干细胞因子及其受体介导的细胞内信号转导

干细胞因子 (ｓｔｅｍｃｅｌｌｆａｃｔｏｒ,ＳＣＦ)是一种重要的造血因子 ,对正常造血细胞、肥大细胞、黑色素细胞、生殖细胞的增殖和分化以及肿瘤细胞的增殖和恶性演进等起着重要的调节作用。其受体是由原癌基因ｃ ｋｉｔ编码的一种具有酪氨酸激酶活性的跨膜蛋白ｃ Ｋｉｔ,分子量为 1 1 7～ 1 45ｋＤ[1] 。ｃ Ｋｉｔ受体由胞外结构域、单一的短跨膜区和胞内结构域三部分组成。ＳＣＦ与ｃ Ｋｉｔ之间的特异性结合可触发ｃ Ｋｉｔ的同源二聚体化和其细胞膜内酪氨酸残基的磷酸化 ,产生停泊位点 ,捕获含有ＳＨ2结构域的信号分子 ,还能直接激活…     

TNF—α与TNF受体超家族介导的信号传导

肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）与其相应的受体结合后通过介导复杂的信号传导而表现生物学活性。目前资料显示主要从以下途径;（１）以神经酰胺（ＣＭ）作为第二信使,进而激活Ｒａｆ途径;（２）以甘油二酯（ＤＡＧ）作为第二信使,然后激活蛋白和激酶ＣＰＫＣ）和核因子ｋＢ（ＮＦ＿ｋＢ）;（３）也可能Ｒａｃｌ途径。同时,近年来发现在ＴＮＦＲ１与Ｆａｓ的胞内部分存在一个凋亡结构域。并且发现３处蛋白质能与该结构域发生反应     

促红细胞生成素产生肝细胞受体A2(EphA2)SAM结构域对激酶结构域的脂质体结合能力与激酶活性的调控研究

促红细胞生成素产生肝细胞受体(Eph receptor) 是受体酪氨酸激酶(RTK)家族中最大的亚家族,其介导的双向信号传导对细胞的形态、黏附、运动、增殖、生存及分化都有重要的调控作用。EphA2是Eph受体家族中一个被广泛研究的重要亚型,在白内障和乳腺癌等病理发生过程中发挥了重要作用。既往研究发现:EphA2受体的激酶结构域可结合细胞膜,其激酶活性受磷脂膜的调控,但是相邻的SAM结构域对激酶结构域与脂膜的相互作用以及激酶活性的影响尚不清楚。在此项研究中,通过与磷酸酶PTP1B1-301活性片段共表达的方式,表达、纯化了EphA2受体的胞内段激酶-SAM串联结构域,通过比较胞内段激酶-SAM串联结构域与单独激酶结构域的脂质体结合能力,以及测定对应的激酶活性,发现:EphA2受体胞内段的SAM结构域使其激酶结构域与脂质体(4 mg/mL)的结合能力增强约6倍(P＜0.001);磷酸化后的EphA2胞内段激酶-SAM串联结构域结合脂质体(4 mg/mL)的能力比非磷酸化的胞内段激酶-SAM串联结构域提高2.5倍(P＜0.05);而结合脂质体后,激酶结构域的激酶活性也被进一步提高,从而形成正反馈。综上所述,本研究的发现提示:EphA2胞内段的酪氨酸激酶结构域与相邻的SAM结构域可形成一个完整的结构功能单位,其激酶活性和脂质体结合能力与单独的激酶结构域相比都形成了明显的差异,我们的这一发现对进一步理解Eph受体家族其他亚型的激酶结构域的活性调控提供了参考与思路。     

表皮生长因子受体

表皮生长因子受体（EGFR）是一种具有酪氨酸激酶活性的膜表面受体,其胞内区的3个亚区是其发挥酪氨酸激酶活性、介导信号转导的关键部位。表皮生长因子受体和其他的erbB受体可形成同源和异源的多种二聚体,不同的二聚体与表皮生长因子受体的6种配体形成的不同组合可将不同的细胞外刺激传入胞内。表皮生长因子可激活多种下游信号路径,产生多种生物学效应,ras-raf-MEK-erk/MAPK途径与增殖的激活有关,PI3K－PKC－IKK途径与细胞移动性的增强有关。表皮生长因子受体与肿瘤的发生发展和器官的修复有密切的关系,针对表皮生长因子受体的肿瘤治疗和器官修复具有良好的应用前景。     

D^2型小麦细胞质雄性不育系及其保持系和恢复系线粒体DNA的比较研究

ｍｓＤ２－ＣＡ８０５７是新育成的具有粗厚山羊草（Ａｅ．ｃｒａｓａ,６ｘ）胞质的Ｄ２型小麦细胞质雄性不育系。采用ＲＦＬＰ和ＲＡＰＤ方法对该不育系及其具有普通小麦（Ｔ．ａｅｓｔｉｖｕｍ）胞质的保持系ＣＡ８０５７和恢复系保－７６９－２２－６的线粒体ＤＮＡ进行分析和比较,发现该不育系的线粒体ＤＮＡ组织结构明显不同于其保持系,也不同于其恢复系。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ结果表明,该不育系线粒体基因组在ａｔｐＡ、ａｔｐ９、ｃｏｂ和ｃｏｘⅡ基因上或附近具有显著的组织结构差异。ＲＡＰＤ分析证实了这一点。相反,ＲＦＬＰ和ＲＡＰＤ结果都表明保持系与恢复系之间线粒体基因组结构非常相似。这支持了该不育系的胞质遗传特点来源于与普通小麦胞质差异较大的野生型胞质的事实。推测这种胞质差异与育性有关     

粘着斑激酶

粘着斑激酶（ｆｏｃａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｋｉｎａｓｅ,ＦＡＫ）是蛋白酪氨酸激酶,属于非受体蛋白酪氨酸激酶,分布在细胞粘着斑部位。ＦＡＫ位于神经肽,整合素和癌基因作用的聚合点,可发生酪氨酸磷酸化,它参与调节细胞发育,生长,存活,凋亡,粘附,骨架重组,转化,扩散和迁延等过程。     

神经元分化的信号转导

神经细胞的分化是神经系统发育过程中的重要事件之一 ,它涉及神经元的迁移、轴突的定向生长、突触发生和选择性凋亡等一系列过程。这些分化过程是在特定的信号分子精确调控下 ,由胞内信号通路介导完成的。1 .神经生长因子 (ＮＧＦ)诱导的Ｒａｓ Ｒａｆ ＭＡＰＫ原癌基因产物信号通路ＮＧＦ是第一个被发现的神经营养因子 ,它能诱导多种神经细胞的轴突快速生长 ,也能促使ＰＣ1 2细胞向交感样神经元的转变。ＮＧＦ的主要作用受体为ＴｒｋＡ ,为受体酪氨酸激酶家族成员。活化的ＴｒｋＡ通过接头分子Ｓｈｃ激活膜内表面的原癌基因产物Ｒａｓ ,活…     

血管内皮细胞生长因子受体结构与功能分析

血管内皮细胞生长因子受体（ＶＥＧＦＲ）是ＶＥＧＦ牧场划性的受体,属于酪氨酸激酶亚家庭中的一个新成员,具有特征性的胞外区和酪氨酸激酶区,因其在刺激血管内皮细胞增殖、促进新生血管生成,特别是在促进肿瘤生长及转移中的作用,已越来越成为人们研究的热点。本文概括了３种ＶＥＧＦ受体在体内的不同分布,分析了不同ＶＥＧＦ受体在碱基序列及蛋白质功能结构域的异同,并介绍了可溶性ＶＥＧＦ受体功能差异,以及在肿瘤及与血管     

FasL—Fas／APO—1（CD95）系统

Ｆａｓ配体（ＦａｓＬ）与Ｆａｓ受体（Ｆａｓ,即ＡＰＯ－１,又称ＣＤ９５）分别属于肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）及ＴＮＦ受体（ＴＮＦＲ）家族,以膜分子或可溶性分子形式存在于哺乳类机体内。ＦａｓＬ或Ｆａｓ单克隆抗体（ＦａｓｍＡｂ）与Ｆａｓ结合可引起Ｆａｓ了性反应细胞的功能增强,继而出现程序性细胞死亡（ＰＣＤ）。ＦａｓＬ与Ｆａｓ相互作用及其所介导的信息途径是目前ＰＣＤ研究的重要内容之一。     

IL－3、GM－CSF和IL－5受体及其信号传导

ＩＬ—３、ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＬ—５是一类功能相似的造血因子,它们的受体至少包括配体特异性的α亚基和共用β亚基（βｃ）两部分。βｃ识别三因子的Ｎ端α－螺旋,而α亚基则识别三因子的Ｃ端α－螺旋,两者均为功能性的高亲和力受体所必需．由于βｃ胞内区较长,能结合Ｊａｂ和Ｓｔａｔ等信号分子,所以,三种因子受体受配体刺激后能诱导相似蛋白的酪氨酸磷酸化。另外,激酶的不同剪切型、转录因子的同分异构体、受体亚基的细胞型特异性以及信号传导通路的多重性等则为三因子作用特异性的基础。本文就对其主要内容作一综述。     

G蛋白偶联受体激酶—2的N端结构域缺失对其催化功能的影响

为揭示Ｇ蛋白偶联受体激酶（Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｋｉｎａｓｅｓ，ＧＲＫｓ）的Ｎ端结构域在该酶家族磷酸化受体以及催化反应中的作用，对ＧＲＫ２的Ｎ端结构域进行了缺失突变研究。将Ｎ端结构域的ＧＲＫ２（ΔＮ－ＧＲＫ２）与谷城肽转硫酶融合表达。经过亲和纯化后，再用凝血酶酶切得到单独的ΔＮ－ＧＲＫ２蛋白。对磷酸化小肽的活力检测表明，Ｎ端结构域的缺失基本上不影响ＧＲＫ２的激酶催化     

Jak—STAT信号转导机制

许多细胞因子受体尽管缺少激酶结构域,但与配体结合后仍能诱导蛋白质的酪氨酸磷酸化。近年来的研究证明这一过程是由Ｊａｋ族蛋白质酪氨酸激酶的成员所介导的。Ｊａｋ激酶通过和受体的近膜区域的相互作用而与之缔合。配体结合引起受体聚合以及Ｊａｋ的酪氨酸磷酸化和激活,激活的Ｊａｋ又使受体和ＳＴＡＴ蛋白（信号转导物与转录激活剂）磷酸化、后直接参与基因转录的调控。本对这一新的胞内信号转导机制作一综述。     

番茄叶片胞外β-N-乙酰氨基己糖苷酶的部分性质研究

用从系统感染ＴＭＶ（ｔｏｂａｃｃｏ ｍ ｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ）的番茄叶胞外蛋白提取液中纯化的β－Ｎ－乙酰氨基己糖苷酶为材料,研究了该酶的部分性质。以ｐ－硝基苯基－Ｎ－乙酰－β－Ｄ－氨基葡萄糖苷（ｐＮＰ－β－Ｄ－ＧｌｃＮＡｃ）或ｐ－硝基苯基－Ｎ－乙酰－β－Ｄ－氨基半乳糖苷（ｐＮＰ－β－Ｄ－ＧａｌＮＡｃ）为底物,该酶的最适ｐＨ在４．８—５．０ 之间,最适温度在４４—４７℃之间。对酶的热稳定性研究表明,温度对酶的热变性作用表现为两相变性曲线,Ｋｍ 值分别为０．３６ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ （ｐＮＰ－β－Ｄ－ＧｌｃＮＡｃ为底物）和０．６７ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ （ｐＮＰ－β－Ｄ－ＧａｌＮＡｃ 为底物）,Ｎ－乙酰氨基葡萄糖（ＧｌｃＮＡｃ）和Ｎ－乙酰氨基半乳糖（ＧａｌＮＡｃ）是酶活性的竞争性抑制剂,Ａｇ＋ 和Ｈｇ２＋ 是酶活性的强抑制剂,金属离子Ｆｅ２＋ 、Ｆｅ３＋ 和Ｃｕ２＋ 也抑制酶活性。     

共生通讯中的一个受体

两项独立的研究 (Ｓｔｒａｃｋｅｅｔａｌ;Ｅｎｄｒｅｅｔａｌ)从莲和豌豆植物以及豆科模型植物Ｍｅｄ ｉｃａｇｏｓａｔｉｖａ(紫花苜蓿的一个亲缘种 )中分离出了ＳＹＭＲＫ(共生受体样激酶 )基因。该类基因编码的蛋白对植物与细菌或真菌的共生体系的形成至关重要。此蛋白属于含有胞外富亮氨酸重复序列 (ｌｅｕｃｉｎｅ ｒｉｃｈｒｅｐｅａｔ,ＬＲＲ)的一类特殊受体蛋白族。植物中 ,ＬＲＲ受体蛋白所在的亚族一般都含有胞内丝氨酸 /苏氨酸 (Ｓｅｒ/Ｔｈｒ)激酶域 ,可以启动胞内的级联放大系统。动物中 ,这类蛋白组成Ｔｏｌｌ样受体群 ,在先…     

白血病抑制因子受体与细胞内信号分子

白血病抑制因子（ＬＩＦ）与细胞膜上的ＬＩＦ受体β亚基结合并使之与ｇｐ１３０形成异源性二聚化后,ＬＩＦ受体β亚基细胞内区的３个Ｔｙｒ和ｇｐ１３０的４个Ｔｙｒ（均呈（ＹＸＸＱ结构）分别激活ＪＡＫ酶,ＭＡＰＫ,Ｆｅｓ,Ｂｔｋ,Ｔｅｃ激酶,ＰＴＰ１Ｄ和ＳＴＡＴＳ等,Ｃ－ｍｙｃ,Ｃ－ｍｙｂ的转录活性下降,以及ＪｕｎＢ,ＩＲＦ１和Ｓｔａｔ３的转录活性上升促进细胞分化,抑制细胞增殖,从而维持垂体功能,促进神经肌     

Smads分子及其介导的TGF—β超家族信号转导

ＴＧＦ－β超家族成员的重要生物学功能正日益引起人们的重视,该家族受体也在不断被克隆鉴定。配体通过受体的胞内信号转导研究近年有较大进展,特别是Ｍａｄ及相关蛋白Ｓｍａｄｓ的发现,为阐明ＴＧＦ－β超家族作用机理提供了一条重要线索：Ｓｍａｄｓ蛋白位于细胞浆,被受体激酶直接磷酸化后形成异源聚合体,转移至核内,激活靶基因转录。     

淋巴细胞活化的抑制性受体及其作用

淋巴细胞的活化受抑制性受体的调节,以保持免疫应答的平衡,避免过度活化。抑制性受体主要有两类：一类是Ⅰ型膜蛋白,属于Ｉｇ超家族,基因大多位于染色体１９ｑ１３．４（小鼠染色体７）,包括ＣＤ２２、ＦｃγＲⅡｂ、信号调节蛋白（ｓｉｇｎａｌ－ｒｅｇｕｌａｔｏｒ...     

表皮生长因子受体酪氨酸激酶的克隆表达和酶抑制剂筛选模型的构建

表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）属受体酪氨酸激酶（tyrosine kinase,TK）家族,其胞内的酪氨酸激酶在细胞信号转导通路中具有十分重要的作用。许多肿瘤的发生、发展都与EGFR胞内酪氨酸激酶的异常表达密切相关。因此,EGFR胞内酪氨酸激酶的抑制剂有可能成为治疗肿瘤的有效药物。从人脐静脉内皮细胞（HUVEC）提取总RNA,采用RT-PCR获得EGFR酪氨酸激酶催化域的编码基因。将其克隆至载体pET-30a,在E．coliBL21（DE3）中进行了成功表达,采用Ni-NTA亲和层析对其进行了纯化。通过对酶的活性的测定,证明重组EGFR酪氨酸激酶蛋白具有利用ATP催化底物发生磷酸化反应的激酶活性。以该重组激酶为靶位构建了酶抑制剂筛选模型,拟对微生物代谢产物进行筛选。     

Cloning and Expression of EGFR Tyrosine Kinase and Construction of the Screening Model for the Enzymatic Inhibitors

表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)属受体酪氨酸激酶(Tyrosine kinase,TK)家族,其胞内的酪氨酸激酶在细胞信号转导通路中具有十分重要的作用。许多肿瘤的发生、发展都与EGFR胞内酪氨酸激酶的异常表达密切相关。因此,EGFR胞内酪氨酸激酶的抑制剂有可能成为治疗肿瘤的有效药物。本研究从人脐静脉内皮细胞(HUVEC) 提取总RNA,采用RT-PCR获得EGFR酪氨酸激酶催化域的编码基因。将其克隆至载体pET-30a,在E.coli BL21(DE3)中进行了成功表达,采用Ni-NTA亲和层析对其进行了纯化。通过对酶的活性的测定,证明重组EGFR酪氨酸激酶蛋白具有利用ATP催化底物发生磷酸化反应的激酶活性。以该重组激酶为靶位构建了酶抑制剂筛选模型,拟对微生物代谢产物进行筛选。