降血脂药物（DEHP）对酰基CoA氧化酶基因反式作用因子的影响

从对照和用ＤＥＨＰ处理的大鼠肝脏提取核蛋白,以含酰基ＣｏＡ氧化酶（ＡＯＸ）基因表达调控部位的ＤＮＡ片段和该基因的不同蛋白结合位点的ＤＮＡ片段作为核蛋白结合反应的探针,通过凝胶电泳迁移率改变实验和Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析检查了ＤＥＨＰ对ＡＯＸ基因反式作用因子的影响。结果表明,降血脂药物ＤＥＨＰ可显著增加ＡＯＸ基因反式作用因子的含量和（或）与基因的结合活性,在转录水平上促进基因的表达。     

鸡胚骨骼肌组织M-CAT结合因子的初步鉴定

采用偶联ＣＡＴＴＧＣＴ寡核苷酸的ＤＮＡ亲和层析柱从发育１３ｄ鸡胚骨骼肌核抽提物中分离到两种核蛋白．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明,被ＤＮＡ亲和柱滞留的两种核蛋白分子量分别为３０ｋＤ和３２ｋＤ．凝胶阻滞结合竞争分析显示,纯化的核蛋白可与Ｍ－ＣＡＴ共有序列ＣＡＴＴＣＣＴ特异结合．Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ印迹技术确定仅３０ｋＤ分子可直接识别、结合ＣＡＴＴＣＣＴ元件,但３２ｋＤ分子却不能．结果提示,３０ｋＤ分子为依赖ＤＮＡ的Ｍ－ＣＡＴ结合因子,３２ｋＤ分子属性有待进一步研究证实     

球形幽门螺杆菌分子生物学研究

为研究幽门螺杆菌（ＨＰ）球形变异本质,作者通过延期培养和采用亚抑菌浓度抗生素,使３株ＨＰ发生球形变异,对弯曲形和球形ＨＰ作了ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、免疫印迹及４个毒力基因片段ＰＣＲ和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱显示球形ＨＰ分子量在７４×１０４以上的蛋白含量减少,免疫印迹显示球形ＨＰ１２５×１０４蛋白条带反应减弱,而抗生素诱变的球形ＨＰ分子量为１１×１０４和６３×１０４的蛋白条带反应增强。ＰＣＲ及ＰＣＲ－ＳＳＣＰ结果表明球形ＨＰ的ｈｐａＡ,ＶａｃＡ,ＣａｇＡ和ＵｒｅＡ４个毒力基因片段未发生缺失,但在ｈｐａＡ或ＶａｃＡ基因中存在点突变     

汉坦病毒陈株S基因编码区的克隆,序列分析及表达

从汉坦病毒陈株感染的ＶｅｒｏＥ６细胞裂解液中提取病毒ＲＮＡ,经逆转录ＰＣＲ获得病毒Ｓ基因编码区约１．３ｋｂｃＤＮＡ片段,克隆该片段后进行核苷酸序列测定,并与汉坦病毒７６１１８株进行同源性比较,结果二者核苷酸序列同源性为８６％,推导的氨基酸序列同源性为９７％。将该基因片段插入原核表达载体ｐＧＥＸ４Ｔ１,在大肠杆菌中获得高效表达。表达产物为ＧＳＴＮＰ融合蛋白。ＳＤＳＰＡＧＥ检测表达蛋白分子约７２ｋＤ左右。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ和ＥＬＩＳＡ试验结果表明,表达产物可与多株抗汉坦病毒核蛋白的ＭｃＡｂ发生反应,其抗原表位及ＭｃＡｂ反应谱与７６１１８株相比存在某些差异。     

葡萄感霜霉病基因RAPD标记的序列分析

利用Ｗｉｚａｒｄ ＤＮＡ ｃｌｅａｎ－ｕｐ ｓｙｓｔｅｍ纯化葡萄感霜霉病基因ＲＡＰＤ遗传标记的ＤＮＡ片段,用细菌质粒ｐＧＥＭ Ｔ－ｅａｓｙ ｖｅｃｔｏｒ克隆该片段,采用自动荧光ＤＮＡ测序仪对片段的核苷酸组成进行双向测序。来自欧洲葡萄粉红玫瑰的葡萄感霜霉病基因ＲＡＰＤ标记由８３５对核苷酸及其特定序列组成。所获的感霜霉病基因ＲＡＰＤ标记可以作为合成探针的基础,用于葡萄抗病育种过程中的早期选择及品种对霜     

国内信息

ＤＥＧＣＭ技术中的ＲＤＡ、ＳＳＨ和ＲＳＤＤ差异表达基因分离技术 (ＤＥＧＣＭ )发展很快 ,主要是ＰＣＲ技术的发展和相应新技术的出现为ＤＥＧＣＭ注入了新的活力。ＰＣＲ引入差式筛选之中 ,可提高效力和降低假阳性率。若引入扣除杂交 ,可发展扣除扩增方案 ,并用特异引物结合于ＰＣＲ中选择扩增差异ｃＤＮＡ而形成代表性差式分析法 (ＲＤＡ)。采用抑制性ＰＣＲ选择性扩增差异基因片段 ,用ＤＮＡ链内“退火”优先于链间退火 ,使非目的序列产生“发夹”式互补结构 ,不能与引物配对 ,从而选择性抑制非目的基因片段的扩增 ,以此形成抑制性差…     

幽门螺杆菌的分子指纹法研究进展

分子指纹法包括：细菌全细胞蛋白ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱分析法,染色体ＤＮＡ限制酶酶切图谱分析法,ｒＲＮＡ基因限制酶酶切图谱分析法。分子指纹法能敏感表达幽门螺杆菌（ＨＰ）基因变异,从菌株水平准确鉴定ＨＰ,并应用于ＨＰ感染复发,耐药性,致病机理和分子流行病学等重要问题的研究中。     

湖北地区宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型E7基因的分离,克隆和序…

采用加端聚合链反应技术,从湖北地区一宫颈癌患者癌组织ＤＮＡ中分离出人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ１６）Ｅ７基因,并在ｐＵＣ１８载体中克隆,经限生核酸内切酶分析和ＤＮＡ序列分析,确认了含ＨＰＶ１６Ｅ７重组克隆质粒,命名ｐｆＨＰＶ１６Ｅ７－ＨＢ。ＤＮＡ序列分析表明,ＨＰＶ１６Ｅ７－ＨＢ基因全长２９４ｂｐ（与报道的标准基因长度相同）但其核苷酸顺序中的两处发生了Ｃ－（Ｔ）突变,即第４３位密码子ＣＡＡ变为ＴＡＡ     

AFP基因细胞专一性的表达依赖于某些核蛋白

Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析没有发现成年大鼠肝、胚肝及肝癌细胞ＡＦＰ基因５＇端及上游有任何不同。以ＡＦＰ基因转录起始点到５＇端上游２５５ｂｐＤＮＡ片段为探针进行Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ分析,发现表达ＡＦＰ基因的细胞核蛋白中存在与其结合的核蛋白,这些在成年大鼠肝、肺、脾、心和肾细胞核蛋白中不存在。含有结合蛋白的肝癌核蛋白部分能使作为ＲＮＡ聚合酶Ⅱ来源的成年大鼠肝细胞核蛋白部     

酵母醇脱氢酶辅酶结合结构域基因片段的克隆与表达

本文报道应用重组ＤＮＡ方法对酵母醇脱氢酶结构基因－功能片段的定向克隆与表达。应用聚合酶链反应技术实现了对ＹＡＤＨ组成型同工酶ＡＤＨＩ结构基因中编码ＮＡＤ结合结构域的一段约４００ｂｐ的基因片段的定向克隆。     

RAPD在植物育种上的应用及其技术校正

ＲＡＰＤ(ＲａｎｄｏｍＡｍｐｌｉｆｉｅｄＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ) ,是在ＰＣＲ的基础上发展起来的一种ＤＮＡ多态性检测技术 ,由Ｗｉｌｌａｍｓ[1] 和Ｗｅｌｓｈ[2 ] 于 1990年建立 ,原理是以一系列不同的 ,少数碱基组成的随机核甘酸序列为引物 ,对样本基因组ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增 ,每个ＲＡＰＤ片段的产生要求在可增范围内存在与引物匹配的反向互补序列。引物结合位点ＤＮＡ序列的改变以及两扩增位点之间碱基的缺失插入或转换都能导致扩增片段的数目和长度的差异 ,经ＰＡＧＥ或琼脂糖凝胶电泳分离和ＥＢ染色来检测ＤＮＡ片段的多态…     

大鼠C3基因TATA区结合核蛋白与其转录活性关系的研究

大鼠Ｃ３基因的转录受雄激素调控且只在大鼠腹侧前列腺中表达。本文报道用凝胶电泳带漂移分析和离体ＤＮａｇｅＩ足迹法分析研究了大鼠Ｃ３基因ＴＡＴＡ区结合核蛋白与其组织专一的和雄激素调控的转录活性间的关系。结果表示：相同的（－５０到－１０）４ｂｐ的ＴＡＴＡ区ＤＮＡ片段在不同组织的细胞核中结合的核蛋白是不同的。通过与一个仅在ＴＡＴＡ区－２９．位核苷酸Ａ变为Ｇ的天然存在的不表达的Ｃ３（２）等位基因上此片段的核蛋白结合能力作比较后提示在Ｃ３基因唯一表达的组织—腹侧前列腺中，结合在此区的核蛋白是－２９位Ａ依赖的，而在所研究的不表达组织—肝和睾丸中则否。而且此类蛋白质还可能具有与雄激素调控此基因表达有关的其他反式作用因子相互作用的结构域．     

用PCR扩增和克隆马立克氏病病毒糖蛋白D基因

用ＰＣＲ技术,从ＧＡ株马立克氏病病毒（ＭＤＶ）感染的成纤维细胞（ＧＥＦ）基因组ＤＮＡ中扩增出ＭＤＶ糖蛋白Ｄ（ｇＤ）抗原基因片段的约１３００ｂｐ编码序列,将该ｐｃＲ扩增的产物于ＥｃｏＲＩ和Ｋｐｎｌ位点克隆到ｐＵＣ１８质粒载体中,在以ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ（ｄｉｇ）标记的ｇＤＰＣＲ产物作为探针,进行原位杂交初步筛选到阳性重组质粒克隆,再根据酶切分析筛选到含ＭＤＶｇＤ基因的重组质粒ｐ１８ＭｇＤ。将ｐ１８ＭｇＤ质粒ＤＮＡ用ｄｉｇ标记后,在Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ中,该探针能识别ＭＤＶ基因组ＤＮＡ的ＢａｍＨＩ－Ａ克隆中的Ａ片段ＤＮＡ。酶切位点分析表明,该ｇＤ克隆也和已发表的ＭＤＶ的ＲＢＩＢ株ｇＤ一样,不含有ＥｃｏＲⅠ、ＨｉｎｄⅢ、ＰｓｔⅠ、ＳｍａⅠ、ｐｖｕⅡ等酶切位点。证明该重组质粒是ＭＤＶｇＤ克隆。     

人乳头瘤病毒16型E6基因的T—A克隆及在真核细胞中的表达

由于ＨＰＶ１６Ｅ６蛋白能诱导机体保护性免疫反应,可作为基因治疗的靶抗原。用杆状病毒昆虫细胞表达系统制备了ＨＰＶ１６Ｅ６基因工程蛋白,拟用于宫颈癌细胞系小鼠模型抗癌的免疫治疗。用ＰＣＲ技术从ＨＰＶ１６基因组中扩增获得转化基因Ｅ６的完整ＯＲＦ,按ＴＡ策略将其克隆到自行制备的杆状病毒转移载体ｐＶＬ１３９３Ｔ尾载体中,置于杆状病毒ＡｃＭＮＰＶＰｏｌｈ晚期启动子控制之下,用此重组转移质粒ｐＶＬ１３９３Ｅ６与杆状病毒ＤＮＡ共转染昆虫细胞Ｓｆ９,经噬斑筛选获得带有编码Ｅ６蛋白基因的重组杆状病毒株,并在昆虫细胞Ｓｆ９中表达为非融合性Ｅ６蛋白。ＳＤＳＰＡＧＥ电泳分析其分子量约为１８ｋＤ,免疫印迹实验表明,此重组蛋白能被兔抗ＨＰＶ１６Ｅ６抗体所识别。     

稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)诱导的水稻早期反应基因ER1的5' 端cDNA片段克隆及序列分析

研究高等生物基因表达与调控的一个重要方面是分离基因的编码区及其上游的调控序列（ＤｅＶｅｅｒ等１９９７）,这需要获得一个基因的ｃＤＮＡ全长及从植物基因组获取全基因。在前文（周建明等１９９９）中曾经分离了稻瘟病菌侵染诱导的水稻早期反应基因ＥＲ１的ｃＤＮＡ片段,但是运用ｍＲＮＡ差异显示技术分离的ｃＤＮＡ片段往往只有近ｍＲＮＡ３’端的一部分,难以反映基因的结构及功能特点,因此,必须进一步分离其５’端的部分才有可能比较全面地了解此基因的特点。ＲＡＣＥ（ｒａｐｉｄａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｃＤＮＡｅｎ…     

雄激素受体与雄激素应答元件的相互作用

将雄激素受体（ＡＲ）的ｃＤＮＡ１１１９ｂｐ片段（１１０５－２２２４）（其中包含其ＤＮＡ结合结构域到部分激素结合结构域）克隆于表达南粒ｐＧＥＸ中,通过ＩＰＴＧ诱地,在Ｅ．ｃｏｌｉ中表达ＧＳＴ－ＡＲ融合蛋白,经谷胱甘肽－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－４Ｂ亲和层析得以部分纯化。利用一个有雄激素应答元件（ＡＲＥ）活性的Ｃ３（１）ＤＮＡ片段为阳性探针,通过凝胶阻滞分析和ＤＮａｓｅ１足迹法证明此表达产物具有牧民的ＤＮＡ     

不同性别表型黄瓜基因组中雌性系特异的ACC合酶基因

利用一对引物（引物１和引物２）分别从雌性系黄瓜（Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ Ｌ．）品种“ＣＯＲＯＮＡ”、“ＤＡＬＥＶＥ”和强雌性黄瓜品种“中农五号”、“欧洲八号”的基因组ＤＮＡ中扩增到一长约１０２５ｂｐ的ＡＣＣ合酶基因片段。序列分析表明：该基因片段与Ｔｒｅｂｉｔｓｈ等１９９７年发表的ＡＣＣ合酶基因片段的同源性大于９９％,认为这两个基因片段应该是同一个基因,不同品种来源的该基因的相同性说明了其高     

地高辛精标记酪氨酸羟化酶RNA探针的制备研究

为制备用地高辛精（Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ,Ｄｉｇ）标记的酶氨酸羟化酶（ＴｙｒｏｓｉｎｅＨｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ,ＴＨ）ＲＮＡ探针,本研究用分子生物学技术重组质粒ＰＧＥＭＴＨＩ,即分别将携带Ｔ７和Ｓｐ６启动子的ＰＧＥＭ－３ｚｆ质粒和携带ＴＨ基因的ＰＫＳＴＨ质粒用限制性内切酶消化并行分离纯化,得到带Ｔ７和ｓｐ６启动子的ＤＮＡ片段和ＴＨ基因片段;经Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接后转入大肠杆菌,得到ｐＧＥＭＴＨ１重组克隆。经小量提取质粒井用酶切分析检测,证实其确有ＴＨ基因且方向正确。将此质粒再经限制性内切酶消化则得到线状ＤＮＡ片段,用Ｔ７ＲＮＡ聚合酶转录合成带有Ｄｉｇ标记的高比活度的单链ＲＮＡ探针;经斑点杂交试验证实该探针具有较高的可靠性。这将为基因治疗帕金森氏病动物模型的疗效检测提供有效手段。     

鸡AChRγ亚基基因远端E盒子与myogenin的相互作用

业已证明,鸡ｎＡｃｈＲγ亚基基因５＇连接区,－５０９／－３０２,－３２４／＋３６片段可独立激活异源启动子ＳＶ４０的转录活性;γ基因近端两个Ｅ盒子（ＣＡＮＮＴＧ）与生肌调节因子（ｍｙｏｇｅｎｉｎ）的相互作用及转录激活分析表明,近端两个Ｅ盒于是γ启动子活性必不可少的,但却是不充分的。利用胶阻滞和ＤＮａｓｅⅠ足纹试验观察了鸡ｎＡｃｂＲγ基因远端Ｅ盒子与ＧＳＴ－ｍｙｏｇｅｎｉｎ融合蛋白的相互作用。胶阻滞试验证明,－５３８／－２８８片段可与ｍｙｏｇｅｎｉｎ相互结合,引起（３２）￣ｐ标记的ＤＮＡ片段在ＰＡＧＥ中迁移率减慢,这种胶阻滞现象可被含Ｅ盒子的未标记片段消除,并被抗鸡ｍｙｏｇｅｎｉｎ单克隆抗体或抗血清所改变。ＤＮａｓｅⅠ足纹试验证明,ｍｙｏｇｅｎｉｎ系通过γ基因转录起始点上游－４２９／－４２４及－４６３／－４５８两个Ｅ盒子与γ基因５＇连接区－５３８／－２８８相互作用。     

湖北地区宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型E7基因的分离、克隆和序列分析

采用加端聚合酶链反应技术,从湖北地区一宫颈癌患者癌组织ＤＮＡ中分离出人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ１６）Ｅ７基因,并在ｐＵＣ１８载体中克隆。经限制性核酸内切酶分析和ＤＮＡ序列分析,确认了含ＨＰＶ１６Ｅ７重组克隆质粒,命名ｐＨＰＶ１６Ｅ７─ＨＢ。ＤＮＡ序列分析表明,ＨＰＶ１６Ｅ７─ＨＢ基因全长２９４ｂｐ（与报道的标准株基因长度相同）,但其核苷酸顺序中有两处发生了Ｃ→Ｔ突变,即第４３位密码子ＣＡＡ变为ＴＡＡ,第７６位ＣＧＴ变为ＴＧＴ;前者使谷氨酰胺密码子变为终止密码,即无义奕变（ｎｏｎｓｅｎｓｅｍｕｔａｔｉｏｎ）。这种突变发生在２９４个碱基的ＤＮＡ扩增产物之中,不像是ＰＣＲ本身的错配,而很可能是湖北株与标准株之间的结构差异。