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相似文献
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1.
通过PCR定点突变的技术,将蛇毒蛋白Echistatin基因的C端进行了突变(Ala48→Arg48→,Thr49→Val49),模拟纤维蛋白N端的四肽(Gly-Pro-Arg-Val),以期增加Ecs(Echistatin)的活性。突变的基因重组到表达质粒pJC264上,经IPTG诱导,以CheY-Ecs融合蛋白方式进行了表达,表达量占菌体总蛋白的15~20%。SephadexG-75初步纯化该融合蛋白,然后用CNBr裂解,透析,冻干,反相HPLC纯化C端突变体Ecs蛇毒蛋白,N端十个氨基酸分析与天然的相符,在PRP(platelet-richplasma)测活体系中,10μmol/L的ADP诱导,C端突变体Ecs抑制血小板凝聚的活性约为野生型4倍。得到了Ecs的C端突变后使Ecs抑制血小板凝聚的活性提高的结果。  相似文献   

2.
p16抑癌基因定点突变及其在大肠杆菌中的表达与纯化   总被引:1,自引:0,他引:1  
为了研究错义突变对p16功能的影响,应用PCR体外定点突变方法对p16cDNA进行体外定点突变,并将野生型和突变型p16cDNA克隆于pGEX-5T载体,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达,Western印迹鉴定确证表达.而后用谷胱甘肽-Sepharose4B亲和层析纯化野生型和突变型p16融合蛋白.得到了第48位密码子CCG(Pro)→CTG(Leu)突变的p16-P48突变体,并在大肠杆菌中表达了42kD的GST-p16和GST-p16P48L融合蛋白.最后经纯化得到了野生和P48L突变的p16融合蛋白  相似文献   

3.
天花粉蛋白Y14F/R22L定点突变及其活性研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
利用多聚酶链式反应(PCR)技术,对天然天花粉蛋白(nTCS)基因在Tyr14和Arg22两个保守残基处同时进行定点突变,即Tyr14变成Phe,Arg22变成Leu,然后克隆到pET-8c高效表达载体上,构建成重组质粒pETY14F/R22L.经序列分析,定点突变的结果与预先设计的完全一致,突变后的天花粉蛋白命名为Y14F/R22LTCS.将pETY14F/R22L转化到E.coliBL21(DE3,pLysS)中,进行表达.经CM-SepharoseCL-6B柱纯化,SDS-PAGE鉴定,纯度可达90%.RIP活性测定显示,Y14F/R22LTCS的活性比nTCS降低了7.5倍,活性变化不显著,因此,TCS的Try14和Arg22对维持其活性部位构象并不是必需的.但由于Y14F/R22LTCS在E.coli中的表达量与nTCS相比明显下降,因此,Tyr14和Arg22可能与TCS翻译后的折叠有关.  相似文献   

4.
利用阴离子交换和凝胶过滤柱层析等方法对蟾蜍卵黄外被细胞溶素进行了分离纯化,获得了高纯度的样品.该酶的质量为32kD,其特异性MCA-人工合成底物为Boc-Gln-Arg-Arg-MCA,能被DFP、SBTI、leupeptin和p-AMPSF等蛋白酶抑制剂所强烈抑制,但不受chymostatin、bestatin、E-64和EDTA等的影响,表明该酶是一种丝氨酸类型的蛋白酶  相似文献   

5.
用pUC19质粒作载体,克隆了黄地老虎颗粒体病毒(Agrolissegetumgranulosisvirus,简称AsGV)DNAPstI-D.E.F.G.H.J.K.等7个片段。以[ ̄(32)P]-dCTP标记的油桐尺蠖核型多角体病毒(Buzurasuppressarianuclcarpolyhedrosisvirus简称BsNPV)多角体蛋白基因为探针,在37℃条件下对AsGV)颗粒体蛋白基因进行了定位,将其分别定位于BslⅡ-S或TPsTI-A或B和EciRI-A片段上。  相似文献   

6.
少棘巨蜈蚣(ScolopendrasubspinipesmutilansL.Koch)经95%乙醇脱脂后,再经4℃水冷渗,水提液低温旋转浓缩,冻干,得到的冻干粉先后经过SephadexG-25柱,等电聚焦制备电泳,再经SephadexG-150柱,SephadexG-100柱,最后经HPLC制备得到一个纯的碱性蛋白,命名为SSmp-d.该蛋白经HPLC、超薄等电聚焦电泳检验是均一的.采用HPLC和Protein-PakTM125柱测定其分子量为24.64kD.IEF-HPCE显示其等电点为9.27.氨基酸分析表明SSmp-d含较多的Arg、Lys等碱性氨基酸,另外还含有较多的Ala、Leu.使用蛋白质自动序列分析仪测定了SSmp-dN端的11个氨基酸,序列为NH3+-Asp-Val-Asn-Phe-Arg-Leu-Ser-Gly-Ala-Asp-Pro.  相似文献   

7.
王不留行环肽研究   总被引:9,自引:2,他引:7  
从中药王不留行(Vacariasegetalis)种子中分离并鉴定了4个环肽化合物,分别命名为王不留行环肽A,B,C,D(vaccarinsA,B,C,D),其中王不留行环肽A为新环肽化合物。其结构通过光谱和化学方法分别确定为:vaccarinA——cyclo-(Trp-Ala1-Gly-Val-Ala2),vaccarinB———cyclo-(Pro-Gly-Leu-Ser-Phe1-Ala-Phe2),vaccarinC———cyclo-(Pro1-Gly-Tyr-Val-Pro2-Leu-Trp),vacarinD———cyclo-(Pro-Val1-Trp-Ala-Gly-Val2).  相似文献   

8.
PALAEOZOOLOGICALMuseumofChina(英汉对照)ThePalaeozoologicalMuse-umofChinafoundedbytheInsti-tuteofVertebratePalaeontologyandPalaeoa...  相似文献   

9.
人粒-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)是一种重要的造血生长因子.利用基因重组技术构建两个hGM-CSF的E.coli表达菌株,一个为在不改变氨基酸顺序的前提下,对mRNA翻译起始区核苷酸顺序进行优化突变(hGM-CSF(M)),另一个为未突变的对照(hGM-CSF(N)).经酶切电泳、DNA测序、SDS-PAGE和Westernblot等分析鉴定,证明两者均能表达特异性的14.6kDhGM-CSF,但hGM-CSF(M)的表达水平较hGM-CSF(N)提高了1.26倍,占菌体总蛋白的16.9%.mRNA翻译起始区二级结构预测分析表明,优化突变后生成自由能ΔG从原来的-10.2提高至-9.4Kcal,AUG从部分配对状态变为非配对状态.  相似文献   

10.
日本血吸虫26kD抗原基因在BCG中的表达   总被引:5,自引:0,他引:5  
研究了外源基因日本血吸虫26kD抗原(Sj26GST)在卡介苗(bacilusCalmete-Guerin,BCG)、耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)和大肠杆菌(E.coli)中的表达.运用重组DNA和聚合酶链反应(PCR)等分子生物学技术,以表达Sj26GST的E.colipGEX衍生质粒为模板,经PCR得到编码Sj26GST的全长cDNA片段.将其按正确的阅读框顺序,克隆到人结核杆菌热休克蛋白(heatshockprotein,HSP)70的启动子下游,再将HSP70启动子和Sj26GST基因一起亚克隆到E.coli-分枝杆菌穿梭质粒pBCG-2000中,得到E.coli-分枝杆菌穿梭表达质粒pBCG-Sj26.pBCG-Sj26电转化入BCG和M.smegmatismc2155中表达Sj26GST抗原,所表达的天然重组Sj26GST(rSj26GST)为可溶性蛋白,在SDS-PAGE上分子量为26kD处可见明显的表达蛋白带.其表达量分别占BCG和M.smegmatis菌体总蛋白的15%和10%.可见,Sj26GST基因能在BCG中高效表达.  相似文献   

11.
鸡球虫Etp28基因的克隆及其在杆状病毒系统中的表达   总被引:10,自引:0,他引:10  
本文克隆了鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeriatenela)广东株子孢子折光体抗原Etp28基因,与国外发表的柔嫩艾美耳球虫MerckLS18株比较,仅在第492位有一个属于同义突变的碱基变异(C→T)。随后在修饰的苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV-OCC-)载体系统中得到了高效表达,Western印迹结果表明表达产物为53kD的融合蛋白GST-6×His-Etp28,其产物占细胞总蛋白量的21.3%,在草地夜蛾培养细胞(Sf9)中的得量为0.42mg/L×106个细胞。免疫保护效果实验初步结果表明该重组抗原能够提供一定的抗球虫保护作用。  相似文献   

12.
不同生态条件下苹果叶面附生物种群演替的初步研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
不同生态条件下苹果叶面附生物种群演替的初步研究陈功友,郑铁民,任国兰,时向阳(河南农业大学,郑州450002)郭艳春,宋爱仙(河南省植保总站,郑州450002)(郑州市园艺场,450002)SuccessionofEpiphyticMicrofloraPopulationsonApplePhylloplaneunderDiffcrentEcologicalCondi-tions¥.ChenGongyou,ZhengTiemin,RenGuolan,ShiXiangyang(Henan,AgriculturalUniuersity,Zhengzhou450002),GuoYanchun(HenanGeneralStationofplantprotection,Zhengzhou450002),SongAixian(HorliculturalFarmofZhengzhouMunicipality,Zhengzhou450002).(ChineseJournalofEcology,1993,12(4):7-13.Seasonalvariationsofepiphyticmicrofloraonapplephyll  相似文献   

13.
贵州省西北部“百里杜鹃林”的土壤生态条件   总被引:6,自引:0,他引:6  
贵州省西北部“百里杜鹃林”的土壤生态条件庞纯焘,宋铭荷,田光普(贵州教育学院,贵阳550003)(贵州农学院,贵阳550006)SoilEcologicalConditionsinthe"HundredLi(500m)AzaleaForcst"inNorthwestGuizhouProvince¥PangChuntao;SongMinghe(GuizhouEducationCollege,Guiyang550003),TianGuangpu(GuizhouAgriculturalCollege,Guiyang550006).ChineseJournalofEcology,1993,12(1):49-52。Thereisavastareaofazalea(Rhododendronspp.)forestinNorthwestGuizhouProvince,Atfloweringseasoninsummer,itbecomesaregionoftouristattraction.Thisregionissofascinatingthatpeoplecallit"HundredLi(500m)AzaleaFores  相似文献   

14.
HcNPV半胱氨酸蛋白酶,几丁质酶基因失活分析   总被引:2,自引:1,他引:1  
将含有美国白蛾核型多角体病毒(Hyphantria cumea nuclear polyhedrosis virus,HcNPV)半胱氨酸蛋白酶基因(CP)的自然和几丁质酶基因(ChiA)的片段克隆进PCRⅡ,构建了转移载体pHcCVdel;将含有HcNPV多角体蛋白全基因(polh)序列的片段插入到pHcCVdel的EcoRI位点,得到重组转移载体pHcCVpolh。通过重组转移载体与含有家蚕促  相似文献   

15.
利用COS7细胞暂时表达系统,研究转译起始序列对EPO-cDNA表达的影响。通过DNA重组技术,构建了原EPO-cDNA表达载体pCSV-EPO(1),其转译起始序列为5'AATTCATGG3'。同时通过定点突变技术,将起始序列改变成5'CCACCATGG3',而构建了另一表达载体PCSV-EPO(2)。后经序列分析证明无误后和前均通过DEAE-dextran法转染COS7细胞上清,测定结果为  相似文献   

16.
石晓宏  杭长寿 《病毒学报》1995,11(2):124-130
应用杆状病毒表达载体成功地表达了汉滩病毒76-118株(HTNV)核壳蛋白,将HTNVS基因插入杆状病毒转染质粒pAcYMIB的多角体基因启动子下游附近,与经Bsu361酶切线性化的杆状病毒(AcVEPA)DNA共同转染S19细胞,经空斑筛选获得了高效表达NP的重组杆状病毒(AcVHanS)。经SDS-PAGE和Western blot证实,表达产物与HTNV毒粒NP分子量均为50KD左右,紫外扫  相似文献   

17.
小分子G蛋白Ras超家庭成员都是通过与鸟苷酸交换因子(guanine nucleotide exchange factors,GEFs)结合而被活化,GEFs能增加这类小分子G蛋白对GTP的摄取,并使之形成有活性的GTP结合构象。Rap1是Ras样的小分子G蛋白。迄今为止,已发现G3G、CalDAG-GEF1、Epac、cAM-GEF1、cAMP-GEFⅡ、nRapGEP、GFR可特异的活化Rap  相似文献   

18.
利用基因工程重组技术获得了绿色荧光蛋白(gfp)基因与HCV核心蛋白基因的嵌合体,并在大肠杆菌中高效表达了48kDa的融合蛋白,经Dot-ELISA和Western blot免疫活性分析证实,融合蛋白仍具有core抗原的三个免疫活性部位,同时用荧光显微镜观察并用荧光光度计测定了大肠直菌表达的融合蛋白的荧光光谱,结果证实,我们在大肠杆菌中表达的GFP-core融合蛋白既能发射易于检测的绿色荧光,又具  相似文献   

19.
彭天剑  郭礼和 《遗传学报》1994,21(2):155-160
本研究用缺口以链法对肠杆菌青霉素G酰化酶(PGA)基因Ser177进行寡核苷酸定点突变。通过NIPAB(2-硝基-5-苯乙酰胺苯甲酸)试纸法筛选和测序鉴定,获得突变体Cys177,Gly177,Arg177和Asn177。它们的PGA活性均已丧失。酶蛋白电泳分析表明突变体蛋白在体内正常表达。推测PGA Ser177秀可能位于酶底物结合中心,是酶活性所必需,不能被置换。  相似文献   

20.
记忆增强肽促进大鼠海马内CREB磷酸化   总被引:3,自引:0,他引:3  
五肽ZNC(CPR(pBGlu-Asn-Cyt-Pro-Arg-OH)是精氨酸加压素(AVP)在脑内的天然酶解产物,具有促进学习记忆的中枢效应。为了进一步阐明其作用的分子机制,以整体大鼠海马及离体大鼠海马切片为对象,研究了ZNC(C)PR对cAMP反应元件结合蛋白(CREB)磷酸化的作用。发现ZNC(C)PR及其类似物NLPR能诱导大鼠海马内CREB磷酸2化,该作用能被其拮抗剂ZDC(C)PR、G  相似文献   

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