牛血清白蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

用牛血清白蛋白(BSA)免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,培养上清经过双抗体夹心法检测初步筛选分泌鼠IgG的杂交瘤细胞,将此种杂交瘤细胞注射小鼠产生的腹水用间接ELISA法筛选,获得4株能稳定分泌抗BSA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2A5、3A3、3G6、4A8。鉴定结果显示,2A5细胞分泌IgG2a/κ,其余3株细胞分泌IgG1/κ;纯化后4株腹水单抗的纯度达90%以上,对BSA的ELISA滴度均可达到1∶100000以上;4株单抗均不与人以及马、猪、羊、兔、豚鼠等血清发生交叉反应;W estern B lotting试验证明4株单抗均识别分子量为68000的BSA;用间接ELISA法测定4株单抗相对亲和力及相对敏感度大小依次为3A3>2A5>3G6>4A8;杂交瘤细胞株连续培养3个月以及冻存半年后复苏,细胞生长良好,杂交瘤细胞分泌的抗体效价稳定。     

hGH单克隆抗体的筛选及双抗体夹心ELISA检测方法的建立

采用杂交瘤法制备单克隆抗体,并用辛酸-硫酸铵法纯化单抗,通过ELISA方法和Western blotting测定抗体的效价与特异性,并进行抗体类型、相对亲和力测定;应用纯化的单抗建立hGH双抗体夹心ELISA检测方法。筛选出两株可以稳定分泌抗hGH单抗的杂交瘤细胞株,分别命名为3E11、2G9,抗体类型均为IgG1,抗体滴度均可达10-10,特异性好,相对亲和力高,以筛选到的两株单抗建立的双抗夹心ELISA法线性范围为0.09～1.5625ng/mL,R2>0.9,灵敏度为0.09ng/mL。筛选出高效抗hGH的单抗,并建立了hGH双抗体夹心ELISA检测方法。     

抗人B7-H1单克隆抗体的制备和鉴定

目的:采用杂交瘤技术制备抗人B7-H1单克隆抗体,并对其进行鉴定。方法:经抗原免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞以常规方法融合;用间接ELISA法筛选分泌抗体的杂交瘤细胞株;阳性克隆用有限稀释法获得稳定分泌抗人B7-H1单克隆抗体的杂交瘤细胞株;扩增杂交瘤细胞注射进小鼠腹腔后制备腹水;纯化腹水中的单克隆抗体并对其亚型进行鉴定;用间接ELISA法测抗体效价;将肺癌组织制成石蜡切片,用抗人B7-H1抗体进行免疫组化染色。结果:获得1株稳定分泌抗人B7-H1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,所分泌的单抗类型为IgG1;抗体效价为1×108,纯化后的抗体含量为6.76g/L;免疫组化实验中,单抗可与肺癌组织表面的B7-H1蛋白特异地结合。结论:制备了人B7-H1单克隆抗体,为B7-H1检测试剂盒的研制奠定了基础。     

活化相关分泌蛋白1单克隆抗体的制备及其在保守结构域鉴定中的应用

目的:制备重组活化相关分泌蛋白1(ASP-1)的单克隆抗体,并用其鉴定保守结构域。方法:用原核表达并纯化的重组ASP-1不加佐剂免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术及有限稀释传代法筛选稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,制备单抗腹水后用间接ELISA进行抗体特异性鉴定和效价检测,利用肽结合ELISA和Western印迹鉴定单抗识别的保守结构域。结果:获得5株能稳定分泌抗ASP-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,且5株单抗的识别区域均为21~28氨基酸残基的保守性结构域。结论:制备了抗ASP-1的单克隆抗体,为深入研究ASP-1佐剂的活性功能区及作用机制提供了有效工具。     

人凝血因子Ⅶ单克隆抗体的制备与鉴定

目的：制备抗人凝血因子Ⅶ单克隆抗体并鉴定其特性。方法：应用杂交瘤融合技术,以重组人凝血因子Ⅶ为抗原免疫BALB／c小鼠;取免疫小鼠的脾细胞与Sp2／0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA法筛选、融合细胞有限稀释法克隆、克隆化杂交瘤细胞株的亚类鉴定等方法筛选出单克隆抗体杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体的特异性进行鉴定;用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用蛋白A亲和层析法进行单抗的纯化。结果：获得了3株可稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞3E8、3D2和1C5,诱生的腹水效价分别为1：1×10^7、1：1×10^6和1：1×10^6;亚类鉴定表明388为IgG2a,其余2株均为IgGl;特异性鉴定显示它们与多种血浆蛋白均无交叉反应,表明单抗是特异的;经过亲和层析,获得了纯化的单抗。结论：获得了特异性的人凝血因子Ⅶ单克隆抗体,为建立人凝血因子Ⅶ检测及纯化方法奠定了基础。     

抗牛血清IgG单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

用牛血清IgG免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,用含山羊血清的培养基培养细胞,上清用间接ELISA法筛选。获得4株能稳定分泌抗牛血清IgG的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为1G5、2A8、3F5、4C5。其中2A8为IgG2a,其余3株为IgG1;腹水单抗的ELISA滴度均超过10-5;除3F5株单抗与山羊血清有交叉反应外,1G5、2A8、4C5株与人、马、猪、羊、兔、豚鼠等血清均不发生交叉反应;4株单抗与制备病毒性疫苗的基质液呈阴性反应;4株单抗识别分子量为160kD的牛血清IgG的两个不同抗原表位;4株单抗相对亲和力大小依次为4C5>2A8>1G5>3F5,相对敏感度依次为2A8>4C5>3F5>1G5;4株杂交瘤细胞株的染色体计数均大于90条,连续培养三个月以及冷冻保存半年后复苏,细胞生长良好。使用这些单抗建立的双抗体夹心法检测生物制品中的残留牛血清IgG。     

幽门螺杆菌尿素酶B单位DNA疫苗的构建及鉴定

报告了利用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗呼吸道合胞病毒蛋白的鼠单克隆抗体。获得 7株分泌抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株 :IF12 ,4H10 ,1D8,2B2 ,1G8,4G6 ,2D2。其中IF12 ,4H10 ,1D8,2B2 ,4G6分泌的抗体类别为IgG1,1G8为IgG2a ,2D2为IgG2b。经免疫印迹分析证实单抗 1F12 ,2B2识别病毒 4 4ku的蛋白 ,单抗1G8识别 37ku蛋白 ,2D2识别 2 1ku的病毒蛋白 ,单抗4G6识别病毒 90ku蛋白。对单抗的生物学活性进行了分析 ,单抗 4G6对呼吸道合胞病毒有明显的中和作用 ,小鼠腹水的中和滴度为 1∶32 ,其余各单抗中和滴度均小于1∶4。…     

抗新型隐球菌荚膜相关蛋白CAP10单克隆抗体的制备及鉴定

目的:以新型隐球菌荚膜相关蛋白CAP10为靶抗原,制备并鉴定特异性抗CAP10的单克隆抗体。方法:用纯化的重组CAP10免疫BALB/c小鼠,血清抗体效价达到适当水平时进行细胞融合;经多次亚克隆筛选出分泌特异性抗体的细胞株,制备单抗腹水并进行抗体效价测定及亚类鉴定。结果:获得11株能稳定分泌抗新型隐球菌荚膜相关蛋白CAP10的单克隆抗体杂交瘤细胞株,抗体效价高且抗原特异性强。结论:获得了针对新型隐球菌荚膜相关蛋白CAP10的单克隆抗体,为深入研究CAP10蛋白的功能,以及临床新型隐球菌的检测和血清型分析奠定了基础。     

人突触小体相关蛋白25单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的:制备抗人突触小体相关蛋白25(SNAP25)的鼠源单克隆抗体。方法:利用大肠杆菌表达SNAP25蛋白,纯化后免疫BALB/c小鼠制备杂交瘤细胞,筛选针对SNAP25的阳性杂交瘤细胞株,鉴定抗体亚型;用杂交瘤细胞株制备腹水单抗,纯化后利用SDS-PAGE检测抗体纯度。结果:表达并纯化得到纯度大于90%的SNAP25蛋白,免疫小鼠后经2轮筛选得到12株阳性杂交瘤细胞株,其中抗体重链包括IgG1、IgG2型,轻链大部分为κ链;选择具有相对较高抗原结合活性的14号杂交瘤细胞株制备腹水,纯化后得到纯度大于90%的抗体。结论:获得1株高纯度的针对SNAP25的鼠源单克隆抗体,为肉毒毒素的检测奠定了基础。     

空肠弯曲菌FlaA单克隆抗体的制备与鉴定

【目的】原核表达空肠弯曲菌鞭毛蛋白FlaA,并制备其单克隆抗体。【方法】克隆目的基因并将其构建到pET30a(+)和pGEX-6p-1表达载体,分别以变复性纯化后的rHis-FlaA、rGST-FlaA蛋白为免疫原和检测原进行杂交瘤细胞的筛选。采用间接ELISA法测定细胞上清和单抗腹水效价,Dot-ELISA、Western blot分析单抗特异性。【结果】成功构建pET30a(+)-flaA和pGEX-6p-1-flaA重组原核表达质粒,并融合表达rHis-FlaA和rGST-FlaA蛋白,Western blot试验显示天然蛋白多抗血清能与体外表达的蛋白呈现特异性反应,表明表达蛋白具有免疫原性。筛选获得3株稳定分泌抗FlaA的单克隆杂交瘤细胞株,分别命名为2D12、5E12、6A9,其Ig亚类分别为IgG2a、IgG1、IgG1,腹水效价分别为1∶102400,1∶102400和1∶51200;Western blot试验显示,3株单抗均能与表达rHis-FlaA重组蛋白的细菌发生特异性反应;Dot-ELISA试验表明,3株单抗均能与不同来源的空肠弯曲菌分离株发生特异性反应。【结论】本研究制备的单克隆抗体有较高特异性,具有良好的应用价值。为进一步研究空肠弯曲菌鞭毛蛋白的生物学特性、致病机理,以及建立快速检测技术奠定基础。     

子囊菌的一个新目Umbilicariales J.C.Wei & Q.M.Zhou

本文基于核糖体SSU rDNA序列对石耳科Umbilicariaceae的系统地位进行了研究.将所获得的石耳科地衣中6个种的SSU rDNA序列与GenBank中其它地衣型及非地衣型真菌的相关序列进行比对用于系统发育研究.结果表明长期以来系统地位不够明确而暂时被置于茶渍目Lecanorales的石耳科不能被包括在茶渍目中,分子数据支持成立石耳目Umbilicariales.基于分子数据并结合形态学和解剖学特征描述了新目Umbilicariales J.C. Wei ＆ Q.M. Zhou（Lecanoromycetes,Ascomycota）.     

子囊菌的一个新目Umbilicariales J.C. Wei & Q.M. Zhou

本文基于核糖体SSU rDNA序列对石耳科Umbilicariaceae的系统地位进行了研究.将所获得的石耳科地衣中6个种的SSU rDNA序列与GenBank中其它地衣型及非地衣型真菌的相关序列进行比对用于系统发育研究.结果表明长期以来系统地位不够明确而暂时被置于茶渍目Lecanorales的石耳科不能被包括在茶渍目中,分子数据支持成立石耳目Umbilicariales.基于分子数据并结合形态学和解剖学特征描述了新目Umbilicariales J.C. Wei & Q.M. Zhou(Lecanoromycetes,Ascomycota).     

子囊菌石耳目同源生物系统学

生物系统学亦即演化生物学或生物分类学,其目的在于为人类可持续发展中的生物资源研发提供生物信息。以单基因和多基因片段为基础的系统树分析难以获得同一祖先后代的单系类群。同源生物系统学是以共同祖先遗传的基因型和表型为基础进行的分析,是探明单系类群的最佳途径。同源性分析结果表明,石耳亚纲具有一条同源序列S及6种彼此相近的子囊顶器结构,其中包括石耳目以及未定位的5个属。石耳目包括一条同源序列O及石耳型子囊顶器结构。石耳科具有一条同源序列F及脐叶型地衣体。其中疱脐衣属具有一条同源序列L及疱状脐叶体与单孢子囊,石耳属具有一条同源序列U与非疱状脐叶体和八孢子囊。边缘种宾州疱脐衣除具有疱脐衣属同源序列L及疱状脐叶体内含单孢子囊以外,还兼具石耳属同源序列U以及疱狀脐叶体下表偶见气生根;而边缘种卡罗里石耳除具有石耳属同源序列U及非疱状脐叶体内含八孢子囊以外,还兼具疱脐衣属同源序列L以及疱脐衣属特有的砖壁型子囊孢子。     

Supraordinal phylogenetic relationships of Lecanoromycetes based on a Bayesian analysis of combined nuclear and mitochondrial sequences

Phylogenetic relationships of lichen-forming discomycetes and their relatives in the class Lecanoromycetes were examined by using nuclear large subunit and mitochondrial small subunit ribosomal DNA sequences. Ninety-eight partial sequences of 53 ascomycetes were generated and aligned with the corresponding sequences retrieved from GenBank resulting in an alignment of 100 taxa that was analyzed using a Bayesian approach with Markov chain Monte Carlo (B/MCMC) methods. The analysis revealed the monophyly of the Lecanoromycetes with two major clades: one clade including the monophyletic orders Graphidales and Ostropales and the paraphyletic Gyalectales, the other clade including the monophyletic Lecanorales (incl. Caliciales, Peltigerales, and Teloschistales) and a clade containing the polyphyletic Agyriales, a yet undescribed order Umbilicariales (including Elixiaceae and Umbilicariaceae), and Pertusariales. The monophyly of the Pertusariales was not resolved. Testing of alternative hypotheses revealed that a placement of Chaetothyriomycetes and Eurotiomycetes within Lecanoromycetes and the monophyly of Agyriales s. lat. (incl. Elixiaceae and Schaereriaceae) and Ostropales s. lat. (incl. Graphidales) can be rejected, while monophyly of Gyalectales and the Pertusariales and placement of Umbilicariales on the Lecanorales branch cannot be rejected with the current data set.     

Functional Analysis of the Intrathalline and Intracellular Chlorophyll Concentrations in the Lichen Family Umbilicariaceae

Intrathalline and intracellular chlorophyll concentrations togetherwith thallus structure were studied in 12 species of the lichenfamily Umbilicariaceae in order to explore pigment limitationsfor light absorption and for maximum rates of net photosynthesis(A_max). Species from high light environments tended to haverelatively low chlorophyll concentrations and vice versa. Chlorophyllconcentration on a surface area basis of all species studiedwas sufficient to absorb 80–99% of the incident light,which led us to believe that chlorophyll concentration was nota limiting factor for A_max. A_maxof Umbilicariaceae was smallerthan A_maxof leaves of vascular plants, both on a dry weightand on a surface area basis. These differences slightly decreasedbut did not disappear when referred to the chlorophyll concentrationof the photosynthetic tissues, but reference units had a confoundingeffect in the comparisons. Differences in A_maxon a dry weightbasis between Umbilicariaceae and vascular plants disappearedwhen comparisons were made with the whole plant and not simplywith the leaf. We found a significant, inverse relationshipbetween amount of alga and chlorophyll concentration withinthe algal cells in the lichens studied. This was interpretedas a mechanism to avoid pigment self-shading within the algallayer, distributing more efficiently the photosynthetic pigmentsover a given surface area, and is the first indication of sucha mechanism in lichens. It is suggested that thallus structureand physiology have a larger influence on the observed low A_maxofthe lichens studied than chlorophyll content. Algal cells; chlorophyll concentration; lichens; light harvesting; net photosynthesis; stereology; thallus structure; Umbilicariaceae     

新科Rhizoplacopsidaceae中的新属及新种Rhizoplacopsis weichingii

本文描述了位于新科盾叶科 Rhizoplacopsidaceae(Umbilicariales,Lecanoromycetes,Ascomycota)中的新属盾叶属 Rhizoplacopsis 和新种蔚青盾叶 Rhizoplacopsis weichingii。蔚青盾叶取名于著名中国真菌学家王云章教授之字“蔚青”,作为庆祝教授百岁生日之纪念。该新种在外形上与 Rhizoplaca 属地衣极为相似,但位于地衣体上的子囊盘却为网衣型。此外,它的子囊顶器结构非常接近于 Umbilicaria-type。基于分子数据,对 Rhizoplacopsis weichingii 及其它相关地衣进行的系统发育分析支持成立新属盾叶属 Rhizoplacopsis 和新科盾叶科 Rhizoplacopsidaceae。     

Photosynthesis and water relations and the role of anatomy in Umbilicariaceae (lichenes) from Central Spain

Summary The response of net photosynthesis and dark respiration in eight species of Umbilicariaceae (lichenes) to temperature (-5, 0, 5, 10, 15, 20, 25, 30°C) and irradiance (55, 110, 220, 400, 620 mol photons m^-2 s^-1 PAR) was studied. The samples were collected in montane and alpine localities of the Spanish Sistema Central. The species differed widely in their net photosynthetic rates. The optimal temperature for net photosynthesis in alpine species was significantly lower than in montane species. Montane species were more photophytic than alpine ones. Water saturation and water loss rate were dependent on morphology and particularly anatomy of the thallus. The physiological and structural data are useful in the interpretation of the ecology and altitudinal distribution of the Umbilicariaceae. No adaptation could be linked to particularities of the mediterranean climate.     

中国地衣型子囊菌石耳科纲要

该纲要为东亚地衣型子囊菌石耳科研究的一部分.对于该科一些种的子囊盘进行了研究.     

石耳科(子囊菌亚门)的间断分布和替代现象

本文报道了石耳科的两个亚洲的,也是美洲以外的新记录种,即角石耳与深色石耳。进一步证实了单果石耳在南大西洋的,即南美洲和南部非洲的间断分布。对于上述种类以及本科其它一些种类的间断分布和替代现象进行了分析讨论。     

石耳科(子囊菌门)的新种和新分布

本文报导了石耳科的八个种,其中新种四个,即阿尔泰石耳,鳞芽石耳、亚石耳及太白石耳;三个种是中国的新分布,即皱石耳、亚光石耳及淡腹疤脐衣;一个种即白根石耳为中国及蒙古的新分布。