mRNA的3′非翻译区控制硒代半胱氨酸参入多肽链

ｍＲＮＡ的３′非翻译区控制硒代半胱氨酸参入多肽链刘定干（中国科学院上海生物化学研究所,上海２０００３１）关键词ｍＲＮＡ３′非翻译区硒代半胱氨酸多肽链真核生物ｍＲＮＡ的３′非翻译区是决定各个ｍＲＮＡ专有功能特征的调控元件。３′非翻译区除能决定ｍＲＮＡ的...     

真核mRNA3′非翻译区的功能研究进展

真核ｍＲＮＡ的３′非翻译区的功能比人们目前认为的更为复杂。近年来的研究揭示,ｍＲＮＡ３′非翻译区不但决定该ｍＲＮＡ的稳定性,而且还控制着该特定ｍＲＮＡ的翻译时间、翻译地点和翻译产物。值得注意的是真核ｍＲＮＡ３′非翻译区内的突变可能导致肿瘤的发生。文章介绍了１９９１—１９９２年间国际上关于３′非翻译区的一些新发现。     

谷胱甘肽过氧化物酶的硒代半胱氨酸插入元件

真核生物将硒代半胱氨酸插入蛋白质必需硒代半胱氨酸插入元件（ＳＥＣＩＳ）的参与,后者位于硒蛋白ｍＲＮＡ的３′非翻译区．采用ＲＮＡ折叠程序对１５个谷胱甘肽过氧化物酶基因进行计算机处理发现,其可能的ＳＥＣＩＳ中都具有３段保守碱基ＡＵＧＡ－Ａ（Ｇ）ＡＡ－ＧＡ．根据Ａ（Ｇ）ＡＡ位于顶环或者顶环上游５′臂的突环上,可将ＳＥＣＩＳ分为Ⅰ型和Ⅱ型结构     

优化外源基因在大肠杆菌中表达的翻译起始率的策略和方法(英文)

ｍＲＮＡ的翻译起始区（ＴＩＲ）的二级结构对翻译起始率有很大的影响。本文建立了一种改进外源基因在大肠杆菌中翻译起始率的系统。以人分裂细胞核抗原（ＰＣＮＡ）基因为模型,将ＰＣＮＡ基因５′端编码区的１１４ｂｐ的顺序插入质粒ｐＴＺ１９Ｒ中ＬａｃＺ′的５′端构成融合基因。用定点突变法在ＰＣＮＡ的ＡＵＧ的８位插入一个Ｓｈｉｎｅ／Ｄａｌｇａｒｎｏ（ＳＤ）顺序ＧＡＧＧＴ,再以合成的带部分随机序列寡核苷酸作引物,用ＰＣＲ法在ＳＤ顺序两侧,即ＳＤ上游６个碱基和ＳＤ与ＡＵＧ之间７个碱基,进行随机突变,它们与结构基因５′端序列形成各种可能的翻译起始区（ＴＩＲ）二级结构。重组质粒转化大肠杆菌株ＪＭ１０９（ＤＥ３）,５′ＰＣＮＡ－ｌａｃＺ′ｍＲＮＡ可通过诱导表达Ｔ７ＲＮＡ聚合酶而得到专一而有效的转录。通过在Ｘ－ｇａｌ板上蓝色筛选以及随后的杂交鉴定,共得到２６９个５′ＰＣＮＡ－ｌａｃＺ′融合质粒。从中选择８个不同蓝色的重组子进行β－ｇａｌ活性测定,结果表明它们的酶活性相差在２０倍以上。而ＲＮＡ点杂交表明它们在转录水平无明显的差异。由此提示,通过此策略和方法能得到一个在大肠杆菌中能高效表达的翻译起始区。     

真核mRNA 3′非翻译区在基因表达中的作用

真核生物mRNA的3′非翻译区(3′-UTR)在基因表达调控中发挥重要作用.它不仅调控mRNA在体内的稳定性和降解速率,控制着mRNA的利用效率,还参与mRNA翻译过程的调控.     

反义寡核苷酸的非反义作用

反义核酸作为一种调控特定基因表达的手段,是通过与特异ｍＲＮＡ分子上５′翻译区、ｍＲＮＡ启动－编码重叠区、核内ｈｎＲＮＡ剪接供点结合抑制ｍＲＮＡ的翻译、剪接、转运或通过形成ＲＮＡ－ＤＮＡ杂合双链,激活ＲＮａｓｅＨ,降解ｍＲＮＡ来达到抑制靶基因表达的目的...     

人粒细胞集落刺激因子（hG－CSF）cDNA3′－UTR对其表达的影响

利用人粒细胞集落刺激因子（ｈＧ－ＣＳＦ）ｃＤＮＡ３′端非翻译区（３′－ＵＴＲ）中存在的ＤｒａⅠ酶切位点,通过部分酶切与完全酶切,删除３′－ＵＴＲ不同长度,构建了四种ｈＧ－ＣＳＦｃＤＮＡ瞬时重组表达质粒。转染ＣＯＳ－７细胞后,生物活性测定结果提示,ｈＧ－ＣＳＦｃＤＮＡ３′－ＵＴＲ对其表达起负调控作用,其关键性序列位于紧接终止密码子ＴＧＡ下游的６５ｂｐ范围内,３′－ＵＴＲ对ｈＧ－ＣＳＦｃＤＮＡ表达的影响与转录水平的差别有一定关系。     

大肠杆菌中一种对NF-IL63′UTR专一的结合蛋白

在大肠杆菌ＴＧ１ 中, 发现了一种与人白介素６ 核转录因子ｍＲＮＡ 的３′非翻译区专一结合的蛋白, 其Ｎ端氨基酸序列为ＡｌａＴｈｒＡｒｇＩｌｅＧｌｕＰｈｅＨｉｓＧｌｙＣｙｓｓ（ ？）Ｇｌｙ。对数据库检索未发现完全同源的蛋白。对于在大肠杆菌中发现真核ｍ ＲＮＡ专一结合蛋白的意义做了讨论。     

对肿瘤的“表达调控治疗”——一种基因治疗的新概念

对肿瘤的“表达调控治疗”──一种基因治疗的新概念刘定干（中国科学院上海生物化学研究所,上海２０００３１）关键词肿瘤,基因治疗,表达调控真核ｍＲＮＡ的３＇非翻译区（３＇ＵＴＲ）是调控基因生物学特性的重要结构单元。现已发现,３＇ＵＴＲ不仅控制ｍＲＮＡ的细...     

cDNA3′端代表差异显示分析

根据真核ｍＲＮＡ３′端一般含Ｐｏｌｙ（Ａ）的原理,可使用共同引物将不同的ｍＲＮＡ反转录成ｃＤＮＡ,然后设计特殊引物进行反转录ＰＣＲ,或者将限制性酶切与反转录ＰＣＲ偶联使用,均可获得对应于ｍＲＮＡ３′端的ｃＤＮＡ３′端代表扩增子。比较不同条件下的ｃＤ－ＮＡ３′端代表扩增子,可以获得两种或多种细胞中ｍＲＮＡ的表达差异谱,并分离、克隆差异表达的基因序列     

内部核糖体进入位点研究现状及应用展望

内部核糖体进入位点 (ｉｎｔｅｒｎａｌｒｉｂｏｓｏｍｅｅｎｔｒｙｓｉｔｅ ,ＩＲＥＳ)是最早发现于动物病毒基因组 5′非编码区的一段ＤＮＡ序列 ,它具有不依赖于 5′帽子结构的翻译起始功能。1 .ＩＲＥＳ的发现基因的表达分为转录和翻译两个相互独立但又紧密联系的阶段。正常情况下真核细胞的ｍＲＮＡ前体转录完成后 ,经过剪接、5′端加帽、3′端加尾等修饰过程生成成熟的ｍＲＮＡ。 5′帽子结构除了能使ｍＲＮＡ免遭核酸酶和磷酸酶的攻击 ,在随后的翻译起始中也起到十分重要的作用。核糖体小亚基通过识别ｍＲＮＡ 5′端帽子结构来寻找蛋…     

真核生物mRNA 3′非翻译区的功能

真核生物mRNA的3′非翻译区的功能复杂多样,不仅能调控其mRNA的稳定性、控制mRNA的亚细胞定位,而且还在特定氨基酸的编码过程中起着指导作用.一些真核生物mRNA的3′非翻译区内的突变可引起疾病的发生.近几年的研究又发现,一些真核生物mRNA的3′非翻译区还具有抑制肿瘤生长的功能.     

孤儿受体TR3在小鼠睾丸中的定位和表达

本文采用原位杂交和免疫组织化学技术,观察孤儿受体ＴＲ３及其ｍＲＮＡ在小鼠睾丸中的表达及细胞定位。结果表明,在小鼠睾丸中有显著量的孤儿受体ＴＲ３ ｍＲＮＡ和蛋白表达,其表达量在不同曲细精管有明显的差异;孤儿受体ＴＲ３蛋白主要定位于生精细胞,其ｍＲＮＡ在生精细胞特异表达,主要在精原细胞和发育早期的初级精母细胞表达,提示孤儿受体ＴＲ３在小鼠曲细精管精子发生的早期阶段中起着调控作用。     

mRNA两末端的相互作用

50年代,随着分子生物学中心法则的提出,掀起了蛋白质合成研究热潮。60年代末出现的ｍＲＮＡ闭环翻译模型认为,通过ｍＲＮＡ两末端相互作用形成闭环进行翻译是最高效的翻译方式。真核生物ｍＲＮＡ除了具有5′端帽子结构(ｍ7ＧｐｐｐＮ)外[1],大多还具有3′端ｐｏｌｙＡ,它们的协同作用是ｍＲＮＡ高效翻译所必需[2、3]。帽子结合蛋白(ｃａｐｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ,ＣＢＰ)和ｐｏｌｙＡ结合蛋白(ｐｏｌｙＡｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ,ＰＡＢＰ)等的发现为该假说提供了一些依据。因此,对ｍＲＮＡ两末端及其相互作用的研究引起了许多研…     

真核mRNA的3′非翻译区转录后水平调控作用研究进展

真核生物mRNA的3′非翻译区(3′-UTR)在基因表达的转录后调控中起着重要作用:3′-UTR内存在末端加工信号以指导mRNA3′末端的加工;3′-UTR不但控制mRNA的稳定性及降解速率、协助辨认特殊密码子,而且还控制着mRNA的翻译时间、位点及控制其翻译起始及效率等。     

真核mRNA的3′非翻译区转录后水平调控作用研究进展

真核生物mRNA的3′非翻译区(3′_UTR)在基因表达的转录后调控中起着重要作用:3′_UTR内存在末端加工信号以指导mRNA3′末端的加工;3′_UTR不但控制mRNA的稳定性及降解速率、协助辨认特殊密码子,而且还控制着mRNA的翻译时间、位点及控制其翻译起始及效率等。     

人白介素—3基因表达调节的研究

报导了ｈ－ＩＬ－３基因表达调节研究的结果：（１）人静止的外周血淋巴细胞几乎不表达ＩＬ－３ｍＲＮＡ,但丝裂原ＰＨＡ的刺激后则诱导ＩＬ－３ｍＲＮＡ表达,ＴＰＡ与ＰＨＡ联合处理,使ＩＬ－３ｍＲＮＡ的蓄积进一步增加,但ＴＰＡ单独不足以诱导ＩＬ－３ｍＲＮＡ蓄积;（２）Ａ２３１８７／ＴＰＡ能代替ＰＨＡ／ＴＰＡ的刺激,并直接诱导ＩＬ－３ｍＲＮＡ表达;（３）ＴＲＥＯＤＮ处理则显著抑制ＰＨＡ／ＴＰＡ诱导的ＩＬ－３ｍ     

mRNA翻译起始区的结构改变对几个外源基因翻译的影响

为观察ｍＲＮＡ翻译起始区结构与基因表达的关系,利用密码子的简并性,在不改变表达产物氨基酸序列的前提下定点突变几个外源基因的５′端若干位点,使基佤表达载体重组后转录形成的ｍＲＮＡ翻译起始区结构发生改变。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ等分析证实这些改变大大提高了外源基因的表达水平,ＲＮＡｄｏｔｂｌｏｔ表明突变与非突变基因转录水平差别不大,表达水平的提高主要由于翻译效率的提高,ｍＲＮＡ翻译起始区二级结构预测提示其生     

人白介素－3基因表达调节的研究

报导了ｈ－ＩＬ－３基因表达调节研究的结果：（１）人静止的外周血淋巴细胞几乎不表达ＩＬ－３ｍＲＮＡ,但受丝裂原ＰＨＡ的刺激后则诱导ＩＬ－３ｍＲＮＡ表达,ＴＰＡ与ＰＨＡ联合处理,使ＩＬ－３ｍＲＮＡ的蓄积进一步增加,但ＴＰＡ单独不足以诱导ＩＬ－３ｍＲＮＡ蓄积;（２）Ａ２３１８７／ＴＰＡ能代替ＰＨＡ／ＴＰＡ的刺激,并直接诱导ＩＬ－３ｍＲＮＡ表达;（３）ＴＲＥＯＤＮ处理则显著抑制ＰＨＡ／ＴＰＡ诱导的ＩＬ－３ｍＲＮＡ表达。这些结果揭示：ｈ－ＩＬ－３基因的表达在转录及转录后水平被调节,而且是可诱导的,诱导ｈ－ＩＬ－３基因表达、需要Ｃａ２＋依赖及ＰＫＣ依赖的两个信息转导系统,Ｆｏｓ蛋白是反式激活ＩＬ－３基因表达的转录因子,ＰＫＣ依赖的转导系统,可能与ＩＬ－３ｍＲＮＡ的稳定性有关。     

北京鸭载脂蛋白AⅠ cDNA的克隆及其组织表达

分离提取北京鸭肝组织ｍＲＮＡ,以此为模板,反转录构建了鸭肝组织ｃＤＮＡ文库．利用制备的兔抗鸭载脂蛋白ＡⅠ（ａｐｏＡⅠ）多抗血清为探针筛选该文库,获得１０个阳性克隆．测序及序列分析表明：克隆得到了完整的鸭ａｐｏＡⅠｃＤＮＡ序列,它由１０５０个核苷酸构成,包括１８ｂｐ、２４０ｂｐ组成的５′和３′非翻译区,７９２ｂｐ组成的一个完整开放阅读框架,编码２６４个氨基酸的鸭ａｐｏＡⅠ前体,含１８个氨基酸构成的信号肽、６个氨基酸的原肽片段和２４０肽的成熟蛋白．推译出的成熟肽与鸭ａｐｏＡⅠ氨基酸的直接测序结果完全一致．该新基因已被ＧｅｎＢａｎｋ接受．Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ显示鸭ａｐｏＡⅠｍＲＮＡ不仅主要在肝和小肠组织表达;而且不同于人和哺乳动物,亦可少量在脑、肾、肌肉组织分布．结果为进一步研究不易感动脉粥样硬化动物北京鸭ａｐｏＡⅠ基因组结构、功能奠定了基础．