人IL-16C端cDNA的克隆表达及初步鉴定

人 Ｉ Ｌ １６ 是近年报道的一个新的细胞因子,其 Ｃ 端 １３０ 个氨基酸的分泌型 Ｉ Ｌ １６ 广泛地参与了体内的免疫调节及炎症反应,并具有抑制 Ｈ Ｉ Ｖ 复制等多种功能．经从 Ｃｏｎ Ａ 刺激的人外周血单核细胞中分离总 Ｒ Ｎ Ａ,采用 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ、分子克隆及序列测定的方法获得了 Ｉ Ｌ １６ Ｃ 端 １３０ 个氨基酸编码区的 ｃ Ｄ Ｎ Ａ,并在生物 素化融合蛋白表达系统中表达和纯化了该蛋白．结果表明：所得到的中国人 Ｉ Ｌ １６ Ｃ端的编码序列与国外报道的序列完全一致;已获得的 ３３ ｋ Ｄ 融合蛋白易于纯化,这一工作为进一步研究 Ｉ Ｌ １６ 的功能奠定了基础 ．     

瘦蛋白信号转导及瘦蛋白抵抗机制

瘦蛋白(leptin)通过结合瘦蛋白受体,启动信号转导,发挥控制摄食和调节能量代谢等重要神经内分泌调节功能。肥胖症患者血浆瘦蛋白水平普遍升高,存在瘦蛋白抵抗,瘦蛋白抵抗是导致肥胖症的关键因素。本文综述了瘦蛋白信号转导作用及瘦蛋白抵抗可能的机制。     

sIL-16在大肠杆菌中的表达及活性分析

用PCR法扩增本室保存的sIL-16cDNA片段,插入含T7启动子的表达载体pET28a( )中构建重组质粒pET-sIL16,转化大肠杆菌BL21(DE3),低温经IPTG诱导蛋白表达,过Ni^2 螯和层析柱一步纯化表达蛋白,重组蛋白与Jurkat细胞共同孵育后,观察它对细胞表面IL-2R表达的影响,结果发现IPTG诱导蛋白表达后,经SDS-PAGE电沪,可以看到在18kD左右出现明显蛋白表达条带,表达量占菌体可溶蛋白的40％左右,纯化蛋白的纯度达90％以上,经重组蛋白处理过的Jurkat细胞表面IL-2R的表达水平比未经它处理的细胞增高了18.54％。     

FOXO1在胰岛β细胞中的表达及对增殖凋亡功能的影响

胰岛功能受损的分子机制研究是揭示2型糖尿病(T2DM)发病机制的核心问题．FOXO1是胰岛素信号下游的重要靶转录因子,参与胰岛的发育,但在分化成熟的胰岛β细胞中的功能尚未阐明．本研究采用免疫组化方法结合激光共聚焦技术观察FOXO1在胰岛的表达及细胞定位;通过基因介导的转移技术和siRNA干预技术,在培养的大鼠胰腺癌β细胞系（INS-1E）中特异高表达组成性活性的FOXO1(FOXO1-AAA)或抑制其表达水平,观察FOXO1表达水平的改变对β细胞增殖、凋亡的影响．免疫组化结果显示,FOXO1在正常胰腺组织中仅特异地表达在胰岛内．采用胰岛素与FOXO1的免疫荧光双标结合共聚焦观察进一步揭示,FOXO1主要表达在胰岛的β细胞中．Western印迹显示,腺病毒介导的基因转移技术在体外培养的INS-1E细胞中过表达FOXO1-AAA或其特异的siRNA均能有效地上调或抑制其表达水平3H-TdR掺入实验结果显示,降低FOXO1的表达显著促进细胞增殖;反之,高表达FOXO1显著抑制细胞增殖．与之相应,MTT检测结果显示,降低FOXO1的表达对细胞存活有显著促进作用,高表达FOXO1对细胞存活有显著抑制作用．进一步采用流式细胞仪检测细胞凋亡,结果显示降低FOXO1的表达使β细胞凋亡率降低,反之高表达FOXO1使β细胞凋亡率增加．研究结果证实,胰岛β细胞中的FOXO1参与β细胞的存活、增殖、凋亡的调节．病理性高表达FOXO1可能通过阻止β细胞增殖、促进β细胞凋亡从而减少β细胞的数量,在T2DM发生中可能起重要作用．     

单核细胞趋化蛋白-1在糖尿病肾病中的作用

糖尿病肾病是多因素引起的复杂性疾病,近年研究发现炎症反应参与了该病的发生与发展.单核细胞趋化蛋白-1是趋化因子CC亚家族的一员,在募集巨噬细胞等炎性细胞参与炎症反应中扮演着重要的角色.其趋化单核巨噬细胞于糖尿病肾组织中,可介导溶酶体释放,产生氧自由基,促进单核巨噬细胞表达β1-转化生长因子(transforming growth factor β1,TGF-β1),而广泛浸润臣噬细胞加剧了肾小球基底膜增厚、细胞外基质堆积,进而发展为肾小球硬化和间质纤维化.深入研究单核细胞趋化蛋白-1在糖尿病肾病中的作用,可望为糖尿病肾病的预防和治疗提供新的思路和途径.     

白细胞介素-16在脓毒症肝和肺组织中表达的免疫组织化学研究

观察白细胞介素－16（interleukin-16,IL-16)在脓毒症时肝和肺组织中的细胞定位及分布,并探讨其在脓毒症发病中的作用和意义。应用新型敏感的免疫组织化学方法（超敏感－SP法）检测本校近年收集的18例感染、败血症和脓毒症尸检肝和肺组织白细胞介素－16的原位表达,在肝组织中IL－16主要定位于肝窦枯否细胞、单核细胞以及部分中性粒细胞、阳性率达72.3%。肝细胞形态改变主要包括肝窦扩张充血,枯否细胞增生肿胀,肝细胞变性及不同程度的灶性坏死,在肺组织中IL－16定位于肺部质及感染灶内的巨噬细胞,中性粒细胞以及少量淋巴细胞,其阳性率达66.7％。肺组织形态改变主要包括肺泡壁毛细血管扩张充血,间质及肺泡壁内大量炎性细胞浸润,部分肺泡扩张,肺泡壁断裂;可灶性坏死,坏死区肺结构消失,纤维组织增生。同时,观察到IL－16随组织病理变化的加重表达增强的趋势。本研究结果提示IL－16可能在脓毒症所致脏器损害中发挥重要作用。     

T细胞中IL-3基因表达调节的转录因子初探

主要利用凝胶迁移率试验和抗体超迁移试验,以ｈＩＬ－３基因５′侧翼含κＢ位点的序列为探针,探究ＮＦ－κＢ是否参与了ｈＩＬ－３基因的表达调节．结果表明,在Ｊｕｒｋａｔ细胞和人外周血Ｔ淋巴细胞中,都存在与此序列特异结合的可诱导蛋白;ＮＦ－κＢｐ６５亚基的单抗对ＤＮＡ－蛋白复合物的形成没有影响．这些结果揭示：正常细胞和肿瘤细胞中,确存在可特异识别ｈＩＬ－３基因５′侧翼的κＢ顺序的蛋白因子,而且该蛋白因子的表达是可诱导的;但ＮＦ－κＢ并未参与ＩＬ－３基因的表达调节．     

人67kD层粘连蛋白受体在毕赤酵母中的表达及活性分析

为实现人67kD层粘连蛋白受体(Human 67kD Laminin Receptor,67LR)蛋白的分泌表达,采用DNA重组技术将67LR cDNA片段插入分泌型酵母表达载体pPIC9K中,构建了相应的重组表达质粒pPIC9K-67LR并在GS115毕赤酵母菌株中表达,每升培养基经亲和层析可纯化目的蛋白12.56mg。纯化的目标蛋白能够与肺癌A549细胞竞争性结合其配体分子LN-1,具有相应的生物学活性,从而为深入研究人67LR的结构与功能奠定了基础。     

两种末端标记的寡聚核苷酸探针的比较研究

本文利用[α-³²P]-dATP 和 [γ-³²P]-ATP分别对寡聚核苷酸的3’-末端及5’-末端进行标记,研究这两种标记方法的技术途径,并结合斑点杂交,比较这两种末端标记的探针的灵敏度及特异性。结果表明:[α-³²P]-dATP虽可在寡聚核苷酸的3’-OH末端标上多个[³²P]-dAMP分子,但所得标记探针的杂交灵敏度及杂交体的稳定性均不及[γ-³²P]-ATP标记5’-末端制备的寡聚核苷酸探针。因此,当实验需要极高灵敏度的寡聚核苷酸探针时,以选择[γ-³²P]-ATP标记其5’-末端为宜。     

人白介素－3基因表达调节的研究

报导了ｈ－ＩＬ－３基因表达调节研究的结果：（１）人静止的外周血淋巴细胞几乎不表达ＩＬ－３ｍＲＮＡ,但受丝裂原ＰＨＡ的刺激后则诱导ＩＬ－３ｍＲＮＡ表达,ＴＰＡ与ＰＨＡ联合处理,使ＩＬ－３ｍＲＮＡ的蓄积进一步增加,但ＴＰＡ单独不足以诱导ＩＬ－３ｍＲＮＡ蓄积;（２）Ａ２３１８７／ＴＰＡ能代替ＰＨＡ／ＴＰＡ的刺激,并直接诱导ＩＬ－３ｍＲＮＡ表达;（３）ＴＲＥＯＤＮ处理则显著抑制ＰＨＡ／ＴＰＡ诱导的ＩＬ－３ｍＲＮＡ表达。这些结果揭示：ｈ－ＩＬ－３基因的表达在转录及转录后水平被调节,而且是可诱导的,诱导ｈ－ＩＬ－３基因表达、需要Ｃａ２＋依赖及ＰＫＣ依赖的两个信息转导系统,Ｆｏｓ蛋白是反式激活ＩＬ－３基因表达的转录因子,ＰＫＣ依赖的转导系统,可能与ＩＬ－３ｍＲＮＡ的稳定性有关。