根癌农杆菌介导的乙肝表面抗原基因对烟草的转化

构建了植物表达载体pBRSAg,该载体具有完整的植物表达元件,CaMV35S启动子、农杆菌T-DNA左右边界、植物报告基因gus和植物选择标记基因hpt,适用于农杆菌的转化;通过冻融法将重组质粒pBRSAg转入根癌农杆菌LBA4404中,利用农杆菌介导法转化烟草叶盘,经筛选培养获得烟草植株。抗性植株经GUS染色和PCR检测为阳性,初步表明乙肝表面抗原基因在烟草中得到表达。     

根癌农杆菌介导的水稻转化研究进展

农杆菌介导的水稻基因转化是水稻基因转化的热门。本文对由农杆菌介导转化获得的水稻品系（品种）,影响农杆菌介导转化的因素,农村菌浸染的方法,外源基因的检测和遗传等方面作综合论述,并提出了农杆菌介导转化水稻的前景。     

根癌农杆菌介导的Pr1基因在贵阳腐霉的组成性表达

【目的】构建组成性表达贵阳腐霉Pr1基因的载体pCambia-hph-Pr1,转化贵阳腐霉,以获得高毒力的基因工程转化菌株。【方法】以双元载体pCambia-Pnos-PNN-hph为基本骨架,将Pr1基因置于组成型启动子PgpdA和终止子TtrpC之间,获得含Pr1基因的表达元件。以贵阳腐霉菌丝体为受体材料,利用根癌农杆菌介导的遗传转化法转化贵阳腐霉,观察转化株的生物学特征和灭蚊毒力。【结果】转化株的菌丝生长速度和游动孢子产量与野生株无显著性差异。生物测定表明转化株对蚊幼虫平均致死率达到32.9%,比野生株提高了约一倍,并且使受试蚊幼虫生长速度明显减缓。【结论】利用根癌农杆菌介导的遗传转化获得了遗传稳定的高毒力菌株。     

转反义磷脂酶Dγ基因白三叶草的获得

利用根癌农杆菌介导法将反义磷脂酶Dγ基因 (PLDγ)转入白三叶草。建立了白三叶草的继代及高频再生系统 ,对传统农杆菌侵染方法进行了改良 ,通过抗生素筛选获得大量抗性植株。对抗性植株进行了PCR和PCR Southern杂交鉴定 ,证实PLDγ基因已整合入白三叶草核基因组中。     

农杆菌介导的抗菌肽A基因转入沙田柚影响因素研究

以沙田柚上胚轴为对象,进行了农杆菌介导的抗菌肽shivaA基因转入沙田柚影响因素研究。研究结果表明转化中抑菌抗菌素以羧苄青霉素为首选,最佳转化条件为菌液稀释至OD6000.5,浸泡时间10min,共培养3d,卡那霉素起始选择浓度50μg/mL。农杆菌再悬浮液与共培养基中加入150μmol/L阿魏酸可提高转化频率。PCR与Southern杂交证明,外源基因已转入沙田柚基因组中。     

影响农杆菌介导植物基因转化的因素问题

简要综述了农杆菌介导的植物基因转化的机理及其特点,着重分析了影响农杆菌介导植物基因转化的各种因素。     

农杆菌介导的斑玉蕈遗传转化

【目的】将农杆菌介导的转化应用于重要的工厂化栽培食用菌斑玉蕈中,建立稳定的农杆菌介导的斑玉蕈遗传转化技术。【方法】将构建的双元载体pYN6982转入农杆菌LBA4404菌株中,以斑玉蕈SIEF3133菌株打碎的双核菌丝为受体材料,利用根癌农杆菌介导的转化方法进行斑玉蕈转化试验。【结果】经潮霉素抗性筛选、PCR鉴定以及有丝分裂稳定性试验验证,表明潮霉素磷酸转移酶基因(hph)已经整合到斑玉蕈的基因组中;转基因斑玉蕈菌丝在荧光显微镜下可以观测到绿色荧光,表明增强型绿色荧光蛋白基因(egfp)已经在转基因斑玉蕈菌株中获得了表达;通过PCR检测,随机挑选的8个转基因斑玉蕈菌株中有2个可以扩增出载体转移DNA(T-DNA)边界重复序列外的卡那霉素基因(kan)序列。【结论】获得了稳定遗传和表达的斑玉蕈转基因菌株,建立了农杆菌介导的斑玉蕈遗传转化方法。农杆菌介导的斑玉蕈遗传转化中,存在载体T-DNA边界重复序列之外的DNA序列转移到转基因斑玉蕈中的现象,有待进一步研究。     

商陆抗病毒蛋白基因导入百合愈伤组织初报

利用美洲商陆抗病毒蛋白(Pokeweed antiviral protein,PAP)具有广谱的抗病毒特性,通过冻融法将含有PAP基因的重组表达载体PBll21转入土壤农杆菌LBA4404中,利用叶盘法在农杆菌的介导下转比麝香百合愈伤组织,通过抗性筛选和PCR输测获得了转PAP基因的百合植株。     

根癌农杆菌介导转化番茄的影响因素

综述影响根癌农杆菌介导番茄转化效率的因素,包括根癌农杆菌菌株类型、Vir基因的活化、选择标记基因、植物基因型、外植体类型、培养基中是否附加植物激素和抑菌抗生素、菌液浓度、侵染时间长短,是否预培养和共培养天数等;同时不同的培养方式也是影响番茄转化效率的主要因素,包括液体培养法、农杆菌介导的floral-dip转化法、超声波辅助农杆菌介导法、农杆菌介导与基因枪轰击结合法等.     

根癌农杆菌介导的高粱遗传转化体系的研究

采用根癌农杆菌介导法将杀虫晶体蛋白基因cryIA(b)转入高粱胚性愈伤组织中,建立农杆菌转化高粱的遗传转化体系,获得70棵再生植株。经GUS及PCR检测,结果表明,cryIA(b)基因确实转移到高粱恢复系0-30中,报告基因GUS在再生植株中也得到表达。转化植株的抗病性鉴定正在进行中。     

福建绞股蓝真菌转化及其产物抗癌活性研究

研究黑曲霉和构巢曲霉两种真菌对福建绞股蓝皂苷的微生物转化。在37 ℃条件下液体发酵2 d后,HPLC分析表明,微生物转化后成分发生明显变化;利用MTT法测定抗癌活性,比较绞股蓝皂苷微生物转化前后活性变化,结果表明,转化前绞股蓝皂苷转化底物无抗癌活性,两种真菌转化产物有显著的抗癌活性。构巢曲霉和黑曲霉的转化产物对肝癌细胞SMCC7721增殖的72 h半抑制率IC₅₀值分别为92.00、40.60 mg·mL^-1;对肝癌细胞Bel7402增殖的72 h半抑制率IC50值分别为49.06、125.38 mg·mL^-1。说明两种真菌对绞股蓝皂苷微生物转化产生具有抗癌活性的成分,为从绞股蓝中筛选和分离活性成分提供新的研究思路。     

根癌农杆菌介导蓝猪耳转化的影响因素研究

研究了根癌农杆菌介导蓝猪耳转化的影响因子。结果表明,以蓝色花类型蓝猪耳5~6周的叶片为外植体,在OD₆₀₀为0.5~0.6的活化菌液中浸染5~10min,暗培养4d后,在愈伤组织诱导培养基(MS+BA 1.0mg/L+2,4-D 0.1mg/L)上生长14d,获得抗性愈伤组织;经芽诱导培养基(1/2MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L)培养28d得到抗性芽;生根培养基(1/2MS)上培养14d得到抗性植株。经PCR检测证实外源基因已整合到蓝猪耳基因组中,转化率达13%~14%。Cef和Hyg浓度对转化影响较大,转化的不同阶段其适宜浓度不同。     

中国(鼲)亚科田鼠族(Microtini)分类学研究进展与中国已知种类

䶄亚科田鼠族（Microtini）是一个分布广、物种多、在分类学上存在争议也较多的类群。通常认为该族在全世界有10属81种,中国有7属24种。近年来,通过广泛采集标本,开展分类与系统发育研究,基本厘清了我国䶄亚科田鼠族分类与系统发育问题。确认田鼠族在全世界仅8属,分别是东方田鼠属（Alexandromys）、雪田鼠属（Chionomys）、毛足田鼠属（Lasiopodomys）、艾草田鼠属（Lemmiscus）、田鼠属（Microtus）、松田鼠属（Neodon）、沟牙田鼠属（Proedromys）和川西田鼠属（Volemys）。帕米尔田鼠属（Blanfordimys）被证明是田鼠属的亚属,白尾松田鼠属（Phaiomys）是松田鼠属 的同物异名,水䶄属（Arvicola）被证明不属于田鼠族。而东方田鼠属是从田鼠属的亚属提升为属。中国田鼠族包括6属26种。青海毛足田鼠（Lasiopodomys fuscus）、白尾松田鼠（Phaiomys leucurus）和克氏田鼠（Microtus clarkei）均是松田鼠属成员。凉山沟牙田鼠（Proedromys liangshanensis）、林芝松田鼠（Neodon linzhiensis）、聂拉木松田鼠（Neodon nyalamensis）和墨脱松田鼠 （Neodon medogensis）是近年来命名的新种。     

深圳梧桐山毛棉杜鹃林天然更新调查

采用标准地调查法,对深圳梧桐山毛棉杜鹃林天然更新进行调查与评价。结果显示,在毛棉杜鹃林更新能力排在前12位的树种中,更新能力良好的有浙江润楠Machilus chekiangensis、亮叶冬青Ilex viridis;天然更新等级为中等的树种有华鼠刺Itea chinensis、短序润楠Machilus breviflora、密花树Rapanea neriifolia、香叶树Lindera communis;天然更新为不良等级的树种有豺皮樟Litsea rotundifolia var. oblongifolia、鸭脚木Schefflera octophylla、光叶山矾Symplocos lancifolia、毛棉杜鹃Rhododendron moulmainense、吊钟花Enkianthus quinqueflorus、粗叶榕Ficus hirta。在6块标准地中,仅有2块标准地内发现毛棉杜鹃幼苗,所有标准地没有发现苗高<30 cm 的毛棉杜鹃幼苗,且株数密度低,属于天然更新不良的树种,不能依靠天然更新来保持其地位和观赏特性。     

利用红外相机对贵州茂兰自然保护区兽类和鸟类资源的初步调查

2016年8月至12月,在贵州茂兰国家级自然保护区布设69台红外相机(1台丢失,3台损坏),对区内大中型兽类及林下鸟类资源进行连续监测。共记录到11种兽类和16种鸟类,包括1种国家I级重点保护野生动物（白颈长尾雉Syrmaticus ellioti）和4种国家II级重点保护野生动物（斑灵狸Prionodon pardicolor、猕猴Macaca mulatta、白鹇Lophura nycthemera、仙八色鸫Pitta nympha）。其中,相对丰富度最高的兽类为小泡巨鼠（Leopoldamys edwardsi）（RAI=15.22）、红腿长吻松鼠（Dremomys pyrrhomerus）（RAI=9.58）、帚尾豪猪（Atherurus macrourus）（RAI=1.46）、鼬獾（Melogale moschata）（RAI=1.04）、赤腹松鼠（Callosciurus erythraeus）（RAI=0.57）;相对丰富度最高的鸟类为紫啸鸫（Myiophoneus caeruleus）（RAI=3.79）,白鹇（RAI=3.25）,橙头地鸫（Zoothera citrina）（RAI=0.45）,虎斑地鸫（Zoothera dauma）（RAI=0.45）。豹猫（Prionailurus bengalensis）、仙八色鸫、灰头鸫（Turdus rubrocanus）、灰翅鸫（Turdus boulboul）、灰眶雀鹛（Alcippe morrisonia）、绿翅金鸠（Chalcophaps indica）、黄嘴栗啄木鸟（Blythipicus pyrrhotis）为保护区新记录。活动节律分析结果显示,白鹇和紫啸鸫为昼行性动物,帚尾豪猪和鼬獾为夜行性动物,结果与传统方法基本一致。本研究结果有助于监测茂兰保护区中大中型兽类和林下鸟类资源,为保护区有效管理提供数据支持。     

云南常见药用石斛DNA条形码筛选

选择云南省内常见的12种药用石斛，采用分子生物学鉴定技术筛选其适用的DNA条形码序列。以12种药用石斛共36个样品为材料，提取样品总DNA，对核基因片段ITS和ITS2、叶绿体基因片段psbA-trnH和matK序列进行扩增、测序，结合GenBank下载部分石斛序列；利用生物信息学软件进行序列分析和系统发育分析。结果表明，4条序列扩增和测序成功率均为100%；4条序列没有明显的Barcoding Gap，但ITS序列与ITS2序列的种内和种间重叠部分较少，有偏向两端的趋势；系统发育树显示，ITS和psbA-trnH序列能成功区分12种云南常见的药用石斛，ITS2序列未能区分长距石斛(Dendrobium longicornu)和矮石斛(D. bellatulum)，matK序列仅区分6种石斛。建议以ITS和psbA-trnH序列作为云南药用石斛鉴定序列，为药用石斛的种源鉴定提供理论依据。     

当归及其混淆品独活、欧当归的紫外鉴别

为寻找当归及其混淆品独活、欧当归的紫外吸收光谱鉴别特征，采用紫外谱线组法对三者在不同极性溶剂中的紫外吸收光谱图进行比较。结果表明，当归和独活在四种极性溶剂中均存在明显差异，而当归和欧当归仅在无水乙醇和蒸馏水溶剂中鉴别差异显著。紫外谱线组法可以鉴别当归及其混淆品独活、欧当归。     

武陵源世界自然遗产地兽类和鸟类多样性的红外相机初步监测

武陵源世界自然遗产地地处我国生物多样性关键区域之一的武陵山脉,保护优先级别高,但遗产地自建立以来一直未开展系统的野生动植物资源本底调查,这不利于遗产地的有效管理。为了掌握遗产地兽类和鸟类资源现状,促进生物多样性的科学保护,2016年1月至2017年7月,我们利用36台红外相机,在武陵源世界自然遗产地共布设了107 个位点,每个位点工作4个月左右。结果表明：共获得野生兽类独立有效照片607张,隶属于4目8科的14 种;物种相对丰富度指数排前7位的兽类依次是猕猴 (Macaca mulatta)、红腿长吻松鼠 (Dremomys pyrrhomerus)、猪獾 (Arctonyx collaris)、小麂 (Muntiacus reevesi)、鼬獾 (Melogale moschata)、花面狸 (Paguma larvata taivana)、毛冠鹿 (Elaphodus cephalophus)。共获得鸟类独立有效照片907张,隶属于5目10科的37 种;物种相对丰富度指数排前7位的鸟类依次是紫啸鸫 (Myophonus caeruleus)、红腹锦鸡 (Chrysolophus pictus)、虎斑地鸫 (Zoothera dauma)、红嘴蓝鹊 (Urocissa erythrorhyncha)、灰翅鸫 (Turdus boulboul)、黑领噪鹛 (Garrulax pectoralis)、松鸦 (Garrulus glandarius)。白颈长尾雉 (Syrmaticus ellioti) 为国家一级重点保护野生动物;红腹锦鸡、红腹角雉 (Tragopan temminckii)、勺鸡 (Pucrasia macrolopha)、凤头鹰 (Accipiter trivirgatus)、猕猴为国家二级重点保护野生动物。猕猴、红腹锦鸡、紫啸鸫和红腿长吻松鼠为日行性动物,猪獾为夜行性动物。红腹锦鸡、紫啸鸫和红腿长吻松鼠在12:00~14:00活动频率下降,原因可能是这几种动物通过降低活动频率来躲避中午的高温和减少能量消耗。     

梵净山保护区同域分布黔金丝猴与藏酋猴的空间分布初探

正物种共存在一定程度上取决于对资源的竞争分化,使其都有足够的资源保障生存和繁殖(Macarthur and Levins,1967; Schoener,1974)。根据竞争排斥原则,生态相似的物种在资源竞争中必然存在生态位的分化(Hardin,1960)。在众多的生态维度中,栖息地分化所形成的空间分布差异是同域野生动物最为常见和重要的生态位分化形式(Schoener,1974)。同时,了解栖息地选择如何影响同域野生动物的空间分布是研究资源分配和竞争模式的必要前提(Rosenzweig,1981)。     

基于线粒体Cyt b 和核基因ZFY 探讨羊族物种之间的系统发生关系

为了阐明羊族物种之间的系统发生关系并解决岩羊属中矮岩羊物种的有效性问题,本文测定了来自金沙江河谷地区栖息于林线以上岩羊和林线以下矮岩羊共226 份粪便DNA 样品的线粒体Cyt b 基因全序列(1 140 bp)和核基因ZFY 部分序列(612 bp),结合从GenBank 中检索到的羊族物种同源DNA 序列进行比较,利用最大简约法和最大似然法构建分子系统发育树,根据获得的拓扑结构初步探讨它们的系统进化关系。结果表明,绵羊属的绵羊与山羊属、塔尔羊属、岩羊属各物种亲缘关系最远,喜马拉雅塔尔羊和岩羊属、山羊属的亲缘关系最近。在进化树的岩羊属这一分支中,金沙江河谷地带岩羊和矮岩羊与内蒙古、青海、四川其它地理种群的岩羊聚为一支,同时分布在这一区域的部分岩羊和矮岩羊在Cyt b 基因和ZFY 基因单倍型上存在共享现象。历史上的气候事件可能造成金沙江河谷地带岩羊和矮岩羊种群之间相互迁移,偏雄性扩散促进了各地理种群之间的基因交流。因此不支持矮岩羊为独立的物种,建议将金沙江河谷地带的岩羊和矮岩羊都划分到岩羊四川亚种(Pseudois nayaur szechuanensis)。由于它们的形态和生态上存在一定的分化,建议将林线以下矮岩羊作为一个独立的管理单元进行保护与管理。