重组人表皮生长因子的中试工艺研究

人表皮生长因子(hEGF)是最早发现最早应用于临床的多肽生长因子之一,由53个氨基酸组成,分子量约为6200Da。它具有多种生物学功能,能促进表皮和上皮细胞的增殖,刺激多种培养细胞的生长,增强蛋白质及DNA合成等。在临床上主要用于创烧伤救治、皮肤     

人表皮细胞生长因子及其研究进展

表皮细胞生长因子是人体内一种重要自分泌/旁分泌的生长因子。人表皮细胞生长因子及其受体调控细胞增殖、分化、迁移、生存等与细胞命运密切相关的过程,在细胞发育、伤口愈合、器官发生中发挥重要作用。本文将对人表皮细胞生长因子的合成、分泌、生化特性、分子结构、家族、受体、信号通路、生物学活性、生理功能、应用及制备方法等方面进行综述。     

肝素结合性表皮生长因子在心肌重塑中的作用

肝素结合性表皮生长因子（HB-EGF）是表皮生长因子家族成员之一。HB-EGF是多种细胞的有丝分裂原,参与一系列生理和病理过程,包括心肌细胞肥大,成纤维细胞增生,胶原纤维表达增多,是心肌重塑发生发展过程中的一个重要生长因子。本文综述了HB-EGF在心肌重塑过程中的研究进展。     

表皮生长因子受体

表皮生长因子受体（EGFR）是一种具有酪氨酸激酶活性的膜表面受体,其胞内区的3个亚区是其发挥酪氨酸激酶活性、介导信号转导的关键部位。表皮生长因子受体和其他的erbB受体可形成同源和异源的多种二聚体,不同的二聚体与表皮生长因子受体的6种配体形成的不同组合可将不同的细胞外刺激传入胞内。表皮生长因子可激活多种下游信号路径,产生多种生物学效应,ras-raf-MEK-erk/MAPK途径与增殖的激活有关,PI3K－PKC－IKK途径与细胞移动性的增强有关。表皮生长因子受体与肿瘤的发生发展和器官的修复有密切的关系,针对表皮生长因子受体的肿瘤治疗和器官修复具有良好的应用前景。     

表皮生长因子受体在正常大鼠眼组织中的表达

采用免疫组织化学方法观察了表皮生长因子受体在正常大鼠眼组织的表达。结果发现：角膜上皮的深层细胞和角膜缘上皮细胞、部分结膜上皮细胞和结膜下结缔组织内成纤维细胞均强烈表达表皮生长因子受体。结果显示：表皮生长因子受体阳性细胞主要分布于眼表层组织。这些细胞不仅是眼组织损伤后修复、而且是多种手术能否成功和某些疾病形成中起重要作用的细胞     

人表皮生长因子的研究进展

人表皮生长因子是激活表皮生长因子受体的生长因子家族的典型成员,由人体的多个组织器官合成与分泌,通过结合受体激活一系列信号途径,调控细胞的增殖、分化和迁移等。近年来,有关人表皮生长因子的研究已扩展到其在人类生理和病理作用的领域,尤其在组织再生和伤口愈合方面成为研究热点。文中综述了人表皮生长因子的研究进展,简要描述了其基因和蛋白的结构与特点、作用机制与生物学效应,重点介绍该生长因子在胃肠溃疡愈合、皮肤伤口修复和肿瘤病理过程中的作用与影响,从而为相关研究提供辅助信息。     

康复新液联合重组人表皮生长因子促进阴虚肠燥型肛裂术后创面愈合的临床观察

目的观察康复新液联合重组人表皮生长因子促进阴虚肠燥型肛裂术后创面愈合的临床效果。方法将60例阴虚肠燥型肛裂术后患者随机分为观察组和对照组各30例,两组患者均于术后第1天开始换药。对照组单纯采取重组人表皮生长因子喷洒创面换药,直至创面痊愈;观察组术后采取康复新液纱条填塞创面联合重组人表皮生长因子喷洒创面换药。比较两组患者的创面愈合时间及治疗效果。结果观察组的创面愈合时间为(26.28±2.81)天,对照组为(34.40±3.45)天,观察组的创面愈合时间明显短于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。两组治愈率比较,观察组为76.7%高于对照组的40.0%,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论康复新液纱条填塞创面联合重组人表皮生长因子喷洒创面换药可有效促进阴虚肠燥型肛裂术后创面愈合,提高治疗效果。     

小鼠颌下腺上皮细胞的培养及表皮生长因子的鉴定

体外培养小鼠颌下腺细胞,形态学观察可见有上皮样细胞生长。免疫细胞化学及蛋白质印迹转移分析结果表明,体外培养的颌下腺上皮样细胞可合成并分泌表皮生长因子。     

表皮生长因子对恒河猴创伤眼角膜的促恢复作用

本实验用５只恒河猴人工造成眼角膜创伤,基本一致地除去双眼角膜上皮细胞层,仅边缘部分残留有少量的角膜细胞,均以猴的右眼作实验处理,每日滴３次表皮生长因子溶液（生理盐水配制,浓度１３０μｇ／ｍｌ）;均原左眼作对照,每日仅滴３次生理盐水。每日用荧光素钠溶液滴眼,检查眼角膜创面的恢复进展情况,结果实验眼的创面在第３－４天完全恢复,对照眼则在第５－６天恢复,实验眼比对照眼约提前２－３天恢复,表明表皮生长因子     

烧伤膏对小鼠皮肤烫伤创面愈合的修复作用研究

目的:探讨烧伤膏对烫伤小鼠皮肤创面修复的可能作用机制。方法:将50只小鼠随机分为5组:正常组、模型组,烧伤膏高、中、低剂量组。除正常组和模型组外,烧伤膏实验组小鼠每天外涂烧伤膏治疗,连用15天。治疗结束后,采用Masson染色技术检测各组小鼠皮肤厚度及细胞病理形态;采用生化法检测皮肤中羟脯氨酸(Hyp)含量;采用ELISA技术检测皮肤中的TNF-α,IL-1β、Collagen I、EGF和TGF-β1的含量。结果:与正常组相比,模型组小鼠皮肤烫伤创面可见表皮细胞脱落,结构模糊,细胞变性坏死,表皮和真皮厚度明显减少,胶原纤维变薄,排列紊乱无序,呈断裂状;烧伤后创面局部组织中Hyp、TNF-α、IL-1β的含量显著升高(P0.01,P0.01,P0.01),而EGF、TGF-β1和Collagen I含量均明显减少(P0.01,P0.01,P0.01),而应用烧伤膏治疗15天后,上述各项实验指标明显得到改善。结论:烧伤膏抑制创面早期感染,减少胶原蛋白的分解和促进后期创面修复的作用可能与抑制炎性细胞因子和增加皮肤相关生长因子表达的作用机制有关。     

胎膜来源的间充质干细胞促进烧伤愈合的研究

目的:研究胎膜来源的间充质干细胞在治疗SD大鼠Ⅲ度烧伤中的作用.方法:用胰酶消化法分离足月产胎膜细胞,加入Amino-MAX Ⅱ培养基进行培养.流式细胞仪检测细胞表面标志物CD29、CD73、CDl4、CD45.分别用浓度为3mg/ml、5mg/ml、7mg/mi、9mg/ml的明胶溶液包被脱细胞真皮(ADM),以5x 106/ml的密度将细胞种植在包被和未包被的ADM表面,2小时后收集未贴附在ADM上的细胞,计算细胞种植效率.实验组:以7mg/ml的明胶包被ADM,以5x 106/ml的密度种植第2～3代细胞,培养3～5天后,移植至SD大鼠Ⅲ度烧伤创面;对照组Ⅰ移植单纯的ADM,对照组Ⅱ未进行移植,术后定期观察创面大体情况,计算创面收缩率、表皮再生面积比例,第5周切取新生皮肤组织行HE染色.结果:胎膜分离的细胞以长梭形为主,表达与间充质干细胞相关的表面抗原标志物CD29、CD73,极少表达造血细胞标志物CD14、CD45.不同浓度明胶溶液包被和未包被的ADM,其细胞种植效率均无明显区别(P>0.05);相比对照组,实验组移植物成活时间更长,创面再上皮化时间较早,创面收缩率较小,再生表皮面积亦较多(P<0.05);再生表皮更厚,有明显的表皮突,真皮层毛细血管丰富.结论:成功分离、培养了胎膜来源的间充质干细胞.胎膜来源间充质干细胞复合ADM可促进SD大鼠Ⅲ烧伤创面表皮再生,加速创伤愈合,抑制创面收缩.     

清得佳凝胶治疗烧伤创面的生物学作用

目的探讨清得佳凝胶治疗烧伤创面的效果及其意义。方法采用家兔皮肤创伤模型,将每只家兔的背部烧伤区域用2种不同颜色的记号笔分成二组:A组(n=9):为实验组(6个部位):常规方法清洁、消毒创口,使用清得佳凝胶涂抹;B组(n=9):为对照组(6个部位):使用常规的无菌敷料覆盖包扎创口。实验于第3、5、7、9天分别取各组皮肤组织进行切片,作组织病理学及免疫组织化学观察。结果1.HE观察结果:烧伤后第3天,A组与B组皮肤烧伤创面结构变化不明显;烧伤后第5天,A组表皮细胞变性坏死程度减轻,成纤维细胞增生,水肿减轻,而B组表皮细胞变性坏死减轻程度不明显,结缔组织胶原纤维变性坏死程度没有得到明显的改善;烧伤后第7天,A组表皮细胞生长良好,真皮组织水肿基本消失;而B组表皮细胞变性坏死程度开始出现减轻,可见部分上皮增生;烧伤后第9天,A组上皮及结缔组织结构基本接近正常,创面愈合情况较好。而B组以上结构出现改变,但愈合状况不是很理想,真皮组织轻、中度水肿,有少量的炎性细胞浸润。2.转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)的表达:烧伤后第3天和第5天,A组成纤维细胞胞浆中可见一些棕黄色颗粒,TGF-β1表达较强;B组成纤维细胞胞浆中未见或少见棕黄色颗粒,TGF-β1无表达或表达很弱。烧伤后第7天和第9天,A组成纤维细胞胞浆中可见密集分布的棕黄色颗粒,TGF-β1表达强;B组成纤维细胞胞浆中可见少量的棕黄色颗粒,TGF-β1表达弱。结论清得佳凝胶是一种烧伤创面良好的外用药,能清除创面坏死组织,有利于烧伤创面愈合。     

酵母系统表达人表皮生长因子研究进展

人源表皮生长因子是一种从人体内分离出的蛋白质,具有刺激细胞生长的作用,临床用途广泛。但由于天然来源有限,化学合成成本高,利用基因工程技术生产人表皮生长因子具有很好的前景。酵母系统作为一种典型的真核表达系统,在生产异源蛋白时能进行翻译后修饰,如糖基化、形成二硫键等,并能有效地将重组蛋白分泌到细胞外,有益于下游分离提取,在生产重组人表皮生长因子的研究中备受青睐。综述了利用酵母系统表达人表皮生长因子的研究进展,包括各种酵母表达系统在其中的应用,并分别比较其优势和劣势,在此基础上对未来的研究重点进行展望。     

短时低氧处理后表皮细胞差异表达基因及相关通路分析

目的探讨短时低氧处理后表皮细胞HaCaT转录组差异并找出低氧微环境下表皮细胞关键调控基因。方法本研究分低氧组和常氧对照组,低氧组在1%浓度低氧孵箱中培养30 min,常氧组在常规孵箱中培养30 min,其后采用Trizol法提取总RNA,采用基因芯片技术筛选差异基因,进一步对差异基因采用GO及KEGG Pathway分析关键调控基因。同时采用qRT-PCR对结果进行验证。结果与对照组相比,低氧微环境处理后表皮细胞上调基因5 416个,下调基因5 060个;GO及KEGG Pathway分析显示差异基因涉及氧化应激、免疫应答、转录因子调控、细胞迁移、信号转导通路及趋化性等。进一步的分析发现,显著调控的基因DDIT3、CCL20以及IL6基因在低氧调控中起着重要作用。同时qRT-PCR验证结果与芯片结果一致。结论低氧微环境下表皮细胞除氧化应激外,细胞迁移相关基因扮演着重要作用,同时发现表皮细胞能上调基因CCL20以及IL6、下调基因DDIT3在大部分调控中均发挥着重要作用,这些分子对揭示表皮细胞迁移调控及创面愈合机理具有重要的研究价值。     

从噬菌体文库中筛选与表皮生长因子结合的多肽

与许多疾病相关的血管生成作用是由一些血管生成因子介导的 ,其中就包括表皮生长因子 .在肿瘤生长、关节炎等疾病中 ,表皮生长因子参与了其中的血管生成作用 ,拮抗表皮生长因子介导的血管生成就有可能对与其相关的疾病起到治疗作用 ,因此 ,表皮生长因子的拮抗剂可能具有重要的临床价值 .拮抗表皮生长因子的作用可以通过许多途径 ,其中之一就是找到能与表皮生长因子结合并能干预其与受体结合的分子 ,因而表皮生长因子可作为药物靶分子 .从噬菌体文库中筛选药物靶分子的拮抗剂和激动剂已被证明是一种有效的方法 .以表皮生长因子作为药物靶分子 ,从多肽噬菌体文库中筛选与表皮生长因子结合的噬菌体多肽 ,这些潜在的表皮生长因子拮抗剂先导分子经过优化可能具有重要的临床价值 .     

皮肤局部应用维甲酸引致的表皮增殖机制

维甲酸（retinoic acid,学名：视黄酸）在皮肤局部给药时,常刺激皮肤基底层角质细胞的异常增殖。证据表明,位于皮肤表皮基底层上层角质细胞中的维甲酸受体二聚体对维甲酸引起的基底层细胞增殖是必需的。可能的机制是,位于表皮基底层上层的维甲酸受体首先诱导位于同一细胞层中的肝素结合表皮生长因子（HB—EGF）表达上调,该生长因子通过旁分泌途径激活位于基底层的受体（erbB1和erbB2）,刺激基底层细胞增殖。     

重组人表皮生长因子的研究概况

人表皮生长因子又称尿抑胃素,是存在于人体内的一种重要的多肽生长因子。它是在1975年由Cohen等和Gregory各自独立地从人尿液中分离得到的,并被分别命名为“人表皮生长因子(Human Epidermal Growth Factor, hEGF)”和“尿抑胃素(Urogastrone, UG)”。后来的研究证明两者实为同一物质,遂将其名称统一为“人表皮生长因子”。     

表皮生长因子和胰岛素对大熊猫体外培养皮肤成纤维细胞生物学特性的影响

用DME:Ham's F12(1∶1)培养液,添加3个水平的表皮生长因子和2个水平的胰岛素,组合成6种 培养体系(CS)分别培养大熊猫皮肤成纤维细胞。通过对细胞生长速度和染色体数目变异率进行测定,测得在 添加10μg／mL的胰岛素和40 ng／mL的表皮生长因子的培养体系(CS-5)中:以(1．673±0．185)×105／mL密 度接种细胞,经3．5 d,密度达到6．890×105／mL,其生长速度最快;染色体数目为二倍体细胞的比率75．77％; 核型分析显示,培养的细胞是大熊猫体细胞。综合衡量,CS-5更适合大熊猫皮肤成纤维细胞的培养。     

表皮生长因子家族及其在海胆中的研究进展

表皮生长因子家族(Epidermal growth factor family)是一组具有与表皮生长因子(Epidermal Growth Factor,EGF)较高同源结构及相似生物学功能的糖蛋白,均为EGF受体的配体,具有调节胚胎细胞生长和分化以及与移动的细胞外基质蛋白相互作用等特点.综述了海胆EGF家族成员的基本生物学特性及其EGF相关蛋白家族的研究进展.     

表皮生长因子与肿瘤

表皮生长因子(EGF)是由53个氧基酸残基组成的单链多肽,分子量约为6100。除颌下腺外,体内许多其它组织和器官也含EGF。多种因素可调节其合成、贮存及分泌。EGF能诱导正常细胞出现转化细胞的表型;能促进病毒和化学物质的致癌作用,能产生免疫抑制作用。EGF、EGF受体与癌基因及其产物在结构和功能上有密切联系,它亦与转化生长因子的功能相似或相关,EGF在某些肿瘤的发生和发展过程中占有重要的地位。