大肠杆菌精氨酰－tRNA合成酶的变种ArgRS306KR的纯化和基本性质

本文从含ＡｒｇＲＳ３０６ＫＲ基因ａｒｇｓ３０６ＫＲ的ｐＵＣ１８重组质粒的大肠杆菌ＴＧ１转化子中经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ和Ｂｌｕｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ两步柱层析,得到电泳一条带的ＡｒｇＲＳ３０６ＫＲ。纯酶的比活为２７９０单位／毫克。该酶氨酰化和ＡＴＰ～ＰＰｉ交换活力的最适ｐＨ分别为ｐＨ８．３和ｐＨ７．５。氨酰化活力对ＡＴＰ、Ａｒｇ和ｔＲＮＡ的Ｋｍ分别为２．６ｍｍｏｌ／Ｌ、１４．０μｍｏｌ／Ｌ和５．０μｍｏｌ／Ｌ：Ｖｍａｘ为７６３０单位／毫克;ｋｏａｔ为９Ｓ－１。ＡＴＰ～ＰＰｉ交换活力对ＡＴＰ和Ａｒｇ的Ｋｍ分别为８．３ｍｍｏｌ／Ｌ和９９μｍｏｌ／Ｌ;Ｖｍａｘ为１６３２０单位／毫克;ｋｃａｔ为１８Ｓ－１。     

苏云金芽孢杆菌Cry1C毒素对昆虫细胞的毒力研究

将携带ｃｒｙ1Ｃ基因的ｐＵＣ1 9质粒载体转到大肠杆菌ＢＬ2 1菌株中 ,经 37℃培养 48小时后可获得单基因的Ｃｒｙ1Ｃ杀虫晶体毒素蛋白提取物。将它溶于 5 0ｍｍｏｌ/ＬＮａ2 ＣＯ3/ＨＣｌ(ｐＨ9.5 )中 ,经胰酶消化后用于细胞的毒力测定。1 .测定方法接种对数期生长的细胞于 96孔板中 ,2 8℃培养过夜后 ,弃上清 ,加入系列梯度稀释的毒素蛋白作用液 ,30ｍｉｎ后 ,弃上清 ,加入ＭＴＴ液 ,反应 4ｈ后 ,弃上清 ,以ＳＤＳ 饱和异丙醇溶解 ,置ＥＬＩＳＡ仪 (λ =5 70ｎｍ)读数。2 .测定结果在所处理的九种昆虫细胞系中 ,甜菜夜蛾Ｓｅ细胞系和埃及…     

北京东之凯生物技术有限公司蛋白质生化试剂价格表

特别推荐 : 2 0 0 1年 5月序　号品　　　名质量指标包　装价格 (元 )参照标准蛋　　白　　质1牛血清白蛋白ＢＳＡ 98% 1 0ｇ 45 0 0ＳｉｇｍａＡ90 562牛血清白蛋白Ｖ 98% 1 0ｇ 45 0 0ＳｉｇｍａＡ941 83亲和素 1 0～ 1 5Ｕ ｍｇ 2ｍｇ 36 0 0ＳｉｇｍａＡ92 754绒毛膜促性激素 50 0 0ＩＵ ｍｇ 1ｍｌ 50 .0 0ＳｉｇｍａＣＧ 55血红蛋白 98% 2 5ｇ 30 .0 0ＳｉｇｍａＨ2 62 56组蛋白 98% 1 0 0ｍｇ 45.0 0ＳｉｇｍａＨ92 507透明质酸钠 98% 1 0 0ｍｇ 50 .0 0ＳｉｇｍａＨ53888植物血球凝集素ＰＨＡ电泳均一 1 0ｍｇ 30 .0 0ＳｉｇｍａＬ2…     

大肠杆菌亮氨酰－tRNA合成酶LeuRS67R的纯化及其动力学研究

本实验室已得到的亮氨酰－ｔＲＮＡ合成酶（ＬｅｕＲＳ）基因,与文献相比,６７位氨基酸残基由Ｈｉｓ变为Ａｒｇ,此酶被定名为ＬｅｕＲＳ６７Ｒ。我们从该基因与ｐＵＣ１９重组质粒的大肠杆菌ＴＧ１转化子ＴＧ１－９１中得到ＬｅｕＲＳ的高表达,粗抽液中ＬｅｕＲＳ的表达量在转化子中比在宿主菌ＴＧ１中高２０倍以上。用三步拉层析得到电泳一条带的酶,其比活为１７８９单位／毫克。测定其动力学常数,氨酰化活力对Ｌｅｕ、ＡＴＰ的Ｋｍ值分别为０．０２７ｍｍｏｌ／Ｌ、０．４７ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｋｃａｔ值分别为３．５～５．１ｓ－１。ＡＴＰ－ＰＰｉ交换活力对Ｌｅｕ、ＡＴＰ的Ｋｍ值分别为０．０３ｍｍｏｌ／Ｌ、１．０ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｌｃａｔ值分别为１４０～１５５ｓ－１。此结果与从野生型大肠杆菌Ｋ－１２中提纯的ＬｅｕＲＳ的动力学常数差别很小,６７位氨基酸残基在与活性中心无直接关系的域可能是大肠杆菌的种间差异。     

大肠杆菌精氨酰—tRNA合成酶的变种ArgRS306KR的纯化…

本文从含ＡｒｇＲＳ３０６ＫＲ基因ａｒｇｓ３０６ＫＲ的ｐＵＣ１８重组质粒的大肠杆菌ＴＧ１转化子中经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ和Ｂｌｕｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ两步柱层析,得到电泳一条带的ＡｒｇＲＳ３０６ＫＲ。纯酶的比活为２７９０单位／毫克。该酶氨酰化和ＡＴＰ－ＰＰｉ交换活力的最适ＰＨ分别为ＰＨ８．３和ＰＨ７．５。氨酰化活力对ＡＴＰ、Ａｒｇ和ｔＲＮＡ的Ｋｍ分别２．６ｍｍｏｌ／Ｌ、１４．０μｍｏｌ／Ｌ和５．     

PAS反应在显示真菌中的应用和体会

ＰＡＳ反应 (Ｐｅｒｏｄｉｃ Ａｃｉｄ Ｓｃｈｉｆｆｒｅａｅｔｉｏｎ)属于糖类的组织化学反应 ,它不仅在对糖原、粘蛋白、粘多糖及含碳水化合物的物质有特异性 ,而且对真菌的显示亦十分理想。现将ＰＡＳ显示真菌的体会予以介绍 :1、材料和方法1.ｌ材料选取外检中食道、胃、鼻腔、上颌窦、肺、皮肤、指 (趾 )甲等组织ＨＥ染色切片中疑有真菌感染者5 0例。重新切片。1.2　改良Ｓｃｈｉｆｆ试剂的配制 ,碱性品红 0 5ｇ加1ｍｏｌ/Ｌ盐酸 15ｍｌ,振荡使之溶解 ,再加 0 6 %偏重亚硫酸钠 85ｍｌ。紧盖瓶塞 ,振荡后在室温下放置 2 4ｈ ,溶液呈草…     

红龙果的组织培养和嫁接成苗

1　植物名称　红龙果 (Ｈｙｌｏｃｅｒｅｕｓｕｎｄａｔｕｓ)。2　材料类别　嫩茎节。3　培养条件　 (1 )芽诱导培养基 :ＭＳ 6 ＢＡ 5ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 ) ＮＡＡ 0 2 ;(2 )生根培养基 :1 /2ＭＳ ＩＢＡ 2 1 %活性炭。以上培养基均含 3 %蔗糖、0 5 1 %卡拉胶 ,ｐＨ 5 8,培养温度 (2 5± 2 )℃ ,光照1 2ｈ·ｄ- 1 ,光照度 2 0 0 0ｌｘ。4　生长与分化情况4.1　无菌材料的获得　将红龙果嫩茎节用棉花蘸少许肥皂水刷洗 ,在流水下冲洗干净 ,无菌条件下切成数段 (每段 3～ 4ｃｍ长 ) ,用 70 %的酒精消毒 3 0ｓ,再用 0 1 %升汞溶液消…     

中国石竹离体成花

1　植物名称　石竹 (Ｄｉａｎｔｈｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ)。2　材料类别　茎基部丛生芽。3　培养条件　 (1 )诱导愈伤组织培养基 :1 / 2ＭＳ 6 ＢＡ 0 1 86ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 ) ＮＡＡ 0 1 1 1 ;(2 )分化培养基 :ＭＳ 6 ＢＡ 0 1 86 ＮＡＡ 0 1 1 1。以上培养基均含 3 %蔗糖、0 8%琼脂 ,ｐＨ 5 8,培养基温度 2 5℃左右 ,光照 1 6ｈ·ｄ- 1 ,光照度 2 2 5 0ｌｘ。4　生长与分化情况4.1　无菌材料的获得　已开花的石竹茎基部丛生芽高 5～ 6ｃｍ ,剪下 3～ 4ｃｍ。水冲 3 0ｍｉｎ后进入灭菌室 ,在接种箱操作台上剪去叶 ,将茎…     

铁皮石斛茎段离体快繁

1　植物名称　铁皮石斛 (Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍｃａｎｄｉｃｕｍ)。2　材料类别　幼嫩茎段。3　培养条件　基本培养基为ＭＳ。芽增殖培养基 :(1 )ＭＳ +ＮＡＡ 0 .1～ 0 .5ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 ) +6 ＢＡ 0 .5～ 2 .0 ;壮苗培养基 :(2 )ＭＳ无激素培养基 ;生根培养基 :(3 ) 1 /2ＭＳ +ＩＢＡ 0 .1。以上各种培养基蔗糖浓度均为 3 .0 % ,ｐＨ 5 .4～ 5 .8,培养温度 (2 5 +2 )℃ ,连续光照培养 ,光照强度 1 5 0 0ｌｘ。4　生长和分化情况4.1　丛生芽诱导　剪取幼嫩茎段 ,按常规表面灭菌后 ,切成约 2 .0ｃｍ左右的切段 ,每一切段应至少保留 …     

爱元果的组织培养和快速繁殖

1　植物名称　爱元果 (Ｄｉｓｃｈｉｄｉａｐｅｃｔｎｏｉｄｅｓ)。2　材料类别　带芽茎切段。3　培养条件　诱导侧芽萌动及不定芽分化的培养基 :ＭＳ 6 ＢＡ 3 .0ｍｇ·Ｌ-1(单位下同 ) ＮＡＡ 0 .5 ;继代增殖培养基 :ＭＳ 6 ＢＡ 1 .5 ＩＢＡ 0 .3 ;生根培养基 :1 2ＭＳ ＩＡＡ 0 .5。以上培养基均含蔗糖3 %,琼脂 0 .7%,培养基ｐＨ值 5 .8,培养温度 (2 5± 2 )℃ ,光照度 1 5 0 0ｌｘ ,光照时间 1 2ｈ·ｄ-1。4　生长与分化情况4.1　诱导分化　取新鲜爱元果茎段 (1 0ｃｍ) ,去除叶片后 ,分别用 0 .1 %的肥皂水和蒸馏水洗净。于超…     

Glycine—SDS—PAGE测定小分子多肽分子量

小分子多肽分子量的测定 ,目前多采用Ｔｒｉｃｉｎｅ -ＳＤＳ -ＰＡＧＥ系统[1～ 3 ] ,但系统中的Ｔｒｉｃｉｎｅ价格昂贵 ,加之电泳时间较长 ( 3～ 4ｈ) ,为此 ,作者经过实验摸索 ,建立了Ｇｌｙｃｉｎｅ -ＳＤＳ -ＰＡＧＥ测定小分子多肽的方法。1　材料和方法表 1　制胶配方成分分离胶 (ｍｌ)浓缩胶 (ｍｌ)分离胶单体母液 1 3 3 -浓缩胶单体母液 -0 23 2ｍｏｌ/ＬＴｒｉｓ-ＨＣｌ 1 3 3 -(ｐＨ8 8)0 5ｍｏｌ/ＬＴｒｉｓ-ＨＣｌ -0 3 8(ｐＨ6 8)尿素 1 44ｇ -Ｈ2 Ｏ 0 40 910 %ＳＤＳ 40 μｌ 15 μｌ10 %ＡＰＳ 2 5 μｌ 12 μｌＴ…     

龙蒿的组织培养和快繁

1　植物名称　龙蒿 (Ａｒｔｅｍｉｓｉａｄｒａｃｕｎｃｕｌｕｓ) ,又名狭叶青蒿。2　材料类别　嫩尖、茎段。3　培养条件　芽诱导培养基 :(1 ) 1 /3ＭＳ 6 ＢＡ1 .0ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 ) ＩＢＡ 0 .2。增殖培养基 :(2 )ＭＳ 6 ＢＡ 0 .5 ＩＢＡ 0 .2 ;(3 )ＭＳ 6 ＢＡ 0 .2 ＩＢＡ 0 .2 ;(4)ＭＳ。生根培养基 :(5 ) 1 /2ＭＳ ＩＢＡ 0 .5 ;(6 ) 1 /2ＭＳ ＮＡＡ 0 .5 ;(7) 1 /2ＭＳ ＩＢＡ0 .5 ＮＡＡ 0 .5。以上培养基加入微生物多糖固化剂 4.5 ｇ·Ｌ- 1 ,蔗糖 3 % ,培养温度 (2 5± 2 )℃ ,ｐＨ5 .86 .0 ,光照度 1 5 0 0…     

败酱的组织培养和快速繁殖

1　植物名称　败酱 (Ｐａｔｒｉｎｉａｓｃａｂｉｏｓａｅｆｏｌｉａ) ,民间称为苦菜。2　材料类别　一年生败酱的茎。3　培养条件　基本培养基为ＭＳ。 (1 )芽诱导培养基Ⅰ :ＭＳ ＢＡ 0 .5ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 ) ＫＴ0 .5 ＩＢＡ 0 .5 ;芽诱导培养基Ⅱ :ＭＳ ＢＡ 0 .5 ＫＴ 1 .0 ＩＢＡ 1 .0。 (2 )生根培养基 :ＭＳ ＢＡ 0 .2 ＩＢＡ 2 .0。培养基含蔗糖 3 0 ｇ·Ｌ- 1 ,琼脂 0 .8% ,ｐＨ5 .8,培养温度 (2 5± 1 )°Ｃ ,光照度 1 2 0 0～ 1 40 0ｌｘ ,光照 1 4ｈ·ｄ- 1 。4　生长与分化情况　　取败酱嫩茎用自来水冲洗干净 ,…     

蒟蒻薯的组织培养及植株再生

1　植物名称　薯 (Ｔａｃｃａｃｈａｎｔｒｉｅｒｉ) ,又名箭根薯、老虎须、黑蝴蝶等。2　材料类别　种子或茎尖。3　培养条件　种子萌发培养基 :( 1 ) 1 /2ＭＳ ;( 2 )ＭＳ。芽诱导及增殖培养基 :( 3)ＭＳ + 6 ＢＡ 3.0～5 .0ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 ) +ＮＡＡ 0 .3～ 0 .0 5 ;( 4 )ＭＳ+ 6 ＢＡ 2 .0～ 1 .0 +ＫＴ 2 .0～ 1 .0 +ＮＡＡ 0 .0 5。生根培养基 :( 5 )ＭＳ + 6 ＢＡ 0 .5 +ＩＢＡ 0 .3;( 6)1 /2ＭＳ +ＩＢＡ 0 .5。以上培养基均附加 0 .7%琼脂 ,ｐＨ 5 .4～ 5 .6。培养基 ( 1 )、( 2 )、( 6)的糖用量为 2 0ｇ·Ｌ- 1 ;培养…     

大樱桃矮化砧木吉塞拉（Gisela）的微体繁殖

1　植物名称　大樱桃矮化砧木 (Ｐｒｕｎｕｓｃｅｒａｓｕｓ×Ｐ .ｃａｎｅｓｃｅｎｓ)吉塞拉 (Ｇｉｓｅｌａ) 5、6、7号。2　材料类别　休眠枝条。3　培养条件　ＭＳ为基本培养基。 ( 1 )丛生芽诱导培养基 :ＭＳ 6 ＢＡ 1ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 ) ＩＢＡ0 .1。 ( 2 )继代增殖培养基 :ＭＳ 6 ＢＡ 0 .5 ＺＴ0 .1。 ( 3)生根培养基 :1 /2ＭＳ ＩＢＡ 0 .3。培养基中蔗糖为 3% ,琼脂为 0 .6% ,ｐＨ 5 .8,温度 2 5℃ ,每天光照 1 6ｈ ,光照度为 1 5 0 0ｌｘ。4　生长与分化情况4.1　无菌材料的获得　将外植体用洗衣粉溶液洗净表面 ,再以…     

壮丽含笑中的倍半萜成分及其化学分类学意义

壮丽含笑 (ＭｉｃｈｅｌｉａｌａｃｅｉＷ Ｗ Ｓｍｉｔｈ)为木兰科含笑属植物 ,常绿乔木 ,分布于我国云南西南部 ,生于海拔 15 0 0ｍ的林中。枝粗壮 ,花梗具佛焰苞状苞片约 5枚 ,心皮狭卵圆形具 3～ 4ｍｍ的花柱等特征 ,形态分类学上认为该种是含笑属中较原始而特殊的种类 (刘玉壶等 ,1996)。通过初步药理筛选实验 ,表明其嫩枝的脂溶性提取物在浓度为 1 5 μｇ/ｍＬ时对两种人肿瘤细胞株ＨＣＴ - 8及ＳＩＨａ的抑制率分别为5 7 0 %及 2 1 3% ,对ＧＬＣ - 82细胞株的抑制率尤其明显 ,为 84 6% ;对ＣｏｎＡ刺激的小鼠脾淋巴细胞增殖反应在浓…     

大叶凤尾蕨的离体培养及植株再生

1　植物名称　大叶凤尾蕨 (Ｐｔｅｒｉｓｃｒｅｔｉｃａ)品种白斑大叶凤尾蕨 (ｃｖ .“Ａｌｂｏｌｉｎｅｎｅａｔａ”)。2　材料类别　叶背面成熟孢子。孢子囊群沿羽片顶部以下的叶缘连续分布 ,呈狭条形。供试植株来源于荷兰花卉市场的大叶凤尾蕨盆花。3　培养条件　 (1 )诱导孢子萌发培养基 :1 / 3ＭＳ ;(2 )初代培养基 :ＭＳ 6 ＢＡ 3 .0ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 ) ＩＢＡ 3 .0 ;(3 )继代培养基 :ＭＳ 6 ＢＡ 1 .0 ＩＢＡ 1 .0 ;(4)生根培养基 :1 / 2ＭＳ ＮＡＡ 2 .0 ＩＡＡ2 .0 ;(5 )复壮培养基 :1 / 2ＭＳ 活性炭 2 0 ｇ·Ｌ- 1…     

四季草莓“赛娃”的组织培养与快速繁殖

1　植物名称　四季草莓“赛娃”(Ｆｒａｇａｒｉａｖｅｓｃａｃｖ .ｓｅｌｖａ)。2　材料类别　匍匐茎尖。3　培养条件　 (1)芽诱导培养基 :ＭＳ 6 ＢＡ 0 .5ｍｇ·Ｌ- 1(单位下同 ) ＮＡＡ 0 .1;(2 )增殖培养基 :ＭＳ 6 ＢＡ 1 ＩＢＡ 0 .0 5 ;(3)生根培养基 :1/2ＭＳ     

Weishengwuxue Tongbao MICROBIOLOGY Vol .29 2002 CONTENTS

Ｎｏ .1ＳｔｕｄｉｅｓｏｆＳｃｒｅｅｎｉｎｇＭｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓｄｅｇｒａｄｉｎｇＬｉｎｅａｒＳｏｄｉｕｍＡｌｋｙｌｂｅｎｚｅｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ (ＬＡＳ)ａｎｄｉｔｓＤｅｇｒａｄｉｎｇＣｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ＹＩＮＧＱｉ Ｆｅｎｇ,ＸＩＡＯＣｈａｎｇ Ｓｏｎｇ,ＪＩＳｈｕ Ｌａｎ ( 1)……………………………………………………………………ＳｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆＳｉｒａｉｎｓＰｒｏｄｕｃｉｎｇＬｉｐａｓｅｓｗｉｔｈｈｉｇｈＡｃｔｉｖｉｔｉｅｓａｎｄＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆＳｔｒａｉｎ…     

ACTA BOTANICA SINICA ,Vol.42 CONTENTS

Ｎｏ .1(Ｊａｎ .,2 0 0 1)ＡＲｅｗａｒｄｉｎｇＦｉｆｔｅｅｎＹｅａｒｓ:ＦｒｏｍＳＬＧｔｏＳＣＲ/ＳＰ11ＣＵＩＨａｉ＿Ｙａｎｇ ,ＬＡＩＺｈａｏａｎｄＸＵＥＹｏｎｇ＿Ｂｉａｏ……………………………………………… ( 1)ＴｈｅＳｔｒｕｃｔｕｒａｌＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＮｕｃｌｅｏｌａｒＤＮＡａｎｄＩｔｓＡｒｒａｎｇｅｍｅｎｔｉｎＮｕｃｌｅｏｌｕｓｏｆＡｌｌｉｕｍｃｅｐａＣｅｌｌｓ (ｉｎＥｎｇｌｉｓｈ)ＴＡＯＷｅｉ,ＺＨＡＮＧＬｉ＿Ｙｏｎｇ ,ＨＵＡＮＧＢａｉ＿Ｑｕ ,ＪＩＡＯＭｉｎｇ＿Ｄａ ,ＨＥＭｅｎ…