识别未衍生化的13—羟化GAs及其葡萄糖苷的单克隆抗体

抗ＧＡ３ 及其葡萄糖苷的ＭＡＢ１０单克隆抗体源于以ＧＡ３ 中的３ 位羟基（３－ＯＨ）为偶联位点,人血清白蛋白（ＨＳＡ）为载体合成的ＧＡ３－３－ＨＳＡ 免疫原． 该抗体对１３－羟化ＧＡｓ（１３－ＯＨＧＡｓ、ＧＡ１、ＧＡ３、ＧＡ５ 等）和ＧＡ３ 葡萄糖苷具有高亲和力． ７ 位羧基的甲酯化可显著降低ＭＡＢ１０ 对１３－ＯＨ ＧＡｓ的亲和力,而３－ＯＨ 的糖苷化却未降低其亲和力． 用该抗体建立的两种分别用于ＧＡ３ 及其葡萄糖苷测定的酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）,其检测线性范围均为０．２～２０ ｐｍ ｏｌ． 借助这两种ＥＬＩＳＡｓ,研究了羊蹄（Ｒｕｍ ｅｘ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）叶片中ＧＡ３ 及其类似ＧＡｓ和葡萄糖苷的动态变化．结果表明,叶片衰老与游离态ＧＡｓ的糖苷化有关;而６－ＢＡ 延缓衰老则可能与其减缓ＧＡｓ的糖苷化有关     

刺槐宽叶和四倍体无性系的组织培养

１植物名称刺槐（Ｒｏｂｉｎｉａｐｓｅｕｄｏａｃａｃｉａ）优良无性系：Ｔｅｔｒａｐｌｏｉｄｌｏｃｕｓｔ、Ｇｌｇａｓｔｙｐｅｌｏｃｕｓｔ。２材料类别带腋芽的茎段。３培养条件（１）启动培养基：ＭＳ＋６－ＢＡ０．２５ｍｇ·Ｌ－１（单位下同）＋ＮＡＡ０．０５。（２）分化培养基和继代培养基：ＭＳ＋６－ＢＡ０．５＋ＮＡＡ０．１＋ＡｇＮＯ３１０,ＭＳ＋６ＢＡ０．５＋ＮＡＡ０．１。上述培养基均添加３％蔗糖、０．６％琼脂。（３）生根培养基：１／２ＭＳ＋ＩＢＡ０．２＋ＮＡＡ０．２,添加２％蔗糖０．６％琼脂。培养基ｐＨ…     

玉香梨的组织培养与快速繁殖

１植物名称沙梨品种玉香梨（Ｐｙｒｕｓｐｙｒｉｆｏｌｉａ　ｃｖ．　ｙｕｘｉａｎｇ）。２材料类别侧芽。３培养条件（１）丛芽诱导培养基：１／２ＭＳ大量元素＋ＭＳ微量元素＋铁盐＋有机成分＋６－ＢＡ２ｍｇ·Ｌ－１（单位下同）＋ＮＡＡ０．２＋ＧＡ３２＋３％蔗糖＋０．８％琼脂,固体培养;（２）增殖培养基：１／２ＭＳ＋ＢＡ１．５＋ＮＡＡ０．２＋ＧＡ３１＋３％蔗糖＋０．８％琼脂,固体培养;（３）生根培养基：１／２ＭＳ＋ＩＢＡ１０＋１．５％蔗糖＋０．６％琼脂,固体培养８ｄ后转入不含任何激素的同类培养基中的二步生根法…     

蝴蝶兰根段的组织培养

１　植物名称　蝴蝶兰（ＰｈａｌａｅｎｏｐｓｉｓＭｅｌｌｅｒＧｏｌｄ“ＮＦＳ”）。２　材料类别　根段。３　培养条件　（１）愈伤组织的诱导及分化培养基：Ｂ５＋ＮＡＡ１．５ｍｇ·Ｌ－１（单位下同）＋ＫＴ０．２＋ＣＭ１５０ｍｌ·Ｌ－１＋３％蔗糖;（２）原球茎增殖培养基：Ｂ５＋ＧＡ０．０５＋ＣＨ１２０＋３％蔗糖;（３）小苗生长培养基：１／２ＭＳ＋２０％香蕉泥＋２％蔗糖;（４）诱导生根培养基：１／２ＭＳ＋ＩＢＡ０．３＋２％蔗糖。上述培养基均加０．２％活性炭,０．５８％琼脂粉,ｐＨ为５．５;培养基在１２１℃高…     

用核酸免疫技术制备抗丙肝病毒C区单克隆抗体

用丙肝病毒Ｃ＋Ｅ１区真核表达质粒ｐｃＤＮＡ－ＨＣＶ／Ｃ＋Ｅ１按４００ｕｇ／只剂量免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,１４周后同一剂量再加强免疫一次。加强免疫后２周,在５０％ＰＥＧ１４５０介导下将脾细胞与ＳＰ２／０小鼠骨髓瘤细胞（５１）融合。实验结果融合率达５４．３％（３１３／５７６）。阳性率为５．４％（１７”３１３）。克隆化后得到６株稳定分泌抗丙肝病毒Ｃ区单克隆抗体杂交瘤细胞株。这６株杂交瘤均产生ＩｇＭ抗体,接种ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠后产生腹水的效价为１６４－１３２０（ＥＬＩＳＡ）。     

PAGE活性染色法分析D.radiodurans过氧化氢酶和起氧化物歧化酶

用ＰＡＧＥＡ活性染色分析了Ｄ．ｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓ过氧化氢酶（Ｃａｔ）和起氧化物歧化酶（ＳＯＤ）。２种同种异型Ｄ．ｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓ（Ｒ１和Ｓａｒｋ）的Ｃａｔ在电泳带型上存在差异,两者Ｋａｔ均可分为Ａ、Ｂ和Ｃ３条带,但各带所占比例明显不同,ＳＯＤ的分析结果表明,Ｄ．ｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓ ＳＯＤ以Ｆｅ＾２＋和Ｍｎ＾２＋离子的嵌合体形式存在,其中Ｆｅ－ＳＯＤ成分占９０％以上。ＰＡＧＥ活性染色法     

决明组织培养的研究

以草决明无菌苗子叶为外植体,接种于７类诱导愈伤组织的培养基上：Ａ．ＭＳ＋２．０２,４－Ｄｍｇ／Ｌ（以下单位省略）＋０．３ＢＡ＋０．２ＮＡＡ．Ｂ．ＭＳ＋０．２２,４－Ｄ十０．２ＢＡ＋２．０ＮＡＡ．Ｃ．ＭＳ＋１．０２,４－Ｄ＋０．５ＢＡ＋０．２ＫＴ．Ｄ．ＭＳ＋０．７ＢＡ＋１．５ＮＡＡ＋０．１ＫＴ．Ｅ．ＭＳ＋１．５２,４－Ｄ＋０．７ＢＡ十０．２ＭＡＡ．Ｆ．ＭＳ＋０．４２．４－Ｄ＋１．０ＮＡＡ＋０．１ＫＴ．Ｇ．ＭＳＢ（ＭＳ的无机成份和Ｂ５有机成分）＋０．１５ＮＡＡ＋ＢＡ,ＫＴ和ＺＴ各０．５。８～１５天后分别有９０～９９．６％的子叶片被诱导出愈伤组织,并且Ｆ．与Ｃ．类培养基对诱导愈伤组织比较理想,放于Ｇ培养基上的愈伤组织有９．２～３０．２％的芽分化率。芽在生根培养基１／２ＭＳ＋０．２ＩＢＡ中、９８％生根,形成完整的再生植株。     

豆壳过氧化物酶的分离纯化及其性质研究

从豆壳抽提液经硫酸铵分级沉淀,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０离子交换层析,ＣｏｎＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲合层析和Ｂｉｏ－ＧｅｌＰ－６０凝胶过滤,纯化了豆壳过氧化物酶（ｓｏｙｂｅａｎｈｕｌｐｅｒ－ｏｘｉｄａｓｅ,ＳｈＰ）．纯化酶的比活力为７０７７Ｕ／ｍｇ,在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上显示出一条蛋白质带．ＳｈＰ分子量为３８０００,等电点为３．９;ＳｈＰ为一含血红素的糖蛋白,含糖量为１８．７％,光谱学分析揭示,在４０６ｎｍ处有一典型的Ｓｏｒｅｔ带,在５１０ｎｍ和６４０ｎｍ处有特征吸收峰．酶反应的最适ｐＨ在４．０附近,最适温度为４５℃;在ｐＨ２．５～１２．０之间较稳定,７５℃,保温６０ｍｉｎ,酶活力残余６８％,ＳｈＰ是一种良好的耐酸碱、耐热过氧化物酶．动力学分析求得ＳｈＰ的表观Ｋｍ（愈创木酚）为１．６２ｍｍｏｌ／Ｌ,表现Ｋｍ（Ｈ２Ｏ２）为０．３４ｍｍｏｌ／Ｌ．在所测定的化学试剂中,Ｎ－３、ＣＮ－、Ｆｅ３＋、Ｆｅ２＋和Ｓｎ２＋对酶有较强烈的抑制作用,而重金属离子Ａｇ＋、Ｈｇ２＋、Ｐｂ２＋、Ｃｕ２＋、Ｃｒ３＋以及ＳＤＳ和ＥＤＴＡ对酶活力无显著影响     

非洲菊的组织培养与快速繁殖

１植物名称非洲菊（Ｇｅｒｂｅｒａｊａｍｅｓｏｎｉｉ）,又名扶郎花。２材料类别无菌种子萌发的幼苗。３培养条件（１）种子萌发培养基：１／２ＭＳ＋０．７％琼脂（或脱脂棉）;（２）诱导分化培养基：ＭＳ＋６－ＢＡ１．５ｍｐ·Ｌ－１（单位下同）＋ＩＢＡ０．２;（３）芽增殖培养基：ＭＳ＋６－ＢＡ０．５;（４）生根培养基：ＭＳ＋ＮＡＡ２。上述（２）、（３）、（４）培养基内琼脂均为０．７％,蔗糖３％,ｐＨ５．８～６．０。培养条件为室温和自然光照,种子萌发前为暗培养。４生长与分化情况４．１萌发种子用纱布袋包装,无菌…     

宫粉郁金的组织培养和快速繁殖

１植物名称宫粉郁金（Ｃｕｒｃｕｍａ　ｋｗａｎｇｓｉｅｎｓｉｓ）。２材料类别　块茎萌动芽。３培养条件　萌动芽生长培养基：（１）ＭＳ＋６－ＢＡ１ｍｇ·Ｌ－１（单位下同）＋ＮＡＡ０．２。不定芽增殖与愈伤组织诱导培养基：（２）ＭＳ＋６－ＢＡ１０＋ＫＴ５;（３）ＭＳ＋６．ＢＡ１０;（４）ＭＳ＋６－ＢＡ５＋ＫＴ２．５;（５）ＭＳ＋６－ＢＡ５;（６）ＭＳ＋６－ＢＡ２＋ＫＴ１。生根培养基：（７）ＭＳ＋ＮＡＡ０．５;（８）ＭＳ＋６－ＢＡ０．５＋ＮＡＡ０．５;（９）ＭＳ。以上培养基均加０．７％琼脂,３％蔗糖,ｐＨ５…     

喷施烯效唑对苹果顶芽激素水平和花芽分化的影响

用烯效唑(uniconazol,S3307)1 g/L喷洒“红富士“苹果树降低了顶芽IAA、GA1,3,4,7含量,提高了ZR、ABA含量,从而提高了ZR/IAA、ZR/GA1,3,4,7、ABA/IAA和ABA/GA1,3,4,7比值.烯效唑处理增加了花芽形成百分率,加速了花芽分化的进程,缩短了花芽形成的延续时期,但对花芽生理孕育临界时期长短没有影响.烯效唑处理对花芽的节位数没有影响,但使叶芽节位数增加了1节.     

外源脱落酸和马来酰肼对杂交水稻F1穗上种子发芽的抑制效应

杂交稻F1齐穗后21 d(灌浆期)施用ABA 1000mg/L或MH 4000 mg/L,可以抑制穗芽的发生,降低种子活力.ABA处理F1发芽种子使GA1含量下降,淀粉酶活性表达滞后,活性下降,有效发芽期延长;MH处理没有引起F1发芽种子GA1含量与淀粉酶活性下降,但使未发芽种子中GA1与淀粉酶活性明显下降,并丧失发芽能力.因此,ABA对杂交稻F1穗芽的抑制作用可视为"后熟效应",而MH对穗芽的抑制作用可视为"遏制作用".     

香梨果实成熟衰老过程中4种内源激素的变化

以库尔勒香梨[白梨(PyrusbretschneideriRehd.)的变种]为材料,在果实生长发育、成熟衰老期间检测内源IAA、GA3、ABA、乙烯含量变化规律及其相互关系。结果表明果实发育初期IAA、GA3、ABA含量最高,有利于幼果坐果;CA3与ABA的比值变化对果实迅速膨大起关键作用;高浓度GA3对阻抑叶绿素分解起明显作用;果实成熟衰老期间,IAA含量与乙烯释放速率呈方向相同的变化;在此期间GA3含量变化与乙烯释放变化相反。     

甘薯根腐病菌侵染对甘薯内源激素水平的影响

甘薯根腐病病原菌[Fusarium solani(Mart.)Sacc.f.sp.batatas McClure,简称FSB]侵染及其培养液滤液处理高敏感性甘薯品种‘胜利百号’后,引起甘薯叶片、茎尖和根部组织内源ABA含量大幅升高。其中在根部出现最早,但茎尖中积累浓度最高。侵染后甘薯叶片、茎尖和根部组织内源GA1/3含量显著低于对照。甘薯组培苗经FSB培养滤液处理9h后,ABA含量显著上升,处理15h,ABA含量呈下降趋势,而GA1/3含量在101和102稀释液处理15h(103稀释液处理12h)时出现显著上升。这些结果有助于解释甘薯根腐病株矮小不产生藤蔓,并在秋季大量现蕾开花的生理现象。     

豌豆中脱落酸含量、叶片导性与土壤含水量之间的关系

脱落酸与植物水分胁迫的关系已进行了大量的研究,现已明确脱落酸可以抑制气孔的开放(Jones和 Mansfield 1970,Weyers和 Hillman 1979,Henson等 1989),但它的作用机制仍然很不清楚。已有报告指出,当土壤水分亏缺时,ABA可以作为根与地上部间的通讯信号,由很运到地上部并抑制气孔的开放(Blackman和 Davies1985,Gollan等 1986,Zhang和 Davies     

丝氨酸内肽酶在黄瓜叶片衰老中的作用

采用丝氨酸内肽酶抑制剂和植物生长调节剂处理离体黄瓜叶片,研究了黄瓜叶片暗诱导衰老过程中丝氨酸内肽酶的作用。结果表明,6-BA50μmol／L与丝氨酸内肽酶抑制剂AEBSF能抑制叶片内肽酶活性的升高,延缓蛋白质降解,而ABA50μmol/L则促进了内肽酶活性的升高：其作用效果与AEBSF相反。活性电泳结果显示,黄瓜叶片中检测到6条内肽酶同工酶,其中4条（CEP2、3、4、6）为丝氨酸类型内肽酶,而ABA使丝氨酸内肽酶CEP2、3、4、6的活性明显增强,提示了丝氨酸类型内肽酶在黄瓜叶片衰老过程中具有重要作用。     

Distribution of Trans zeatin,GA7/4, (+)ABA and IAA in Tobacco Egg Cells Before and After Fertilization: Immunogold Electron Microscopic Observations

Changes in distribution of trans-zeatin (t-Z), gibberellin A7 and A4(GA7/4), ( + )abscisic acid [( + )ABA] and indoleacetic acid (IAA) in the egg cells of Nicotiana tabacum var. macrophylla before and after fertilization were studied with immunoelectron microscopy. The ovules just at pollination or 96 h after pollination were fixed with 2% EDC [ 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide] and then with the mixed paraformaldehyde and glutaraldehyde for acidic phytohormones (or only with the aldehydes for t-Z), then slightly posffixed in 0.5% OsO4 solution for 30 min. After etched in 1% H2O2 for 10 min, the ultrathin sections embedded in Epon 812 resin were immunostained with rabbit anti-t-Z (and t-ZR) polyclonal antibody (PAB), anti-lAA methyl ester PAb, mouse anti-GA7 and GA4 methyl esters monoclonal antibody(MAb), or anti-( + ) ABA methyl ester MAb, respectively. Protein A- or sheep anti-mouse IgG-colloidal gold (Φ 10 nm) were used to indicate rabbit PAbs or mouse MAbs respectively. In the model system of nitrocellulose membrane via immunogold-silver enhancement, the authors ascertained that immunostaining results at the basis of 1 ng per phytohonnone (t-Z, IAA, GA4, or ( + )ABA) were comparable among the four-kind phytohormones and that t-Z riboside was far less fixed than t-Z with aldehydes. So the anti-t-Z PAb mainly recognized t-Z in aldehyde-fixed tissues. Immunogold electron microscopic observations showed that t-Z was rich in the egg cells before fertilization. In contrast the amounts of GA7/4 and ( + )ABA were lower in egg cells before fertilization but slightly increased after fertilization. Less IAA in egg cells was found either before or after fertilization, t-Z in unfertilized egg cells appeared to concentrate on the nucleus, endoplasmic reticulnm and mitochondria, t-Z is rarely observed in the nuclei of synergids before fertilization but is abundant in the chalazal end of synergids and micropylar end of the central cell adjacent to the unfertilized egg cell. After fertilization, t-Z decreased bviously in the zygotes and the persistent synergids, but appeared in the thickened walls of the zygotes.     

葡萄贮藏过程中落粒与离区酶活性变化及植物生长调节物质的关系

研究了无核白葡萄(Vitis vinifera L.)采后贮藏过程中离区纤维素酶、果胶酯酶(Pectinesterase,PE)、多聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonase,PG)、脂氧合酶(lipoxygenase,LOX)和过氧化物酶(peroxidase,POD)活性的变化与落粒的关系及植物生长调节物质对其的影响。结果表明,葡萄在贮藏过程中,伴随浆果落粒的增加,离区纤维素酶、PG、LOX、POD活性升高,PE活性下降。离区纤维素酶、PG、LOX等酶的活性与葡萄落粒程度之间呈显著正相关。外源ABA和CEPA处理能增强离区纤维素酶、PG、LOX活性,促进落粒;GA3,IAA处理则能抑制离区纤维素酶、PG、LOX活性,减轻落粒。ABA对落粒的促进效应及GA3对纤维素酶活性和落粒的抑制效应尤为明显,表明GA3与ABA比值在葡萄采后落粒过程中起重要的作用。     

大豆类受体蛋白激酶基因rlpk2启动子克隆及初步分析

用双链接头介导的基因组DNA步行技术获得了大豆中与衰老相关的类受体蛋白激酶基因rlpk2 5’侧翼1801bp启动子序列（Prlpk2,GenBank登录号：AY870314）。序列分析结果表明,这一启动子片段中有响应细胞分裂素、脱落酸、赤霉素和生长素等激素作用和响应干旱、寒冷及伤害等逆境胁迫的多个顺式作用元件。构建启动子Prlpk2与报告基因GUS融合基因的双元表达载体pRlpk2．GUS,并通过农杆菌介导法转化大豆幼苗和微型番茄Micro．Tom的子叶外植体,染色结果表明这1801bp的启动子Prlpk2可以有效地驱动GUS基因在大豆幼苗生长点和番茄愈伤组织中瞬时表达。     

病原侵染对采后葡萄激素水平的影响

外源ABA处理采后葡萄可显著促进乙烯释放和抑制IAA的生成,加重葡萄落粒。乙烯利对ABA促进作用不明显,但显著抑制IAA和GA3的生成。葡萄感病后组织内源激素水平发生了变化：ABA含量显著增加,乙烯释放率增大,IAA含量显著减少,这种变化趋势在果梗中尤为突出。