犬瘟热病毒反转录—聚合酶链反应诊断方法的建立和初步应用

根据Ｂａｒｒｅｔｔ报道的犬瘟热病毒Ｏｎｄｅｒｓｔｅｐｏｏｒｔ弱毒株的融合蛋白基因序列,设计合成了一对能扩增３２４ｂｐ基因片段的引物。将异硫氰酸胍－酚－仿一步法提取得到的细胞总ＲＮＡ进行反转录,以此产物为模板进行ＰＣＲ扩增,并对ＰＣＲ扩增条件进行了优化。经鉴定,以此对引物进行的ＰＣＲ扩增,得到了与设计片段大小和酶切位点相同的产物,且不扩增犬细小病毒、犬腺病毒和狂犬病病毒犬的三种病原的核酸,这表明此方     

HCVRNA反转录PCR技术的建立及对血液样品的检测

实验建立了ＨＣＶ　ＲＮＡ的反转录和套式ＰＣＲ技术,扩增出２３２ｂｐ的核酸片段,经酶切电泳图谱和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定,来自ＨＣＶ基因５,端非编码区。实验从抗ＨＣＶ阳性的１８例血浆样品和１９例血清样品中分别检出７例和１３例ＨＣＶＲＮＡ阳性。     

特异切割马铃薯卷叶病毒复制酶基因负链的核酶研究

根据锤头状核酶的作用模式,设计、合成并克隆了特异性切割马铃薯地病毒中国分离株（ＰＬＲＶ－Ｃｈ）复制酶基因负链ＲＮＡ的核酶序列,以体外转录的ＰＬＲＶ－Ｃｈ复制酶基因负链ＲＮＡ作为底物,与转录的核酶ＲＮＡ共同保温,以检测核酶对底和的体外切割作用。实验结果表明,核酸疼 ＲＮＡ对ＰＬＲＶ－Ｃｈ复制酶基因负锭ＲＮＡ具有特异切割作用。     

抗水稻条纹叶枯病毒核酶的设计,克隆及体外活性测定

为探索控制水稻条纹叶枯病毒（Ｒｉｃｅｓｔｒｉｐｅｖｉｒｕｓ,ＲＳＶ）设计合成了特异切割该病毒ＲＮＡ保守区及编码病害特异性蛋白（ＤｉｓｅａｓｅＳｐｅｃｉｆｉｃＰｒｏｔｅｉｎ,ＤＳＰ）基因的核酶,核酶基因的长度均为４０个碱基,用化学合成方法合成其正链及与其３＇－末端互补的１５个碱基引物,用ＴａｇＤＮＡ多聚酶合成其互补链。双链ＤＮＡ直接插入克隆载体ＰＧＥＭ３ｚｆ（＋）的Ｓｍａｌ位点。序列测定表明,克隆得到的核酶序列与设计的核酶序列完全一致。经ＳＰ６ＲＮＡ多聚酶体外转录得到核酶ＲＮＡ。当核酶ＲＮＡ与以同样方法转录得到的靶基因ＲＮＡ混合反应,可得到预期结果相同的切割片段,表明两种核酶在体外均具有特异性切割活性。     

对烟草花叶病毒外壳蛋白亚基因组RNA生成机制的进一步研究

用原生质体瞬间表达的方法证明,在烟草细胞中ＴＭＶ外壳蛋白亚基因组ＲＮＡ的生成,不是通过核酸酶在基因组ＲＮＡ上直接切割,也不是通过在生成负链ＲＮＡ时预成性终止,再从这种负链ＲＮＡ终止部位起始产生的,ＴＭＶ外壳蛋白亚基因组ＲＮＡ,是ＴＭＶ识别利用负链ＲＮＡ中间的亚基因组启动子后产生的,这个启动子位于外壳蛋白读码框５′端２５６碱基范围之内,但大于４８个碱基,虽然ＴＭＶ能利用单链的负链ＲＮＡ上的亚基因组启     

黄病毒科病毒编码的非结构蛋白及其功能

黄病毒科病毒是一类具有囊膜的ＲＮＡ病毒,现包括黄病毒、瘟病毒及类丙型肝炎病毒三个属。该科的许多病毒均是引起人和动物一些严重疾病的病原,其基因组为一单股正链的ＲＮＡ分子,分别编码病毒的结构蛋白和非结构蛋白,其中非结构蛋白对于病毒的复制及病毒与其宿主细胞的相互作用起着极为重要的作用。本文综述了该科病毒编码的非结构蛋白及其主要功能,旨在深入了解和研究该科病毒的复制规律,以有助于由该科病毒引起的许多严重病毒病的防治     

RNA病毒RNA聚合酶的研究进展

自然界仅有ＲＮＡ病毒以ＲＮＡ作为基因载体。依赖于ＲＮＡ的ＲＮＡ聚合酶在这种病毒的增殖复制期起到了非常重要的作用。它一方面以病毒ＲＮＡ为模板复制子代病毒的基因,另一方面也将病毒增殖期间需要的蛋白质和酶类的基因转录成为ｍＲＮＡ,也就是说它担负了复制酶和转...     

马铃薯卷叶病毒56kD蛋白基因及3‘端非编码区克隆和序列分析

根据已报道的马铃薯卷叶病毒基因组序列,设计合成一对特异性引物,以马铃薯卷叶病毒中国分离株的ＲＮＡ为模板,反转录合成了ｃＤＮＡ第一条链,经ＰＣＲ扩增后克隆于ｐＵＣ１９质粒中,进一步用ＰＣＲ鉴定,限制酶切分析用序列分析。结果表明,ＰＬＲＶ－Ｃｈ５６ｋＤ蛋白基因由１５２７个核苷酸组成,编码５０８个氨基酸,３‘端非编码区由１４１个核苷酸组成,与国外报道的苏格兰ＰＬＲＶ－Ｓ,荷兰ＰＬＲＶ－Ｎ,加拿大ＰＬＲＶ     

植物抗病毒基因工程育种策略及其进展

简要讨论了近年来植物抗病毒基因工程育种策略。这些策略包括利用植物自身的抗病毒基因;利用病毒宙蛋白基因、动物蛋白基因、复制酶基因、卫星ＲＮＡ、反义链ＲＮＡ和缺陷干扰型ＲＮＡ;利用抗体基因、核酶和干扰素。并以各种策略的抗病毒机理及其在农业生产上的应用前景进行了讨论。     

6株A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1（1D）基因的核苷酸序列分析

早期收集保藏的６株Ａ型口蹄疫病毒（ＦＤＭＶ）（ＡＬ１－ＡＬ６）,适应ＢＨＫ２１单层细胞后,提取６株细胞增殖病毒的ＲＮＡ。用一对ＦＭＤＶ通用引物经反转录（ＲＴ）－ＰＣＲ法扩增了约５００ｂｐ的期望的ＤＮＡ片段。克隆目的的基因后,采用双脱氧ＤＮＡ链末端终止法测得了６株病毒的ＶＰ１基因２１０－６３９核苷酸序列。分析表明,３株病毒缺失３个核苷酸,从推导的氨基酸序列比较,确定缺失的３个核苷酸正好是一个密码子,     

甜菜坏死黄脉病毒内蒙分离物RNA3序列分析及编码25kD蛋白基因在大 …

以甜菜坏死黄脉病毒（ＢＮＹＶＶ）内蒙分离物的总ＲＮＡ为模板,通过反转录－－ＰＣＲ扩增获得ＢＮＹＶＶＲＮＡ３全长ｃＤＮＡ。将其克隆到ＰＥＭ－７Ｚｆ上,得到重组质粒ｐＧＢＹ５６。序列分析结果表明,内蒙分离物ＲＮＡ３基因组全长 １７７５ｎｔ     

甜菜坏死黄脉病毒RNA4 cDNA克隆,序列分析及其编码蛋白基因在大肠…

以甜菜坏死黄脉病毒（ＢＮＹＶＶ）内蒙分离物（ＮＭ）ＲＮＡ为模板,通过反转录和ＰＣＲ扩增得到了ＢＮＹＶＶ ＲＮＡ４基因组的ｃＤＮＡ克隆ｐＧＢＦ６。序列分析结果表明,ｐＧＢＦ６含有全长ＲＮＡ４ ｃＤＮＡ插入片段,大小为１４６５个核苷酸,含有一个８４９个核苷酸的开放阅读框架,编码产生由２８２个氨基酸组成的分子量为３１ｋＤａ的蛋白。与法国Ｆ２分离物ＲＮＡ４相比,其核苷酸序列和由此推导的氨基酸序列同源性分别     

一步多重PCR同时检测甲型肝炎和脊髓灰质炎病毒研究

建立的一步ＰＣＲ方法即反转录和ＰＣＲ在同一管中进行,同时检测甲型肝炎和脊髓灰质炎病毒病毒ＲＮＡ。实验中对不同的反转录温度以及一步多重ＰＣＲ的特异性和灵敏度进行了探讨。结果表明：４２℃、５０℃反转录时ｐｏｌｉｏ有非特异性条带出现,６０℃反转录特异性较好,而ＨＡＶ在三种不同的反转录温度下均得到牧场划性较好的条带;应用一步ＰＣＲ同时检测两种病毒与检测单一病毒的灵敏度基本一致,但在同等反应条件下后者的反应效率高于前者,特别是在检测ＨＡＶ时。     

小双节RNA病毒中国株基因组第二节段的序列测定及分析

１９９７年从河北省一起成人腹泻暴发病人粪便中首次分离到小双节ＲＮＡ病毒（ｐｉｃｏｂｉｒｎａｖｉｒｕｓ,ＰＢＶ）中国株。为研究该病毒复制必需的依赖ＲＮＡ的ＲＮＡ多聚酶（ＲｄＲｐ）活性机理,采用改进的单引物扩增法克隆和测序了病毒基因组第二节段。结果表明：第二节段全长１６９６个核苷酸,只有一个ＯＲＦ,占全长的９３．９％,编码５３０个氨基酸残基的蛋白,５’－ＮＴＲ ＡＴ丰富（７５．４％）,可能是本位调控元     

反转录病毒基因转移载体

80年代初期,以反转录病毒作载体进行基因转移的技术迅速发展起来。以反转录病毒作载体进行基因转移具有以下几个方面的特点:宿主细胞范围广;病毒感染滴度高;病毒感染宿主细胞后,细胞不发生病变,可以稳定地表达外源基因;基因转移效率高,病毒基因往往以低拷贝整合,易于外源基因表达的研究;反转录病毒较小,易于操作,容纳的外源基因较大(10kb左右);基因转移后不发生重排;经特殊构建的反转录病毒载体,不易产生感染性病毒粒子,比较安全。为了构建一个基因转移效率高、宿主范围广、安全的反转录病毒基因转     

乳头瘤病毒E2蛋白的分子生物学研究进展

乳头瘤病毒Ｅ２蛋白是一种多功能蛋白,在乳头瘤病毒的生活史中处于核心的枢纽地位。Ｅ２蛋白可在ＤＮＡ复制水平,ＲＮＡ转录水平上对基因表达进行调控,Ｅ２蛋白可启动,凶制乳头瘤病毒早期启动子的表达。研究Ｅ２蛋白的功能有助于揭开乳头瘤病毒的生活史及其致病的分子机理。     

甜菜坏死黄脉病毒内蒙分离物自然缺失突变体缺失区域的定位分析

以甜菜坏死黄脉病毒内蒙分离物（ＢＮＹＶＶ ＮＭ）总ＲＮＡ为模板,经ＲＴ－ＰＣＲ扩增,分别获得ＲＮＡ２、ＲＮＡ３和ＲＮＡ４自然缺失突变体ｃＤＮＡ克隆。序列分析结果表明,ＲＮＡ２自然缺失突变体在７５ｋＤ通读蛋白编码区Ｃ端缺失３４８个核苷酸（缺失位置ｎｔ１４８８￣ｎｔ１８３５）。ＲＮＡ３在其２５ｋＤ蛋白编码区内缺失３６０个核苷酸（缺失位置ｎｔ７２９￣ｎｔ１０８８）。ＲＮＡ４的自然缺失区域位于３１ｋＤ蛋白     

双链RNA技术在植物病毒研究中的应用

含ＲＮＡ基因组的植物病毒在复制时会产生双链ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）。本文介绍了用ＣＦ－－１１纤维素粉提取ｄｓＲＮＡ的步骤,并列举了ｄｓＲＮＡ在植物病毒研究中的应用,其主要应用有（１）用于检测植物病毒;（２）用于病毒株系分化;（３）用于病毒卫星ＲＮＡ及亚基因组ＲＮＡ研究;（４）用于侵染性测定及病毒基因组功能研究等。     

牛病毒性腹泻病毒基因组cDNA文库的构建

以牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）┥ｎＬ株的基因组ＲＮＡ为模板,经逆向转录酶作用,合成第一链ｃＤＮＡ,再以ＲＮａｄｓｅ／Ｈ与ＤＮＡ聚合酶Ｉ联合作用合成ｄｓｃＤＮＡ,并以ｄＣ同聚物尾化。ｐＵＣ８ＤＮＡ在Ｐｓｔ Ｉ酶解后,以ｄＧ同聚物尾化,两者退火构成重组质粒,转化到Ｅ．ｃｏｌｉ ＪＭ１０１受体菌中,另以γ－＾３２Ｐ－ＡＴＰ标记ＢＶＤＶ ＲＮＡ制备探针,通过菌落原位杂交筛选重组子。酶切分配表明重组质粒插入     

马铃薯卷叶病毒基因间隔区的克隆及序列分析

根据已报道的马铃薯卷叶病毒基因组序列．设计合成一对特异性引物,以马铃薯卷叶病毒中国分离株（ＰＬＲＶ－Ｃｈ）的ＲＮＡ为模板,反转录合成ｃＤＮＡ第一条链,经ＰＣＲ扩增后克隆于ｐＵＣ１９质粒中,进一步用ＰＣＲ鉴定、限制酶切分析和序列分析,结果表明：ＰＬＲＶ－Ｃｈ基因间隔区由１９７个核苷酸组成,与国外报道的荷兰ＰＬＲＶ－Ｎ加拿大ＰＬＲＶ－Ｃ,澳大利亚ＰＬＲＶ－Ａ,苏格兰ＰＬＲＶ－Ｓ各株系核苷酸序列具有很高的同源性,同源率依次为９９％、９８％、９３％、９８％。