一种新型免疫层析技术在临床乳腺癌Her-2蛋白定量检测中的应用

建立一种靶点蛋白质快速定量检测方法。在原有侧向流动免疫层析技术的基础上,通过优化层析材料和纳米微球的均一性、改进检测区的检测方法,经逐点扫描技术,建立标准浓度曲线,以达到对临床靶点蛋白质的定量检测。以乳腺癌组织中的Her2表达为例,通过对已知浓度样品的检测,验证本技术方法的准确度大于96%。另外,以蛋白质免疫印迹作为组织中特定蛋白质检测金标准,分析临床肿瘤组织中Her2蛋白的含量,其准确率也达到95.5%,而免疫组织化学方法检测准确率仅为69.58%。新型免疫层析法检测结果与靶向治疗患者的愈后密切相关(P<0.01)。改进后的新型免疫层析方法能够准确地对临床靶点蛋白质进行定量检测,而且结合侧向流动技术的简单、快速和易用性,这种新型检测方法可以广泛应用于临床组织标本、血液标本和体液标本中靶点蛋白质的临场定量检测,在一定程度上可以替代免疫组化技术。     

RNA聚合酶Ⅲ启动子的结构与功能

ＲＮＡ聚合酶Ⅲ (ｐｏｌⅢ )是真核生物催化合成ｔＲＮＡ和 5ＳｒＲＮＡ及一些核小ＲＮＡ和胞质ＲＮＡ必需的酶。ＲＮＡ聚合酶Ⅲ能够识别ｔＲＮＡ基因中一些高度保守的特征性ＤＮＡ序列而启动下游ＤＮＡ的转录 ,这些序列称为ＲＮＡ聚合酶Ⅲ启动子。ＲＮＡ聚合酶Ⅲ启动子不仅广泛存在于真核细胞中ｔＲＮＡ、Ｕ6核小ＲＮＡ(ＳＮＲ6 )等的基因中 ,也是病毒催化合成一些小片段ＲＮＡ如腺病毒ＶＡＲＮＡ所必需的。ＲＮＡ聚合酶Ⅲ启动子因其能在体内外高效快速地转录某些小片段基因 ,已被人们广泛地应用于核酶和反义ＲＮＡ技术中 ,在众多的ＲＮＡ…     

血管内皮细胞生长因子受体结构与功能分析

血管内皮细胞生长因子受体（ＶＥＧＦＲ）是ＶＥＧＦ牧场划性的受体,属于酪氨酸激酶亚家庭中的一个新成员,具有特征性的胞外区和酪氨酸激酶区,因其在刺激血管内皮细胞增殖、促进新生血管生成,特别是在促进肿瘤生长及转移中的作用,已越来越成为人们研究的热点。本文概括了３种ＶＥＧＦ受体在体内的不同分布,分析了不同ＶＥＧＦ受体在碱基序列及蛋白质功能结构域的异同,并介绍了可溶性ＶＥＧＦ受体功能差异,以及在肿瘤及与血管     

小鼠天然可溶性VEGF受体基因sflt-1的克隆及鉴定

 可溶性血管内皮细胞生长因子受体 (sFlt 1 )与膜表面受体Flt 1竞争结合血管内皮细胞生长因子 (VEGF) ,并且与膜表面受体Flt 1及KDR形成异源二聚体 .完全阻断VEGF的生物学活性 ,除与sFlt 1的结合部位结构域有关外 ,还与整个蛋白质分子的高效分泌表达有关 .而蛋白质分子的高效分泌表达与蛋白质在细胞内高尔基体及内质网的加工密切相关 ,基因工程重组可溶性受体由于一些尚未明了的原因 ,往往不能高效表达 ,从而大大影响了其应用价值 .利用RT PCR技术从胚胎小鼠中扩增出天然可溶性VEGF受体基因sflt 1 ,克隆于pcDNA3载体中 ,在COS 7细胞中短暂表达 ;并克隆至pET42b载体中 ,经IPTG诱导后 ,可大量稳定表达与His Tag形成的融合蛋白 ,经HisNi柱纯化 ,可特异性结合VEGF .可溶性受体sFlt 1在肿瘤组织的高效表达可有效阻断新生血管的形成 ,从而为肿瘤的治疗探索一种方法 .     

DNA-PK蛋白功能及其调控机制

DNA依赖性蛋白激酶（DNA-dependent protein kinase,DNA-PK）是由3个亚基组成的丝/苏氨酸蛋白激酶,属于磷脂酰肌醇-3激酶相关激酶家族（phosphatidylinositol 3-kinase-related kinases,PIKK）,是基因组DNA损伤修复过程中的关键蛋白激酶,参与并决定着非同源末端连接DNA损伤修复通路的整个进程.此外DNA-PK还参与了电离辐射诱导的凋亡信号转导通路,免疫细胞V（D）J重组、免疫细胞分化、胰岛素刺激下的细胞应答等过程,具有维持端粒稳定性的功能.DNA-PK活性的升高会降低肿瘤对放射的敏感性,其活性主要受自身磷酸化调控,此外活性氧、EGFR、MG132抑制剂、PP1γ1和PP5等蛋白磷酸酶也有调控DNA-PK活性的作用.