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目的:为了减少根结线虫对番茄的危害,研究并获得转抗线虫基因HSl^prol。番茄植株。方法:在鉴定表达载体之后,采用CaCl2法制作农杆菌EHAl05感受态细胞,然后用冻融法将HSl^prol基因转入农杆菌中。通过农杆菌介导法将HSl^prol基因导入无菌番茄外植体中,获得抗根结线虫转化再生植株。用卡那霉素筛选到再生植株后,提取抗性芽的基因组,利用设计好的引物进行PCR鉴定。结果与结论:目的基因已整合到番茄基因组中,获得了转HSl^prol基因番茄植株。 相似文献
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CMO与BADH双基因表达载体构建及在烟草中的表达 总被引:5,自引:0,他引:5
本研究的目的是将甜菜碱合成关键酶CMO与BADH基因构建到同一表达载体中,利用转基因方法将该表达载体导入植物体内,完善植物体内的甜菜碱合成途径,提高植物的抗旱性和耐盐性。以pC1303质粒为基础,构建了均由35S启动子驱动的CMO基因和BADH基因的植物双基因表达载体pC35SC35SB1303。利用冻融法将其导入农杆菌LBA4404中,通过农杆菌介导法分别将CMO基因、BADH基因以及该双基因表达载体导入烟草中,PCR检测和Northern杂交分析表明,外源基因已整合到受体植物基因组中并正常表达。对转基因植株及对照植株甜菜碱含量的检测结果表明,转双基因植株的甜菜碱含量明显高于转BADH基因植株、转CMO基因植株及对照植株。 相似文献
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苏云金杆菌内毒素蛋白基因转入葡萄胚性愈伤组织细胞及转基因… 总被引:1,自引:0,他引:1
以葡萄的胚性愈伤组织作为农杆菌介导,Ti质粒转化材料,利用共培养法将苏云杆菌内毒素蛋白基因转入葡萄胚性愈伤组织细胞,通过胚状体发生途径再生转基因植株。实验发现:800μmol/L的乙酰丁香酮诱导处理农杆菌和葡萄愈伤组织后可转将化效率提高50倍。 相似文献
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黄瓜花叶病毒香蕉株系衣壳蛋白转基因烟草的研究 总被引:10,自引:1,他引:9
构了侵染香蕉的黄瓜花叶病毒两个株系的衣壳蛋白基因的植物表达载体,并通过农杆菌共培养法的基因枪法,分别将两个株系的CP基因转化入了两种烟草植株。其CP基因转化频率及植株再生率研究结果表明,农杆菌共培养法比基因枪法,土耳其烟比本生烟,农杆菌1:10倍稀释液比培养原液和1:100倍稀释液,具有更高的转化频率和植株再生能力。Southem blot,PCR-Southem bolt检测CP基因整合研究结果 相似文献
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果蔗“拔地拉”植株再生与农杆菌介导的遗传转化研究 总被引:1,自引:1,他引:0
以果蔗(Sacchdrgm officenarum L.)'拔地拉'的幼嫩叶鞘为材料,以MS+2,4-D 2.0 mg L~(-1)为诱导培养基,MS+2,4-D 2.0 mg L~(-1)+6-BA 1.0 mg L~(-1)为分化培养基,MS+IAA2.0 mg L~(-1)为生根培养基,建立了高效的果蔗再生体系.利用农杆菌介导法将含有cryIA基因和CPTI基因的植物表达载体导入果蔗愈伤组织,经潮霉素筛选、PCR以及Southern杂交分析表明,cryIAc基因已整合进果蔗基因组中. 相似文献
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MDMV CP基因的克隆及其转基因玉米的研究 总被引:18,自引:0,他引:18
用RT-PCR方法分离了玉米矮花叶病毒外壳蛋白基因(MDMV CP),并且利用基因枪法将该基因导入玉米优良自交系18-599红、18-599白幼胚诱导的愈伤组织中。转化的愈伤组织在Bialaphos浓度(PPT)为8mg/L、10mg/L、5mg/L的筛选压下经过3次抗性筛选后,分别再生出可育植株12株和6株。PCR和Southem检测结果说明CP基因已整合到玉米自交系基因组中。对T1代转基因植株进行病毒人工接种试验,结果表明对照植株全部表现为感染玉米矮花叶病的典型症状,而转基因植株后代呈现不同程度的抗性。 相似文献
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高赖氨酸蛋白基因导入水稻及可育转基因植株的获得 总被引:33,自引:0,他引:33
构建了一个植物高效表达质粒,使来源于四棱豆(Psophocarpus tetragonolobus(L.)DC)的高赖氨酸蛋白基因(lys)受控于单子叶植物ubiqutin强启动子下表达。用基因枪法将其导入水稻(Oryza sativa L.)幼胚诱导的愈伤组织,经潮霉素抗性筛选,得到可育的再生植株。经PCR和Southem blotting检测,表明该基因已整合到水稻的基因组织。GUS组织化学染色表明转基因水稻植株的叶、茎和根中均有gus基因的表达。测定112株转基因水稻叶片中赖氨酸叶量,大部分植株有不同程度的提高,最高幅度为16.04%。 相似文献
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基因枪法介导GNA基因遗传转化甘蔗的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:将含有雪花莲外源凝集素(GNA)基因的植物表达载体用基因枪法分别导入一个果蔗和一个糖蔗品种中,以期获得转基因植株。方法:将GNA基因插入到植物表达载体上,构建出不同选择标记、不同启动子的表达载体,并用基因枪法将之导入甘蔗胚性愈伤组织,分别在G418、PPT和Hyg的选择压力下,筛选抗性植株,并进行分子杂交鉴定。结果:通过斑点杂交和PCR-Southern杂交证明GNA基因已整合到甘蔗基因组中。结论:用基因枪法成功获得了含有GNA基因的甘蔗转化株,为培育抗甘蔗绵蚜(Ceratovacuna lanigeraZehnther)的新品种提供了基础。 相似文献
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农杆菌介导的雪花莲凝集素基因转入玉米骨干自交系 总被引:14,自引:0,他引:14
以农杆菌AGL0介导,将雪花莲凝集素基因转入玉米骨干自交系齐319和掖515胚性愈伤组织细胞,从筛选后的抗性愈伤组织获得再生植株。农杆菌浓度和共培养时间均能显著影响侵染后玉米愈伤组织的抗性频率。在农杆菌浓度OD600 0.2~0.3,共培养时间3d时,侵染后玉米愈伤组织的抗性频率最高,平均约4%。对再生植株及其子代基因组DNA的PCR及Southern杂交分析表明雪花莲凝集素基因已经整合到玉米基因组中,并遗传给后代。在蚜虫人工接种试验中,转基因植株上蚜虫的繁殖力为非转基因对照植株上的50%,这表明转基因植株抗蚜性显著增强。 相似文献
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通过农杆菌介导法用含有抗潮霉素和 G U S 基因的双元载体将杀虫结晶蛋白基因cry I A( b) 和cry I A(c) 导入到籼、粳稻幼穗愈伤组织中,然后经过在含有不同浓度潮霉素的培养基上进行数次筛选,获得一批 Bt 转基因株。经 P C R、 Southern 杂交及 Western 印迹分析证实此二基因已整合进水稻中,饲虫试验结果表明,转基因株具有100 % 杀虫率。 相似文献
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豌豆凝集素和血红蛋白基因对水稻的转化和表达 总被引:3,自引:0,他引:3
为了扩大根瘤菌的突破产范围和试探根瘤菌在非豆科植物上的固所为作用,将豌豆凝集素基因(pl)和Parasponia andersonii血红蛋白基因 (phb)构建在同一个植物表达载体上,用基因枪法将其导入水稻(Oryza sativa L.ssp.japonica)。经PCR扩增和Southern杂匀分析,证明外源目的基因已整合到水稻基因组中。GUS组织化学染色及豌豆凝集素基因的Western印迹实验和表达产物的原位杂交,证实外源基因在转基因水稻中表达。在40个转化植株中18株有pl和phb基因的PCR产物,得率为45%。再用18株植物做pl基因的Western blot检测,有3株有翻译表达,占40株的7.5%,18株的17%。为水稻与根瘤菌的相互作用和固氮作用的可能性研究奠定了一定的基础。 相似文献