B.t.c. cry1C全长基因的克隆及其在增产菌中的表达*

设计的一对引物 ,对苏云金芽孢杆菌科默尔亚种 (Bacillusthuringiensissubsp .colmeri)1 5A3菌株中的cry1C基因进行PCR扩增 ,得到包括结构基因 ,调节基因在内的全长为40kb的PCR产物。经两步克隆 ,将此基因连接至穿梭表达载体pHT315上 ,得到重组质粒pHT 1C。通过电转化将其导入一株增产菌蜡状芽孢杆菌 (Bacilluscereus) 9509菌株 ,SDS-PAGE检测到 1条 60kD左右的蛋     

苏芸金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白cry基因研究的现状

1Bt种系cry墓因的多样性苏芸金芽抱杆菌（ffecillusthuringiensis简称Bt）是一种能在芽抱形成期间产生多种蛋白晶体的革兰氏阳性菌。它最早在日本发现于家蚕的摔倒病［‘］,1915年Be山ner再次发现并定名,并于1938年在法国首次成为商品［’l。它的毒素对包括大量农林及卫生害虫在内的无脊椎动物的4个门和节肢动物门中9个目的生物有毒杀活性l’］。截止1994年,已发现它的45个血清型、58个亚种l‘］,1996年达到55个血清型I’］（法国巴斯德所BSn1S保藏中心资料）。出于众所周知的应用方面的价值,人们更关心的是Bt的杀虫晶体蛋白（Inse…     

中国苏云金芽孢杆菌的分布与cry基因的多样性

采集全中国27个省、自治区及4个直辖市昆虫孳生地粉尘、土壤等样品1080份,在其中的406份中分离到苏云金芽孢杆菌965株.镜检可观察到大菱形、小菱形、方形、长方形、圆形、椭圆形、镶嵌形和不规则形等8种主要形态的伴孢晶体;采用cryⅠ、cryⅡ、cryⅢ、cryⅣ和cryⅤ基因的通用引物对221株Bt分离株进行的PCR检测结果表明各类基因的含量依次为cryⅠ＞cryⅡ＞cryⅤ＞cryⅢ基因,分别占被检菌株的75.6%、67.9%、58.4%和14.5%,没有检测到cryⅣ基因,共得到10种基因组合类型.对其中含有cryⅠ基因的菌株分别以cryIAc、cryIC和cryIE基因的特异性引物进行PCR检测,得到20株同时含有cryIAc、cryIC、cryⅡ和cryⅤ优良基因组合的Bt分离株,其中菌株Bt-15A3对棉铃虫、甜菜夜蛾及小菜蛾均表现出高毒力,具有生产开发潜力.     

球形芽孢杆菌与苏芸金杆菌对淡色库蚊毒性的比较

用12株好氧芽孢杆菌对尖音库蚊淡色变种进行了毒性比较,对其中的球形芽孢杆菌1593及苏芸金杆菌以色列变种1897进行了毒力、生长周期、培养条件、高温处理以及不周龄期敏感性的实验。讨论了此类菌毒杀蚊虫本质上的相似性以及开发这类菌的重要意义。     

球形芽孢杆菌对淡色尖音库蚊的毒性及新分离株

1980年秋我们从Myers和Yousten博士处引入蚊虫病原菌球形芽孢杆菌(Bacillus sphaericus)1593及SSII-1菌株,与天津市卫生防疫站协作在筛选对淡色库蚊(Culex pipiens varpallens Coq.)高效菌的同时,对B.s-1593和苏云金杆菌以色列变种1897(Bacillus thuringiensis var.israelensis 1897)进行培养特性、热处理、冷藏、超声等对毒力影响的对比。发现B.s-1593和B.t-1897对上述处理稳定性相似,容易培养;对65℃下30分钟;80℃下12分钟;0°—4℃贮存15天均不丧失杀虫活性。1593对淡色库蚊3龄幼虫的LC_(50)为原液稀释349万倍(1.17×10~3菌/毫升),B.s-1593有别于B.t-1897的特点是:它毒杀蚊虫的死亡高峰比B·t-1897慢8—12小时,详细内容另文发表。     

中国Btken-Ag的特性及其杀虫毒肽的研究

苏芸金芽孢杆菌肯尼亚亚种Ag株(Bacillus thuringiensis serovar.kenyae strainAg,以下简称为Btken-Ag)是血清型H4a-4c中对棉铃虫、粘虫等多种夜蛾科害虫具有高毒力的优良品系,经生理生化、H抗原、酯酶谱、抗生谱和质粒谱等性状比较分析,与标准株肯尼亚亚种023大体相同,但其质粒谱及伴孢晶体多肽组分与023明显有别.该菌株伴孢晶体多形,其主要杀虫成分为61000多肽,经ELISA同源分析,此毒肽与同血清型中的023、7501晶体蛋白高度同源,与商品生产株H3a-3b—HD-1株部分同源,与对蚊虫高效的H14-1897及球形芽孢杆菌Ts-1无同源性.此外,对H4中10株相关株、H7-5、HD-1及1897共13株进行了对棉铃虫、粘虫及蚊虫的杀虫毒力比较测定,其中Btken-Ag的优选株H4-1及b1-4对棉铃虫的毒力高于023株及HD-1株.     

野生Bc菌株产黑色素的研究

Bc58是一株野生蜡状芽抱杆菌菌株,经L-酪氨酸诱导后可产生红棕色色素。通过红外光谱及各种化学测定证明该色素与Sigma公司标准黑色素（Melanin）的性质相似。生测结果显示添加Bc58黑色素的Bt制剂经紫外照射5h后的LC50为16．1μg／mL,与未经紫外照射的Bt制剂的LC50 15．2μg／mL基本相同,而比未添加黑色素的Bt制剂经紫外照射后的杀虫毒力高出近1倍。经SDS—PAGE检测表明该黑色素可保护苏云金杆菌晶体蛋白在紫外光下基本不降解,表明Bc58黑色素是一种优良的紫外保护剂。