

新生血管特异性结合肽GX1二聚体抑制大鼠视网膜微血管内皮细胞血管生成的实验研究

目的:探讨新生血管特异性结合肽GX1二聚体对视网膜新生血管生成的影响。方法:化学合成GX1二聚体、GX1单体、对照肽二聚体,通过CCK-8实验、管状结构形成实验、迁移实验研究GX1二聚体对大鼠视网膜内皮细胞(RMEC)增殖、微管形成、迁移能力的影响,流式细胞学技术分析其对细胞周期分布和凋亡的影响。结果:CCK-8结果显示,与对照肽二聚体及阴性对照组相比,100-200μM GX1二聚体及单体均可抑制RMEC增殖(P<0.05),且随着GX1二聚体及单体浓度升高,抑制作用逐渐增强,呈剂量依赖性;各浓度GX1二聚体均较单体抑制作用增强,并有统计学差异(P<0.05)。管状结构形成实验、细胞损伤迁移实验结果显示与对照肽二聚体及PBS组相比,GX1二聚体及GX1单体均可明显抑制视网膜内皮细胞管状结构的形成及迁移,且二聚体抑制作用强于单体;对照肽二聚体仅有轻微的抑制视网膜内皮细胞管状结构形成的作用,对细胞迁移无明显抑制作用。流式细胞术分析显示与对照肽及阴性对照组相比,GX1二聚体及GX1单体均可诱导细胞凋亡(P<0.05),且GX1二聚体的诱导作用强于GX1单体(P<0.05),而对细胞周期分布则无明显影响。结论:GX1二聚体和GX1单体均可抑制视网膜新生血管内皮细胞增殖、微管形成、迁移能力及诱导凋亡,且GX1二聚体较GX1单体作用增强。GX1二聚体有望代替单体成为糖尿病视网膜病变新生血管靶向治疗小肽类药物。     

微生态调节剂──中药903口服液药理作用的初步研究

９０３口服液是由中药组成的复方制剂。经药效学实验表明,该制剂具有较好的扶植正常微生物群,调整微生态平衡,生物拮抗的作用。为了进一步考察该制剂对其它系统的影响,我们用中药９０３口服液对小鼠神经系统、心血管系统、呼吸系统、急性毒性试险做了研究。结果表明,中药９０３口服液对其均无显著性影响,且ＬＤ５０为１３７．３±５．８ｇ／ｋｇ,说明该制剂无毒无副作用,是一安全有效的生态调整制剂。     

补肾益气活血汤对小鼠血清雌、孕激素浓度 及其受体表达的影响

目的：探讨中药补肾益气活血汤促进着床的机理。方法：在以吲哚美辛建立小鼠着床障碍模型的基础上,将动物分为正常组,吲哚美辛组,中药组和黄体酮组,用放射免疫、免疫组织化学及Westem—blot方法检测各组小鼠妊娠d5（围着床期）血清皿,P4浓度及子宫内膜ER,PR表达。结果：补肾益气活血中药对E2、P4水平无明显影响,对PR表达也无明显影响,但有轻度促进ERα表达作用,此外,实验发现治疗对照组注射黄体酮虽然使P4水平升高,但ERα、PR表达却都有一定下降。结论：提示中药补肾益气活血汤可能主要通过雌激素样活性加强E2与其受体作用而有利于发动蜕膜化从而促进着床,黄体酮辅助生殖治疗失败可能与孕酮一定程度上抑制ERα和PR表达有关。     

实验动物信息资源网站（2）

（一）国内实验动物信息资源网站 （3）国家遗传工程小鼠资源库 名称：国家遗传工程小鼠资源库 网址：http：／／www．nicemice．org 维护机构：南京大学模式动物研究所 简介：现有小鼠品系264种,在养小鼠达到3万余只。这些小鼠品系中包括糖尿病、肥胖症、白内障、肢体残疾、发育缺陷和心血管系统障碍等多种人类疾病的动物模型。项目组科学家还在研究中发现了一些致病基因。     

CIC通过激活棕色脂肪组织逆转高脂膳食诱导的肥胖

摘要 目的：探讨慢性间歇性冷暴露（Chronic intermittent cold exposure,CIC）干预对小鼠棕色脂肪组织的影响及其作用机制。方法：利用高脂饲料喂养C57BL/6小鼠,建立肥胖小鼠模型,同时给予CIC处理。将动物随机分为4组：对照组（Con组）、慢性间歇性冷暴露组（CIC组）、高脂组（HF组）、高脂冷暴露组（HF+CIC组）,每组6只小鼠;CIC干预过程中,检测小鼠体重、肛温等数据。CIC处理16周后,麻醉处死小鼠取肩胛部位棕色脂肪组织, HE染色法观察棕色脂肪组织的形态学改变,Western blotting和q-PCR 检测棕色脂肪组织Cirbp、PPAR-γ、C/EBPα、PGC-1α、UCP-1等信号分子表达情况。结果：肛温变化结果显示,干预初期小鼠冷暴露前后肛温差较大,冷适应后各组无显著性差异;与Con组相比,HF组小鼠体重升高、棕色脂肪占体重的比例下降,棕色脂肪组织中Cirbp、PPAR-γ、C/EBPα表达增高,PGC-1α、UCP-1表达下降（P<0.05）;与HF组相比,HF+CIC组小鼠体重下降、棕色脂肪占体重的比例增高,棕色脂肪组织中Cirbp、PPAR-γ、C/EBPα表达下调,PGC-1α、UCP-1表达上调（P<0.05）。结论：CIC可能是通过激活Cirbp,影响PPAR-γ-PGC-1α-UCP-1信号通路的表达变化从而对棕色脂肪组织的活化产生影响,起到防治肥胖的作用。     

地西泮和戊巴比妥钠对两种小鼠镇静催眠作用强度的观察

目的：观察地西泮和戊巴比妥纳对不同种属小鼠自主活动和睡眠效应的影响,为筛选影响中枢神经系统功能的药物提供可参考的选择动物的依据。方法：分别取昆明种和ICR小鼠各40只,设对照组和地西泮给药组,每组20只,给药组ig地西泮4mg／kg,对照组给生理盐水,连续3天,末次给药后45分钟测定小鼠自主活动。另取两种小鼠各20只,分别ip戊巴比妥钠50mg／kg,观察两种小鼠的睡眠情况,记录潜伏期和睡眠时间。结果：ICR小鼠ig地西泮后,表现明显的镇静作用,自主活动的次数和对照组比较明显减少,P〈0．01;而昆明种小鼠给相同剂量的地西泮,小鼠自主活动的次数减少不明显,P〉0．05。昆明种和ICR小鼠同样ip阈上剂量的戊巴比妥钠,两者在睡眠潜伏期上无明显差异,但在睡眠时间上,则ICR小鼠的睡眠时间明显长于昆明种小鼠,P〈0．01。结论：ICR小鼠对中枢抑制药的反应性更好,适合于这类药物的筛选,尤其对作用相对较弱的中药制剂,可能提高筛选的阳性率。     

PPARα转基因小鼠在药物评价中的应用研究

目的研究过氧化物酶体增殖激活受体α激动剂药物在PPARα转基因小鼠体内对肝肾功能、血脂指标的影响,以评价该模型能否能应用于药效学研究中。方法选择27只6周龄的PPARα小鼠给予高脂饲料喂养一个月,随机分成3组,9只/组,分别为对照组1,高剂量组（非诺贝特60 mg/kg）和低剂量组（30 mg/kg）。同时选择9只C57BL/6小鼠作为对照组2。连续灌胃一个月,在动物给药前后分别检测肝功能指标、肾功能指标和血脂指标,并观察动物的一般生长情况。结果①给药后各组比较：与对照组1比较,非诺贝特各剂量组在PPARα转基因小鼠体内均能明显升高血脂中CHO和HDL-C（P〈0.05）,明显降低TG（P〈0.05）。各组之间的体重没有明显的差异（P〉0.05）。②给药前后比较：与给药前比较,给药后高剂量组能明显降低ALT、AST、ALP、BUN、TG（P〈0.05）;能明显升高CHO、HDL-C（P〈0.01）。而低剂量组能明显降低ALP（P〈0.05）;能明显升高CHO、HDL-C（P〈0.05）。结论 PPARα转基因小鼠评价PPARα激动剂药物比常规C57BL/6小鼠更敏感,是一个新的动物模型。     

BALB/c-HSF1基因剔除小鼠的引种保种与繁殖特性的观察

对引入的BALB／c-HSF1基因剔除小鼠近一年的繁殖,生长发育情况进行了系统观察。并就三种繁殖方式的繁殖鼠交配率,受胎率,分娩率,胎间隔及隔及哺乳期仔鼠成活率进行了比较,结果表明,与野生型（HSF1^ / ）动物比较,HSF1的缺乏对动物的繁殖有一定的影响,胎间隔与动物的胎次无明显的相关性,而生长曲线与BALB／c的生长曲线类似,这种现象可能与HSF1基因剔除小鼠有BALB／c-HSF1的血缘关系。     

胎次、性别对成年小鼠海马齿状回神经发生及学习记忆的影响

目的探讨胎次、性别是否对成年小鼠海马齿状回神经发生及学习记忆产生影响。方法运用Morris水迷宫系统检测第1～3胎成年小鼠的学习记忆能力,腹腔注射BrdU,标记神经干细胞,检测不同胎次、性别小鼠海马齿状回中的神经发生的差异。结果 （1）在同性别、不同胎次成年小鼠间,第2胎的学习记忆能力（LMA）均显著地高于第1、3胎的,其影响规律为LMA2〉LMA1〉LMA3,且P〈0.05;在同胎次、不同性别成年小鼠间,雌性小鼠的LMA均高于雄性小鼠的,但其差异无显著性（P〉0.05）。（2）在同性别、不同胎次成年小鼠间,第2胎海马DG新生神经细胞的数量（N）均高于第1、3胎的,其影响规律分别为NF2〉NF3〉NF1和NM2〉NM1〉NM3,但其差异无显著性（P〉0.05）;在同胎次、不同性别成年小鼠间,雌性小鼠的N均高于雄性小鼠的,但其差异无显著性（P〉0.05）。结论胎次、性别对实验动物神经发生及学习记忆等方面产生的影响是肯定的。因此,在使用实验动物时,应予以充分考虑,尽量使用胎次、性别相同的。     

骨髓间充质干细胞对类风湿关节炎小鼠干预效果研究

目的 利用自发类风湿关节炎小鼠模型(Tg-huTNFα小鼠),探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对类风湿关节炎及其继发骨量丢失的影响。方法 3周龄Tg-huTNFα小鼠分为3组：(1)模型组(Model),每周腹腔注射1次0.1 mL/10 g的生理盐水；(2)huTNFα抗体干预组(Anti-huTNFα),每周腹腔注射1次10 mg/kg的huTNFα抗体；(3)BMSCs干预组(BMSCs),每周双侧膝关节腔各注射1次5×10⁶ Cells的BMSCs。干预期间每周称量1次动物体重，同时对踝关节进行临床评分，各组动物干预10周后处死取材。利用流式细胞仪分析外周血T细胞、B细胞、CD4⁺/CD8⁺ T细胞比例，液相芯片法检测血清中huTNFα、IL-4及IL-1β含量，HE染色后评价左侧膝关节和踝关节病理改变，骨形态计量学方法分析右侧股骨骨结构变化。结果 与模型组比较，BMSCs和Anti-huTNFα干预均可缓解Tg-huTNFα小鼠体重的下降，抑制小鼠关节肿大变形，下调外周血huTNFα含量，降低Tg-huTNF...     

微囊藻毒素-LR对小鼠肝细胞线粒体功能的影响

目的：探究微囊藻毒素-LR对小鼠肝细胞线粒体功能的影响。方法：采用BALB／c小鼠作为模型动物,随机分为3组：A组,空白对照组,正常饮用水;B组,添加5g门L微囊藻毒素．LR的饮用水;C组,添加30gm微囊藻毒素-LR的饮用水。分组喂养3个月,分离小鼠肝脏、提取线粒体,采用线粒体荧光探针JC-1测定线粒体膜电位（MMP）,qRT-PCR检测自噬相关基因Beclinl和Lc3α的转录水平,WesternBlot检测细胞色素c的释放,电镜观察线粒体的形态和内部结构。结果：微囊藻毒素-LR处理组的小鼠肝细胞线粒体膜电位明显下降,自噬相关基因Lc3α的转录水平上升,细胞色素C由线粒体释放到胞浆,电镜观察线粒体形态异常、内部结构被破坏。结论：微囊藻毒素-LR对小鼠肝细胞线粒体有较强的毒性作用,并引发线粒体自噬。     

表达人肝再生增强因子肝细胞系生物人工肝治疗安全性的动物实验初步研究

目的：评价表达人肝再生增强因子基因的HepG2细胞系的细胞培养上清及细胞裂解物的小鼠急性毒性和近期致瘤性。方法：SPF级昆明种小鼠18只,随机分为空白对照组、细胞培养上清组、细胞裂解物组,每组小鼠各6只,腹腔分别接种空白培养液、细胞培养上清、细胞裂解物0．5ml。连续14天,每天观察记录动物毒性反应,14d后宰杀小鼠,取血测血生化指标。及观察病理改变。结果：各组小鼠均存活。除对照组1例小鼠,细胞培养上清组1例小鼠,细胞裂解物组2例小鼠次日活动稍减少外,均未见异常反应。血液生化检测ALT、AST、AFP、TBIL无明显异常,且各组间无差别。普通光镜下各组动物肝脏病理切片染色均未见明显异常。结论：目的细胞系细胞培养上清、细胞裂解物对实验用昆明小鼠无明确毒副作用及短期致瘤性。可能提供一种安全的可用于生物人工肝新的细胞来源。     

瑶药串连珠在瑶族民间医药中的应用及实验研究

目的为进一步明确串连珠的治病作用,为临床运用提供科学依据。方法采用最大耐受量(MTD)方法测试;用热板法、扭体法,观察串连珠的镇痛作用;用二甲苯致耳廓肿胀及腹腔染料渗出法,观察串连珠的抗炎作用;用载玻片法和毛细玻管片,观察串连珠对小鼠凝血时间的影响;用动物离体肠观察串连珠对肠管平滑肌的影响。结果串连珠水煎剂的MTD为408g生药/kg。串连珠高、中剂量组对小鼠热板致痛药后30min痛阀反应时间明显延长,对小鼠扭体次数各剂量均明显减少,但潜伏期无明显影响;抗炎结果显示,串连珠对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性有明显的抑制作用,但对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀无抑制作用;无缩短凝血时间的作用;对家兔、小鼠离体肠平滑肌有明显的抑制作用。结论MTD大于408g生药/kg动物体重,表明其毒性低。串连珠具有一定的镇痛、抗炎、解痉作用,但无明显的止血作用。