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谷子肌动蛋白基因的克隆及序列分析 总被引:12,自引:0,他引:12
以谷子 (Setariaitalica)为材料 ,提取总RNA。根据植物肌动蛋白基因编码区的两端的保守序列设计了简并引物 ,用 5’RACE方法扩增出了谷子肌动蛋白基因编码区序列。以豌豆肌动蛋白cDNA作探针进行的Southern杂交分析表明扩增出了目的基因。将所获得的片段克隆到T载体后进行测序 ,序列分析结果表明 :谷子肌动蛋白基因的编码区长 1 1 3 1个核苷酸 ,编码了 3 77个氨基酸 ;所得序列 (命名为MIAc)与GenBank中注册的肌动蛋白基因序列的相似性均在 6 0 %以上 ,与其它肌动蛋白氨基酸序列的相似性达 89%以上。根据高等植物肌动蛋白序列相似性重建了进化树 ,表明谷子肌动蛋白与水稻肌动蛋白异型体RAc2和RAc3之间的亲缘关系最为密切 ,在进化过程中分化时间最为接近 相似文献
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豌豆肌动蛋白异型体的表达与系统发生分析 总被引:7,自引:0,他引:7
豌豆 (PisumsativumLinn .)肌动蛋白基因至少可以分为 3类异型体 :PEAcⅠ、PEAcⅡ和PEAcⅢ ,它们的编码区序列相似性很高 ,而非编码区序列存在显著的差异。RT_PCR和以 3′端非翻译区作探针的Southern杂交结果显示豌豆肌动蛋白异型体基因在根、茎、叶、卷须、花粉和幼嫩果实中均表达 ,但表达强度存在明显差异。利用连续稀释电泳对PEAcⅠ的转录本水平进行分析后发现它倾向于在幼嫩的器官中表达 ,且在 7d的茎中表达最强 ;在一个月内的叶片中表达也较强 ,此后明显下降 ;卷须中表达变化不显著 ,在花粉中表达很弱 ,在幼嫩荚果中的表达亦较多。PEAcⅡ表达特点与PEAcⅠ具有某些相似性。根据肌动蛋白序列重建的系统发生树表明豌豆肌动蛋白 3类异型体间的分歧明显 ,但起源于单、双子叶植物分化前的共同基因祖先。推测豌豆肌动蛋白异型体基因在转录调控和细胞功能上存在差异。 相似文献
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谷子肌动蛋白基因的克隆及序列分析 总被引:2,自引:0,他引:2
以谷子(Setaria italica)为材料,提取总RNA。根据植物肌动蛋白基因编码区的两端的保守序列设计了简并引物,用5'RACE方法扩增出了谷子肌动蛋白基因编码区序列。以豌豆肌动蛋白cDNA作探针进行的Southern杂交分析表明扩增出了目的基因。将所获得的片段克隆到T载体后进行测序,序列分析结果表明:谷子肌动蛋白基因的编码区长1131个核苷酸,编码了377个氨基酸;所得序列(命名为MIAc)与GenBank中注册的肌动蛋白基因序列的相似性均在60%以上,与其它肌动蛋白氨基酸序列的相似性达89%以上。根据高等植物肌动蛋白序列相似性重建了进化树,表明谷子肌动蛋白与水稻肌动蛋白异型体RAc2和RAc3之间的亲缘关系
最为密切,在进化过程中分化时间最为接近。 相似文献
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天然球蛋白分子表面暴露的柔性的环是对蛋白质水解作用最敏感的部位,可用蛋白质部分水解来确定木糖异构酶突变体上的这些部位,枯草杆菌蛋白酶对W136E单体的水解在一级反应图上呈折线,对T89S和V1341单体的部分水解为直线。对镁-酶的水解速度低于对脱辅基酶的水解速度。枯草杆菌蛋白酶对W136E的第一个水解位点在Ala28,Thr29之间,第二个水解位点在肽链的C端。 相似文献
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纯化了ArthrobacterD-木糖异构酶的三个突变体,T89S,V134I的比尖(U/mg)分别为3.42和6.18,W136E没有生。T89S和V134I的活性需要二价阳离子,对于T89S,Mg^2^+的作用强于Co^2^+。在以木糖为底物时,T89S的Km值为49.8mmol/L,V134I的Km值为9.8mmol/L,在以果糖为底物时,木糖醇对T89S是竞争性抑制剂,山梨糖醇对T89S和 相似文献
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豌豆肌动蛋白异型体的表达与系统发生分析 总被引:1,自引:0,他引:1
豌豆(Pisum sativum Linn.)肌动蛋白基因至少可以分为3类异型体: PEAcⅠ、PEAcⅡ和PEAcⅢ,它们的编码区序列相似性很高,而非编码区序列存在显著的差异.RT-PCR和以3′端非翻译区作探针的Southern杂交结果显示豌豆肌动蛋白异型体基因在根、茎、叶、卷须、花粉和幼嫩果实中均表达,但表达强度存在明显差异.利用连续稀释电泳对PEAcⅠ的转录本水平进行分析后发现它倾向于在幼嫩的器官中表达,且在7 d的茎中表达最强;在一个月内的叶片中表达也较强,此后明显下降;卷须中表达变化不显著,在花粉中表达很弱,在幼嫩荚果中的表达亦较多.PEAcⅡ表达特点与PEAcⅠ具有某些相似性.根据肌动蛋白序列重建的系统发生树表明豌豆肌动蛋白3类异型体间的分歧明显,但起源于单、双子叶植物分化前的共同基因祖先.推测豌豆肌动蛋白异型体基因在转录调控和细胞功能上存在差异. 相似文献
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将分属三类豌豆(Pisum sativum)卷须肌动蛋白异型体(PEAc)的基因3'端进行了亚克隆,并利用限制性内切酶从中切取了完整的3'非翻译区片段,将之做为特异性探针进行DIG标记,并对不同发育时间豌豆根、茎、叶及花粉中提取的总RNA进行点杂交分析。发现其中I类(PEAcI)和II类(PEAcII)在根、茎、叶中都有表达,但存在发育时间上的表达特异性,尤其在叶中的差异较明显。而III类(PEAcIII)与前二者的差别更大,仅发现其在2 d及28 d的根、7 d的茎及18 d的叶中有表达。在花粉中,只有PEAcII有少量的表达,说明三类异型体基因的表达还存在组织特异性。 相似文献