铜绿假单胞菌和阴沟肠杆菌超超广谱β-内酰胺酶的检测

目的：了解多重耐药的铜绿假单胞菌和阴沟肠杆菌的主要耐药机制超超广谱β-内酰胺酶即超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和高产AmpC酶的产生情况。方法：建立一种简易快速地检测超超广谱β-内酰胺酶的K-B药敏试验法：首先选择5种药敏纸片：IMP、FOX、FEP、CTX、CD03,依据纸片的抑菌环直径综合判断分析。怀疑产AmpC酶的菌株,用OBs抑制试验进一步证实。结果：使用该法分别检测产AmpC酶、ESBLs的4株标准株和多重耐药的70株铜绿假单胞菌和30株阴沟肠杆菌,结果各种标准株检测无误。70株铜绿假单胞菌中产AmpC酶的有40株,产ESBLs的有18株,同时产AmpC酶和ESBLs的是5株,还有9株细菌两类酶检测均阴性,原因待分析。同时利用此试验法检测铜绿假单胞菌的诱导阳性率为42／70(60％)和阴沟肠杆菌的诱导阳性率为16／30(53．3％)。结论：此法简易快速,能较好地鉴别产ESBLs或和AmpC酶株,并适用于临床常规检验。     

产科感染革兰阴性菌株产超β-内酰胺酶检测及耐药性分析

目的 了解引起产科感染革兰阴性杆菌产超β-内酰胺酶（ESBLs）及耐药情况。方法采用ESBLs确认试验检测ESBLs,头孢西丁三维试验检测AmpC和K-B进行药敏试验。结果 革兰阴性杆菌ESBLs、AmpC酶总检出率分别为32．0％、33．6％,单产ESBLs、单产AmpC、同产ESBLs＋高产AmpC酶和ESBLs＋诱导AmpC酶菌株依次占11．9％、13．5％、14．1％和6．03％．总分离株对亚胺培南、头孢哌酮-他唑巴坦的耐药率分别为5．28％、6．54％,其次为头孢吡肟,为25．0％。单产酶株较非产酶株,双产酶株较单产酶株具有较高的耐药率。结论 产酶是产科感染革兰阴性菌株多重耐药的主要原因之一,亚胺培南和头孢哌酮-他唑巴坦、头孢吡肟（FEP）对其具有良好的抗菌活性。     

血液透析患者感染的菌群分布和耐药性分析

目的了解引起血液透析感染菌群分布及耐药情况。方法用K-B法进行药敏试验,对革兰阴性菌采用ESBLs确认试验检测ESBLs,头孢西丁三维试验检测AmpC。结果本组分离的259株细菌中,革兰阴性菌179株,占69.1%,主要致病菌为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌。革兰阳性菌80株,占30.9%,以金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌居前2位。革兰阴性杆菌ESBLs、AmpC酶总检出率分别为42.4%、39.1%,单产ESBLs、单产AmpC、同产ESBLs 高产AmpC酶、ESBLs 诱导AmpC酶菌株依次占15.6%、12.3%、16.8%、10.1%。革兰阳性分离株除对万古霉素、替考拉宁、喹奴普汀-达福普汀、利福平的耐药率较低外,其余抗生素的耐药率均大于50.0%。革兰阴性分离株对亚胺培南、美罗培南、头孢哌酮/他唑巴坦的耐药率分别为5.02%、3.35%和6.70%,产酶株较非产酶株具有较高的耐药率。结论血液透析患者细菌感染以金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌为主,万古霉素、替考拉宁对革兰阳性菌,亚胺培南、美罗培南和头孢哌酮/他唑巴坦对革兰阴性菌具有良好的抗菌活性。     

摩根摩根菌β-内酰胺酶检测及耐药性分析

目的了解摩根摩根菌临床分离株产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）、头孢菌素酶（AmpC）、金属酶（MBLs）、碳青霉烯酶（KPC）情况,并分析其对17种常见抗菌药物的耐药性。方法 ESBLs和AmpC及MBLs采用三维试验检测,碳青霉烯酶采用改良Hodge试验进行检测,并以K-B法测定17种常见抗菌药物的耐药性。结果 102株摩根摩根菌单产ESBLs 15株,检出率为14.71%;单产AmpC 8株,检出率为7.84%;单产金属β-内酰胺酶（MBLs）3株,检出率为2.94%;所有菌株中未检出碳青霉烯酶（KPC）;同产ESBLs及AmpC 6株,检出率为5.88%;未发现其他双产酶菌株。摩根摩根菌非产酶分离株对17种抗生素的耐药率均低于50.0%;摩根摩根菌产酶分离株对亚胺培南、美罗培南培南的耐药率低于15.0%,与非产酶菌株相比,差异无统计学意义（P〉0.05）;对其余抗生素的耐药率均明显高于非产酶菌株（P〈0.05）。同产ESBLs＋AmpC与耐亚胺培南摩根摩根菌分离株呈多重耐药。结论我院摩根摩根菌分离株产生多种β-内酰胺酶,且对常用抗生素耐药性比较严重,建议临床医师合理使用抗生素,以免耐药菌株的产生。     

肠杆菌科细菌耐碳青霉烯类抗菌药物耐药机制的研究进展

碳青霉烯类药物由于其良好的细胞通透性及高度的酶稳定性,是治疗产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和AmpC酶革兰阴性杆菌感染的有效抗菌药物,对肠杆菌科细菌有非常强的抗菌活性,但随着临床的广泛应用,临床已出现了对其耐药的肠杆菌科细菌,且不断有新的耐药基因被发现。本文就其耐药机制、检测方法、常用抗菌药物的选择及预防措施等问题作一综述。     

重症监护病房革兰阴性杆菌产ESBLs、产AmpC酶的检测与耐药性

目的了解重症监护病房（ICU）革兰阴性杆菌产ESBLs、AmpC酶的情况及其耐药性,指导临床用药。方法回顾性分析2001年1月至2004年12月ICU病房患者感染性标本中大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌产ES—BLs、AmpC酶的耐药情况。结果92株大肠埃希产ESBLs、产AmpC酶的检出率分别为64．1％和27．2％;86株肺炎克雷伯菌产ESBLs、产AmpC酶的检出率分别为52．3％和29．1％。这些细菌呈多重耐药且两种产酶菌株耐药性也略有不同。结论需加强ICU病原菌耐药性监测,指导临床合理用药。     

鲍曼不动杆菌高活性β-内酰胺酶检测与耐药性变迁

目的 了解中山大学附属第三医院鲍曼不动杆菌临床分离株AmpC酶、超广谱β-内酰酶（ESBLs）和金属β-内酰胺酶（MBLs）的产生情况及其耐药性。方法 采用Microscan WalkAway-40全自动微生物鉴定仪及配套阴性菌药敏复合板进行菌种鉴定与药敏试验,改良酶提取物头孢西丁和头孢曲松三维试验检测AmpC酶和ESBLs,E试验MBL试条检测MBLs。结果 AmpC酶和ESBLs产酶株总检出率为26．8％（57／213）,未检出产MBLs株。药敏结果提示对亚胺培南敏感率最高,其次是氨苄西林-舒巴坦、头孢吡肟、哌拉西林-他唑巴坦。结论鲍曼不动杆菌耐药性高,产生高活性β-内酰胺酶是介导其耐药的机制之一,亚胺培南仍是治疗该菌感染最为有效的药物。     

小儿呼吸道感染肺炎克雷伯杆菌耐药性和基因型研究

目的探讨临海地区小儿呼吸道感染肺炎克雷伯杆菌产超β-内酰胺酶（ESBLs和AmpC酶）的耐药性及耐药基因型分布情况。方法采用VITEK-60型全自动细菌鉴定仪鉴定细菌,按CLSI推荐的确证试验检测ESBLs和K-B纸片法测定药敏结果;采用头孢西丁纸片扩散法筛选产AmpC酶阳性菌株,采用PCR检测AmpC酶基因,并对产物进行测序分析基因型。结果113株肺炎克雷伯杆菌ESBLs和AmpC酶总检测率分别为29．20％和18．58％,其中单产ESBLs、单产AmpC酶和同产AmpC酶＋ESBLs检出率分别为23．01％、12．39％和6．19％;AmpC酶阳性菌株的耐药基因型：16株为DHA-1型,5株为ACT-1型。药敏试验：所分离的肺炎克雷伯杆菌对亚胺培南全部敏感,对喹诺酮类耐药率很低,对大多β-内酰胺类抗生素耐药率较高,并且产酶株的耐药性明显高于非产酶株,耐药现象在同产ES-BLS和AmpC酶菌株中更为严重。结论临海地区小儿呼吸道分离的肺炎克雷伯杆菌产ESBLs和AmpC酶检出率较高;AmpC酶以DHA-1基因型流行为主,产酶株呈现出高度多重耐药性。     

外科156株产超广谱β-内酰胺酶革兰阴性杆菌的检测和药敏分析

目的研究外科病房产超广谱β-内酰胺酶革兰阴性杆菌(ESBLs)对常用抗生素的耐药性以指导临床合理用药。方法用VITEK-60对外科标本分离出的病原菌进行检测．用K-B法检测其对常用抗生素的耐药性。结果2002年1月～2004年10月从中山大学附属第一医院外科各类标本中共分离出的156株产ESBLs革兰阴性杆菌,对头孢菌素都有较高的耐药率．亚胺培南仍然为治疗产ESBLs细菌的最有效药物。结论开展对细菌的耐药监测并及时向临床反馈,对合理选用抗生素并延缓耐药细菌的产生具有重要意义。     

头孢他啶耐药褪色沙雷菌β-内酰胺酶检测及耐药性分析

目的了解头孢他啶耐药褪色沙雷菌临床分离株产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）、头孢菌素酶（AmpC）及碳青霉烯酶情况,并分析其对14种常见抗菌药物的耐药性。方法 ESBLs、AmpC采用三维试验进行检测;碳青霉烯酶采用改良Hodge试验进行检测;药物敏感试验采用K-B法测定。结果 112株头孢他啶耐药褪色沙雷菌ESBLs、AmpC检出率较高;未发现同产ESBLs、AmpC及碳青霉烯酶3种酶的菌株。产ESBLs、AmpC褪色沙雷菌对亚胺培南、美罗培南的耐药率低于6.00%,与非产酶菌株相比,差异无统计学意义（P〉0.05）;对头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、头孢比肟的耐药率均明显高于非产酶菌株（P〈0.01）。另外,同产ESBLs＋AmpC头孢他啶耐药褪色沙雷菌分离株与单产酶株相比,对头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、头孢比肟、复方新诺等多种抗生素耐药率差异有统计学意义（P〈0.01或P〈0.05）。碳青霉烯酶株对14种常见抗生素多重耐药或泛耐药。结论我院头孢他啶耐药褪色沙雷菌分离株对常用抗菌药物的耐药性较高,耐药性的产生与细菌产多种β-内酰胺酶有关。     

产AmpC酶阴沟肠杆菌的基因分析及其耐药性

探讨昆明地区阴沟肠杆菌的耐药性及与结构基因ampC和调节基因ampD的相关性。通过K-B法检测阴沟肠杆菌的药敏情况,头孢西丁三维试验检测AmpC酶,PCR法扩增ampC和ampD基因。结果显示74株阴沟肠杆菌经头孢西丁三维试验检测,产AmpC酶的有17株,检出率为22.3%,而且产酶菌株抗生素敏感率低于非产酶菌株。ampC基因扩增阳性率为89.2%(66/74);64株ampD基因阳性率为86.5%(64/74)。实验证实昆明地区产酶阴沟肠杆菌耐药状况严重,与结构基因ampC和调节基因ampD密切相关。     

肺炎克雷伯菌ESBLs及AmpC酶的基因分布检测与耐药特性的相关性研究

目的研究肺炎克雷伯菌ESBLs及AmpC酶的基因分布与耐药特性的相关性。方法收集2008年1月至2013年12月临床分离的100株肺炎克雷伯菌,采用K-B法进行体外药敏试验,采用ESBLs确证试验和AmpC三维试验确定产酶表型,采用聚合酶链式反应进行ESBLs酶及AmpC酶基因的检测。结果60株检测出ESBLs酶,其中60株内检出ESBLs基因阳性56株,主要为SHV型基因;检出AmpC酶的检测6株,主要为DHA型基因。其中两种基因同时阳性者1株。除哌拉西林/他唑巴坦,单产AmpC酶、ESBLs及两种基因同时阳性菌（SSBLs）对其他17种常用抗生素的耐药率均高于不产酶菌株。结论医院肺炎克雷伯菌的主要耐药机制为ESBLs酶及AmpC酶基因。ESBLs耐药基因检出率高,ESBLs阳性株耐药率明显高于ESBLs基因阴性株。     

Molecular characteristics of extended-spectrum beta-lactamases and qnr determinants in Enterobacter species from Japan

The incidence of extended-spectrum β-lactamases (ESBLs) has been increasing worldwide, but screening criteria for detection of ESBLs are not standardized for AmpC-producing Enterobacteriaceae such as Enterobacter species. In this study, we investigated the prevalence of ESBLs and/or AmpC β-lactamases in Japanese clinical isolates of Enterobacter spp. and the association of plasmid-mediated quinolone resistance (PMQR) determinants with ESBL producers. A total of 364 clinical isolates of Enterobacter spp. collected throughout Japan between November 2009 and January 2010 were studied. ESBL-producing strains were assessed by the CLSI confirmatory test and the boronic acid disk test. PCR and sequencing were performed to detect CTX-M, TEM, and SHV type ESBLs and PMQR determinants. For ESBL-producing Enterobacter spp., pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) was performed using XbaI restriction enzyme. Of the 364 isolates, 22 (6.0%) were ESBL producers. Seven isolates of Enterobacter cloacae produced CTX-M-3, followed by two isolates producing SHV-12. Two isolates of Enterobacter aerogenes produced CTX-M-2. Of the 22 ESBL producers, 21 had the AmpC enzyme, and six met the criteria for ESBL production in the boronic acid test. We found a significant association of qnrS with CTX-M-3-producing E. cloacae. The 11 ESBL-producing Enterobacter spp. possessing bla(CTX-M), bla(SHV), or bla(TEM) were divided into six unique PFGE types. This is the first report about the prevalence of qnr determinants among ESBL-producing Enterobacter spp. from Japan. Our results suggest that ESBL-producing Enterobacter spp. with qnr determinants are spreading in Japan.     

阴沟肠杆菌产AmpC酶菌和非产酶菌的耐药性研究

目的：探讨阴沟肠杆菌分布特征及产AmpC酶菌和非AmpC酶菌的耐药性。方法：对临床分离的158株阴沟肠杆菌分布科室、感染部位及对16种抗生素耐药性进行分析,并通过酶粗提物头孢西丁三维试验结合PCR法检测AmpC酶。结果：标本来源主要为患者的痰液、尿液、创口分泌物等,科室以重症监护室为多,感染部位以呼吸道为主,耐药性较高的抗生素为头孢西丁、头孢噻肟、头孢曲松等,158株阴沟肠杆菌中产AmpC酶菌株共33株,产AmpC酶阳性率占总菌株数20．9％,产AmpC酶菌株对各种抗生素的耐药率比不产AmpC酶的明显增高。结论：阴沟肠杆菌的耐药与产AmpC酶有关,治疗首选亚胺培南。     

长沙某医院产质粒AmpC酶型肺炎克雷伯菌的多重PCR检测与分析

为了了解湖南长沙某医院临床分离的肺炎克雷伯菌中质粒介导AmpC β-内酰胺酶的产生情况及其基因型,收集了该医院2008年3月至2010年10月临床分离的多重耐药肺炎克雷伯菌104株,用头孢西丁纸片扩散法对这些菌株进行表型初筛,用多重PCR确定ampC耐药基因型;结果发现其中有19株对头孢西丁纸片不敏感,疑为产AmpC酶菌株;再经多重PCR扩增,有12株菌分别在约400 bp（11株）和约350 bp（1株）出现了阳性条带,特异性PCR证明此12株菌分别携带了DHA型（11株）和ACC型（1株）ampC耐药基因;产质粒介导AmpC酶肺炎克雷伯菌的分离率为11.5%（12/104）。该医院产质粒介导AmpC酶肺炎克雷伯菌的分离率较高,应对其检测与监测给予足够重视,以指导临床合理选用抗菌药物。     

头孢西丁耐药肺炎克雷伯菌AmpC基因和ESBLs检测及耐药性分析

目的了解深圳地区头孢西丁耐药肺炎克雷伯菌头孢菌素酶(AmpC酶)基因型分布、产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的情况及其耐药特点。方法收集深圳地区三家大型综合医院临床标本分离对头孢西丁耐药的肺炎克雷伯菌73株。用碱裂解法提取菌株的质粒,采用多重PCR扩增AmpC基因,应用DNA测序确定其基因型。并对所有菌株进行ESBLs表型确证试验;用K-B法对其进行药物敏感试验。结果 48株(65.8%)AmpC基因扩增阳性,经DNA测序显示,其中46株为DHA-1型,1株为CMY-2型,1株同时产DHA-1和CMY-2型;73株肺炎克雷伯菌中49株ESBLs阳性,其中36株AmpC基因和ESBLs均为阳性。AmpC和(或)ESBLs阳性菌株对多数药物的耐药率高于AmpC和ESBLs均阴性者。结论本地区头孢西丁耐药肺炎克雷伯菌质粒AmpC酶检出率高,基因型主要为DHA-1,同时产AmpC酶和ESBLs菌株较常见。     

EDTA纸片法和三维试验检测阴沟肠杆菌AmpC酶的比较

目的比较EDTA纸片法及头孢西丁三维试验检测阴沟肠杆菌AmpC酶的符合程度。方法收集近几年阴沟肠杆菌株97株临床菌株,应用EDTA纸片法和三维试验分别检测97株阴沟肠杆菌的AmpC酶,并进行比较。结果 97株受检菌中,75株EDTA纸片法和三维试验均阴性,20株两种方法均阳性,2株菌EDTA纸片法阴性,而三维试验阳性。两种检测方法阳性符合率为90.9%,阴性符合率为100%,总符合率为97.9%。结论 ED-TA纸片法检测阴沟肠杆菌与三维试验的符合率高,且操作简便,较适合于临床实验室应用。