高灵敏假单胞菌铁载体的平板检测方法

CAS蓝色检测平板是一种筛选、检测各类细菌铁载体的常用方法,而蔗糖-天冬酰氨培养基被用于假单胞菌产铁载体规律的研究。用天冬氨酸替代天冬酰氨,将CAS蓝色检测液与蔗糖-天冬氨酸培养基（MSA培养基）相结合,得到一种改进的MSA-CAS检测平板。通过对假单胞菌属7个种8个株进行荧光与非荧光铁载体检测方面的比较研究,结果表明MSA-CAS检测平板假单胞菌铁载体的检测灵敏度比通用CAS检测平板高,而且在检测荧光铁载体方面具有荧光背景低、荧光铁载体晕圈明显和晕圈与背景的对比度大的优点。     

假单胞菌荧光与非荧光铁载体对铁离子的应答差异

假单胞菌既能产荧光铁载体也能产非荧光铁载体.通过对假单胞菌在不同铁离子浓度下,在通用CAS(Chrome azroul S)检测平板、改进的蔗糖-天冬氨酸(SA)平板(MSA)上以及通用液体CAS培养基和MSA培养基内的铁载体产生情况的比较,发现在通用CAS的液体培养基上产生的主要为非荧光铁载体(pyochelin),而在改进的MSA培养基上产生的主要为荧光铁载体(pyoverdine);在铁离子的应答方面,pyoverdine较pyochelin灵敏,较低的铁离子浓度即可抑制荧光铁载体的产生,但是不能抑制非荧光铁载体.     

双层平板法检测嗜盐古菌铁载体

采用双层平板法应用于嗜盐古菌铁载体的原位检测.双层平板的上层为不添加铁离子的嗜盐古菌培养基,嗜盐古菌可在其上生长,在缺铁胁迫下可向外界分泌铁载体;下层为含有CAS检测液用于铁载体检测的琼脂.当上层平板生长的嗜盐古菌分泌的铁载体透过培养基渗透到下层检测琼脂后,即可在下层检测平板上产生明显的特征性的铁载体螯合晕圈,表明双层平板法在嗜盐古菌的铁载体检测中确实可行,且较原有的嗜盐古菌铁载体检测方法简便、直接.     

双层平板法检测嗜盐古菌铁载体

采用双层平板法应用于嗜盐古菌铁载体的原位检测。双层平板的上层为不添加铁离子的嗜盐古菌培养基, 嗜盐古菌可在其上生长, 在缺铁胁迫下可向外界分泌铁载体; 下层为含有CAS检测液用于铁载体检测的琼脂。当上层平板生长的嗜盐古菌分泌的铁载体透过培养基渗透到下层检测琼脂后, 即可在下层检测平板上产生明显的特征性的铁载体螯合晕圈, 表明双层平板法在嗜盐古菌的铁载体检测中确实可行, 且较原有的嗜盐古菌铁载体检测方法简便、直接。     

CAS平板覆盖法检测氢氧化细菌铁载体

【目的】用CAS平板覆盖法检测氢氧化细菌铁载体,解决通用CAS琼脂平板法中十六烷基三甲基溴化铵对真菌和某些细菌的生长抑制问题。【方法】将改良的CAS检测培养基覆盖在长满菌落的无铁培养基上,生长抑制问题因微生物未与十六烷基三甲基溴化铵直接接触而解决。【结果】3株氢氧化细菌SDW-5、SDW-9和AaP-13均能产生单菌落,加入CAS检测培养基1 h后,菌落周围产生明显的铁载体晕圈。【结论】本方法成功解决了生长抑制问题,可以作为检测微生物铁载体的通用方法。     

一株花生根际铁载体产生菌的分离鉴定及耐药性分析

目的：从花生根际筛选铁载体产生能力较强的菌株,对其进行鉴定及耐药性分析。方法：用梯度稀释法从花生根际中分离出细菌,在刃天青（CAS）检测平板上依显色圈的大小从中筛选出一株铁载体产生能力较强的菌,并对其进行生理生化鉴定和16S rDNA序列分析,用抗生素梯度平板检测其对9种常见抗生素的抗性。结果：筛选出一株产铁载体的菌株D15,13项生理生化指标除甲基红试验呈阳性外,其他均与恶臭假单胞菌相同;其16S rDNA与恶臭假单胞菌的同源性为100%;该菌对氨苄青霉素、氯霉素、利福平、红霉素、新霉素、链霉素、四环素都有不同程度的的抗性,对卡那霉素和庆大霉素表现较强的敏感性。结论：获得铁载体产生菌D15,经鉴定为恶臭假单胞菌,该菌耐药性符合用转座子诱变法研究铁载体合成的相关基因的条件。     

一株棉花根际铁载体产生菌E19的分离鉴定

目的：从棉花根际细菌中筛选出铁载体产生能力较强的菌株并对其进行鉴定。方法：用梯度稀释法从棉花根际中分离出细菌,再通过在CAS检测平板上显色圈的大小从中筛选出铁载体产生能力较强的菌株,并对其进行生理生化鉴定和16S rDNA序列分析。结果：筛选出一株铁载体产生能力较强的菌株E19,13项生理生化指标除甲基红试验呈阳性外,其它均与恶臭假单胞菌相同。其16S rDNA与恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）的同源性为100％。     

小麦根圈细菌铁载体的检测

本文报道微生物铁载体定性与定量测定的方法,以及小麦根圈细菌铁载体的室内检测结果。２２株小麦根圈耐寒细菌和２株固氮菌在定性检测平板上产生铁载体,另有３株固氮菌不产。定量测定结果表明：３６株水溶性色素产生菌合成铁载体的量在０．７１５－０．１０６（Ａ／Ａｒ）之间,其中属于荧光假单胞菌群的２５个菌株铁载体产量的测定值（Ａ／Ａｒ）在０．１８４－０．１０６之间,达极高量水平。     

高产铁载体荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens sp-f的筛选鉴定及其铁载体特性研究

采用改进的CAS检测平板从东湖中筛选得到了一株高产铁载体细菌sp-f,并用CAS检测液定量检测其分泌铁载体量,发现其As/Ar仅0.09(OD680),Su(Siderophore Unit)为90%,达到产铁载体菌最高级。用BIOLOG检测板,结合细菌生理生化反应、形态观察和16S rDNA序列比对分析等分类鉴定方法,确定sp-f为一株荧光假单胞菌。P.fluorescenssp-f生长过程中胞外铁载体的量在对数生长前期累积达到最高后有所减少,至稳定期时菌液中铁载体量达到稳定。在已知铁载体特异吸收峰波长下,用反向高效液相色谱检测无铁环境和高铁环境下培养液上清,比较发现sp-f上清含有3种含儿茶酚胺类基团铁载体,其中包括荧光和非荧光性的脓菌素,200μmol/L Fe2 可完全抑制荧光性质脓菌素的分泌,但非荧光脓菌素的分泌不受抑制,并且对非脓菌素的儿茶酚胺类铁载体的合成分泌反而具有一定的诱导作用。     

Pseudomonas fluorescens sp-f铁载体高效液相凝胶色谱分析

利用高效液相凝胶色谱法对荧光假单胞菌所产铁载体进行了分析,结果显示高产铁载体P.fluorescens sp-f与P.fluorescens AB92001均可分泌3种铁载体,其中具有荧光的pyoverdine容易被细胞外的铁抑制。高效液相凝胶色谱法适用于假单胞菌铁载体的分析检测。     

高产铁载体荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens sp-f的筛选鉴定及其铁载体特性研究

采用改进的CAS检测平板从东湖中筛选得到了一株高产铁载体细菌sp-f,并用CAS检测液定量检测其分泌铁载体量,发现其As/Ar仅0.09(OD680),Su（Siderophore Unit）为90％,达到产铁载体菌最高级。用BIOLOG检测板,结合细菌生理生化反应、形态观察和16S rDNA序列比对分析等分类鉴定方法,确定sp-f为一株荧光假单胞菌。P. fluorescens sp-f生长过程中胞外铁载体的量在对数生长前期累积达到最高后有所减少,至稳定期时菌液中铁载体量达到稳定。在已知铁载体特异吸收峰波长下,用反向高效液相色谱检测无铁环境和高铁环境下培养液上清,比较发现sp-f上清含有3种含儿茶酚胺类基团铁载体,其中包括荧光和非荧光性的脓菌素,200 μmol/L Fe²⁺可完全抑制荧光性质脓菌素的分泌,但非荧光脓菌素的分泌不受抑制,并且对非脓菌素的儿茶酚胺类铁载体的合成分泌反而具有一定的诱导作用。     

黑麦草根际铁载体产生菌WN-H3的分离鉴定及其产铁载体培养条件的优化

从黑麦草(Lolium perenne L.)根际土壤中分离得到28份菌株,采用刃天青(chrome azural S,CAS)平板检测法定性、定量筛选出1株产铁载体能力较强的细菌WN-H3,经过菌落形态、生理生化特征、16S r DNA序列同源性和系统发育分析,初步判断为一株弗村假单胞菌(Pseudomonas vranovensis)。在摇瓶水平上采用单因子法分别研究了铁载体合成菌株WN-H3的碳、氮源利用效果及培养温度、摇床转速、培养基初始p H值等因素对菌株生长及铁载体合成能力的影响,最终优化得到铁载体产生菌的最佳发酵条件:蔗糖10 g/L,酵母浸出粉5 g/L,Na Cl 5 g/L,温度28℃,转速180 r/min,p H7.5,该条件下培养48 h后菌株WN-H3产生的铁载体活性su值可达80.4%。实验表明,优化后的培养条件更利于铁载体产生菌的生长和铁载体合成。     

一株产铁载体内生细菌对尖孢镰刀菌的拮抗作用

通过改良蔗糖-天冬氨酸培养基筛选到一株产铁载体的内生细菌HS-4,测定了该菌在不同铁离子浓度下对棉花枯萎病致病菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)的抑菌效果,并结合形态、生理生化、16S rDNA序列同源性和系统发育分析对菌株进行鉴定.结果表明:内生细菌HS-4在MSA培养基中产生荧光型铁载体,其铁载体相对含量为80%.该铁载体在低铁条件下对F.oxysporum具有抑制作用.内生细菌HS-4初步鉴定为萎缩芽孢杆菌(Ba-cillus atrophaeus).     

假单胞菌株JKD—2分泌铁载体抑制稻瘟病菌

利用铬奥醇（CAS）分析法测定了假单胞菌（Pseudomonassp．）JKD－2分泌铁载体的特征。在无铁环境下JKD-2菌能分泌高亲和力的铁载体;在低铁条件下,铁载体的分泌量减少;在富铁环境下,则不能分泌。结果还显示菌株JKD-2在无铁条件下分泌的铁载体,能在低铁条件下抑制稻瘟病菌（Piriculariaoryzae）的生长。     

假单胞菌铁载体及色素研究

假单胞菌分布广泛,种类繁多,能够产生多种结构的铁载体及具有特定颜色的色素化合物,这使假单胞菌在生物病害防治、医学研究等领域应用潜力巨大.假单胞菌铁载体具有菌种和菌株特异性,可在一定程度上作为其分类依据.假单胞菌色素具有色调、结构、功能多样性,与其铁载体在功能上具有一定重叠性.假单胞菌铁载体及色素分离纯化方法相对比较简单,但它们的生物合成及转运代谢机制非常复杂.     

假单胞菌株JKD—2分泌铁载体抑制稻瘟病菌*

利用铬奥醇（CAS）分析法测定了假单胞菌（Pseudomonassp．）JKD－2分泌铁载体的特征。在无铁环境下JKD-2菌能分泌高亲和力的铁载体;在低铁条件下,铁载体的分泌量减少;在富铁环境下,则不能分泌。结果还显示菌株JKD-2在无铁条件下分泌的铁载体,能在低铁条件下抑制稻瘟病菌（Piriculariaoryzae）的生长。     

适合高产铁载体细菌筛选、检测体系的改进与探析

采用pH6．8的磷酸缓冲液代替通用CAS固体检测培养基中的MM9缓冲体系,不加哌嗪二乙醇磺酸,得到颜色稳定、检测效果明显、配制方便,适合高产铁载体细菌筛选与检测的新型检测平板。根据CAS检测液连续吸收光谱比较分析结果,将CAS液体定量检测体系中的检测波长由630nm改为680nm,可以克服OD630读数偏高、易受干扰的问题,而且OD680与铁载体浓度线性关系不变,但采用OD680检测不同细菌产铁载体能力的差异更为明显,因此提高了CAS定量检测的灵敏度,更适合高产铁载体细菌筛选与检测。     

复合菌剂调控连作当归根围土壤养分及对产量的影响

【背景】连作可引起微生物群落结构失调,导致土壤环境恶化、养分循环不畅、当归[Angelica sinensis (Oliv.) Diels]产量降低,通过现代微生物技术改良土壤、消减连作障碍势在必行。【目的】于大田条件下,研究施用复合菌剂对当归根围土壤酶活、速效养分及产量的影响,明确增产机制,改进增产措施。【方法】利用溶磷圈法检测不同菌株溶磷活性、乙炔还原法检测固氮活性、试剂盒法检测过氧化物酶和硝化能力;复合菌剂T1[荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)CBS5、产碱假单胞菌(Pseudomonas alcaligenes) CBS7、嗜冷假单胞菌(Pseudomonas extremaustralis)CBSB、生枝动胶菌(Zoogloea ramigera) CBS4]和T2 (荧光假单胞菌CBS5、产碱假单胞菌CBS7、嗜冷假单胞菌CBSB)及对照CK (无菌马铃薯葡萄糖肉汤培养基)分别处理连作当归,分光光度法测定根围土壤及根中养分循环、转化相关酶活,氮、磷、钾速效养分含量;常规方法测产量;统计软件进行相关数据方差分析和主成分分析。【结果】产碱假单胞菌C...     

荧光假单胞菌M18 rpoD克隆及其对抗生素合成的影响

荧光假单胞菌M18对多种植物病原真菌具有显著的抑制作用。荧光假单胞菌(Pseuclomones fluo-rescens)M18能同时合成吩嗪-1-羧酸(PCA)和藤黄绿菌素(P1t)两种抗生素。从M18的基因组中克隆了rpoD基因,其相应的氨基酸序列与荧光假单胞菌CHAO中RpoD蛋白的氨基酸序列完全相同。利用基因重组技术和大肠杆菌-荧光假单胞菌穿梭质粒,pME6032,将rpoD置于强启动子Ptac的控制下,导入M18菌株。发现经重组质粒转化的M18,与对照相比,培养基中PCA和Plt开始累积的时间分别提前4h和8h,积累量提高1倍和6倍.     

烟草根际铁载体产生菌G-229-21T的筛选、鉴定及拮抗机理

[目的]从烟草根际筛选烟草疫霉[Phytophthora parasitica var.nicotianae(Breda de Hann)Tucker]拮抗菌,探索其拮抗机理.[方法]限铁(2.0 μmol/L FeCl3)蔗糖-天冬酰胺平板对峙法筛选烟草疫霉拮抗菌;刃天青(CAS)法检测其铁载体的产生及其对铁离子的亲和能力.结合形态、生理生化、16s rRNA序列同源性和系统发育分析及种特异性分子法对其进行鉴定.XAD-2吸附层析法提取其铁载体,分光光度法检测其铁载体类型.不同铁离子浓度下,比较其铁载体对烟草疫霉的抑制作用.[结果]我们筛选到一株限铁条件下烟草疫霉拮抗菌G-229-21T,该菌产生高亲和力铁载体,被初步鉴定为Pseudomonas mediterranea.该菌产生的羧酸型铁载体,在低铁条件下(0.16μmol/L～10μmol/L,FeCl3)对烟草疫霉的抑制率达92.3%以上,而在富铁条件下(100 μmol/L FeCl3)抑制率仅为2.0%.[结论]首次报道P. mediterranea G-229-21T产生高亲和力羧酸型铁载体,该铁载体在低铁条件下对烟草疫霉有显著的抑制作用.