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1.
克隆了能在植物中表达白喉毒素A链基因(DTA)负链RNA的基因TCDTAN,这个基因的读码框5′端上游带有TMV外壳蛋白基因5′端上游631个碱基,它的DNA和TMV-RNA共转化烟草原生质体后,能抑制同时导入原生持体的堪因的表达,CAT基因表达的抑制,是TCDTAN基因产生白喉毒素A链蛋白的结果,TCDTNA基因上TMV外壳蛋白基因5′端上游片段,是产生白喉毒素A链mRNA的必要条件,只有用多量 相似文献
2.
一个双价锤头型核酶在体外对两种不同植物病毒RNA的专一切割作用 总被引:1,自引:0,他引:1
根据锤头核酶模型,设计合成了一个以黄瓜花叶病毒(CMV)外壳蛋白(CP)亚基因组RNA为底物的锤头型核酶(RZC),在证明它能有效切割该底物后,再将这个核酶与一个能专一性切割烟草花叶病毒(TMV)移动蛋白(MP)亚基因组RNA的锤头型核酶(RZ1)相互串联构成了一个双价核酶(RZ1C),体外结果表明,这个双价核酶能与相应的单价核酶RZ1和RZC一样专一而有效地切割CMV CP和TMV MP RNA 相似文献
3.
根据锤头核酶模型,设计合成了一个以黄瓜花叶病毒(CMV) 外壳蛋白(CP) 亚基因组RNA 为底物的锤头型核酶(RZC) 。在证明它能有效切割该底物后,再将这个核酶与一个能专一性切割烟草花叶病毒(TMV) 移动蛋白( MP) 亚基因组RNA 的锤头型核酶(RZ1) 相互串联构成了一个双价核酶(RZ1C) 。体外结果表明,这个双价核酶能与相应的单价核酶RZ1 和RZC 一样专一而有效地切割CMVCP和TMV MPRNA。 相似文献
4.
为了验证转基因烟草中表达的外壳蛋白(CP)能够重新包被侵入的烟草花叶病毒(TMV)的假设,利用抗原表位标记的方法观察CP亚单位在病毒5′端的交换。通过PCR 方法将来源于鼠肝炎病毒(MHV) S蛋白的两个小肽段(11 a.a.和15 a.a.)的DNA序列分别插入TMV-U1 CP基因邻近3′端的两个位点,并构建了带有外源序列的TMV 侵染克隆V9 (11 a.a.)和E15 (15 a.a.)。通过体外转录反应,得到V9 RNA 及E15 RNA。突变病毒RNA 侵染烟草(Nicotiana tabacum )后表现不同特性。V9 和E15 侵染XanthiNN烟草后同野生型TMV一样产生枯斑。但是,当它们侵染Xanthinn 烟草时,V9 产生同侵染XanthiNN 烟草相同的枯斑,而E15的特性同TMV-U1几乎完全相同,能对Xanthinn 烟草进行系统侵染并在叶片中聚集大量的带有外源片段的外壳蛋白,而且病毒的结构极其稳定。V9 和E15 特性的差异可能是由于外源片段在外壳蛋白中存在位置的不同影响了外壳蛋白的结构所致 相似文献
5.
王钧 《中国生物工程杂志》1990,10(6):1-5
本文提出利用抑制植物蛋白质合成的毒蛋白基因读码框和植物病毒亚基因组启动子组成嵌合基因,预先在植物中表达负链RNA,在病毒侵染细胞中变为正链毒蛋白RNA,产生毒蛋白,迅速中止该细胞蛋白质合成,从而达到完全控制植物病毒病的植物基因工程工程设想。白喉毒素A链基因读码框是一种对多种植物有用的适合于本设想的毒蛋白基因读码框。烟草中负链毒蛋白RNA不会自动变为正链RNA。TMV外壳蛋白亚基因组是按BMV RNA_4的方式生成;它的启动子可以用作TMV的启动开关,使植物细胞中白喉毒素A链负链RNA特异地转变为毒蛋白mRNA。 相似文献
6.
利用PCR技术行反义寡核苷酸体外抗丁型肝炎病毒基因组RNA中核酶的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
设计一对PCR引物,其中上游引物的5’端除目的基因外,还加T7RNA聚合酶启动子序列,以质粒(pSVLD3)为模板,通过PCR扩增出带有T7RNA聚合酶启动子序列的139bp的cDNA片段,它含有丁型肝炎病毒(HDV)基因组RNA中核酶(Ribozyme)区的cDNA该核酶具有自身裂解功能,经测序发现该cDNA有2个碱基变异,以此PCR产物为模板,通过T7RNA聚合酶,转录出核酶的前体,并观察到其 相似文献
7.
中国大麦黄花叶病毒分离物的分子变异 总被引:4,自引:0,他引:4
13个供试的中国和英国大麦黄花叶病毒(BaYMV)分离物,经RNA1和RNA2全基因组不同区域DNA片段背地里单构象多态分析(SSCP),外壳蛋白基因和RNA2 70kD基因5端705碱基序列分析,以及此7-5碱基DNA片段限制性内切酶图谱分析结果,它们的RNA1和RNA2彼此无一相同,其中RNA2变异比RNA1更大。由于变异十分复杂,且没有规律性,因而当前通用的分子生物学技术尚不能简单地BaYM 相似文献
8.
金海翎 《Acta biochimica et biophysica Sinica》1996,28(4):358-366
根据对TMV高效复制和基因表达的顺式作用元件的分析,在体外重组包装了2个缺失型TMV粒子:TMVRP和TMVCP。前者缺失了TMV外壳蛋白CP基因的3′端及后序区域,后者缺失了大部分复制酶基因。把两者分别或共同电击感染烟草原生质体:1.用CP抗体进行免疫印渍检测,单独感染的原生质体内的CP在16小时内无增加,而在共同感染的原生质体内,CP在感染2小时后就开始明显增加。2.用RT一两次PCR法专一地检测新生负链RNA的合成情况,在单独感染的原生质体内没有检测到,但在混合感染的原生质体内在感染1小时后就检测到CP基因特异的负链RNA的形成,并用Southern杂交得到进一步验证。这些结果表明,复制酶缺失型TMVCP内的CP基因不能表达,但可以在TMVRP存在时,通过其所表达的复制酶互补作用得到复制从而有效表达. 相似文献
9.
以丙肝病毒 (HCV)为切入点 ,建立一套通过基因操作技术在体外细胞培养系统中生产高滴度反转录病毒颗粒的大规模病毒培养技术平台 ,并将该技术应用于其它难以体外大规模培养的反转录病毒的生产。该体系包括一株插入T7RNA聚合酶基因的重组痘苗病毒vTF 3和 2个重组质粒 ,质粒PT7HCV在上游T7启动子和T7终止子之间插入HCV基因组cDNA ,可通过T7RNA聚合酶指导转录产生 9 5kb的HCVRNA ;另一质粒P... 相似文献
10.
以采自河南的真菌传小麦花叶病毒(FWMV-C)为材料,抽提病毒RNA,合成互补DNA(cDNA)。对杂交筛选所得cDNA克隆进行亚克隆及序列分析,结果表明,亚克隆pGSI含有一个长度为891个核苷酸的不完整开放阅读框架(ORF)和长度为258个核苷酸的3'末端非编码区(NTR),并带有Poly(A)尾序。此段序列与大麦黄花叶病毒(BaYMV)及法国报道的一种小麦梭条花叶病毒(WSSMV-F)的RNA-13'末端分别具有67.6%和69.9%的同源性。由所测序列编码区(1-891nt)可推导产生296个氢基酸,并与WSSMV-F及BaYMV外壳蛋白氨基酸序列分别具有75.9%和71%的同源性。此结果表明,FWMV-C为另外一种不同于WSSMV-F的大麦黄花叶病毒组(Baymovirus)病毒,所测基因组片段应为RNA-13'末端序列,其中可能包括了病毒全长外壳蛋白编码区域。 相似文献
11.
12.
核酸酶保护试验在黄瓜花叶病毒株系鉴定中的初步应用 总被引:3,自引:0,他引:3
采用黄瓜花叶病毒(CMV)亚组Ⅰ株系Fny-CMVRNA_2的1209~1626核苷酸片段和亚组Ⅱ株系Ls-CMVRNA_2的2002~2433核苷酸片段的cDNA克隆,体外转录,同时掺入 ̄(32)P获得负链RNA探针,与纯化的番茄和甜椒上的CMV中国分离物的RNA杂交,结果表明:CMV番茄和甜椒中国分离物与Fny-CMV的核苷酸有高度同源性,隶属于Fny-CMV为代表的亚组Ⅰ株系。并利用K-CMV株系(亚组Ⅰ,源于中国)的RNA_2全长cDNA克隆的两个EcoRI位点间的核苷酸序列(1657~2125nt)作探针,与上述两种CMV中国分离物的RNA杂交,进一步比较分析了这两个分离物和K-CMV株系的关系。讨论了核酸酶保护法在CMV株系鉴定中的作用。 相似文献
13.
应用电激法和聚乙二醇法以及脂质体协调的上述两种方法对烟草和青菜原生质体进行烟草花叶病毒TMV-RNA的导入试验,并应用酶标免疫技术、电镜观察、半叶接种和十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)等方法对在原生质体中增殖的TMV进行鉴定。实验证明,虽然电激法和聚乙二醇法均能有效地将外源病毒基因导入植物原生质体,但经阳离子脂质体处理后的TMV-RNA,其转染效率可提高10倍以上。TMV在原生质体转染48小时后达到复制高峰。SDS-PAGE显示,原生质体转染48小时后,除出现TMV外壳蛋白明显条带外,尚有1条分子量在50~55kd蛋白质条带也明显增强。这些研究结果对植物遗传工程和抗病毒基因有种研究提供重要的数据和基础。 相似文献
14.
大蒜花叶病毒外壳蛋白基因cDNA的克隆和序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
我们从自然发病的大蒜中分离得到了大蒜花叶病毒。以其基因组RNA为模板合成了3'末端部分cDNA。从中选出一批插入片段在2.0kb以上的重组克隆,经Northern点杂交分析证实了所选克隆与基因组RNA同源。通过对若干个克隆的插入片段两端部分序列的测定,选出一个克隆pGM495,其插入片段的长度约为2.4kb,3′末端存有一个Poly(A)结构,它应包含了编码该病毒外壳蛋白全部序列。序列测定的结果表明,这个cDNA片段全长为2379bp,其中含有与酶切图谱分析结果相符的EeoRI、PstI及BamHI酶切位点。第一个终止密码子TAA与3′g末端相距264bp,我们根据碱基序列推定的氨基酸序列与其它已发表的Potyvirus的外壳蛋白氨基酸序列以及外壳蛋白翻译后加工的蛋白酶专一切点相比较后推测,编码该病毒外壳蛋白序列可能起始于3′末端上游的1170bp处,共编码302个氨基酸,其分子量为36kD,略大于SDS-PAGE所测定的33kD,非编码区域长264bp,富含AT,并有多个终止密码子的存在。趾3′末端32~27bp处有一个AATAA序列。 相似文献
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Sasaki等在ProcNatlAcadSciUSA 2 0 0 0年第 4期上报道了一种不依赖甲硫氨酸的翻译起始方式[1] 。PSIV (Plautiastaliintestinevirus)是一种昆虫RNA病毒 ,属蟋蟀麻痹样病毒组 (Cricketparalysis likeviruses) ,为正链RNA病毒。属于该组的还有DCV、RhPV、HiPV等。该组病毒的理化性质与哺乳动物的小RNA病毒 (picornavirus)相似 ,但基因图 1 (A)PSIV基因组结构 ;(B)预测的外壳蛋白编码区上游的茎环结构组织不同。… 相似文献
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T7噬菌体RNA聚合酶显著的特点是只识别其自身DNA序列中特定的启动子[1] ;而T7噬菌体启动子属于组成型的启动子 ,又只能被相应的T7噬菌体的RNA聚合酶 (约 10 0kD的单链蛋白质 )所识别 ,并且被T7RNA聚合酶所启始的转录非常活跃[2 ,3] ,宿主细胞的RNA聚合酶所进行的转录根本无法同其竞争 ,这样宿主细胞中几乎所有的转录都被T7RNA聚合酶所操纵。另外 ,T7RNA聚合酶几乎能完整地转录在T7启动子下游的所有DNA序列。基于这些优点 ,1986年Studier和Moffat建立了一套新的原核表达系统———T7RNA聚… 相似文献
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以甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)内蒙分离物(NM)RNA为模板,通过反转录和PCR扩增得到了BNYVV RNA4基因组的cDNA克隆pGBF6。序列分析结果表明,pGBF6含有全长RNA4 cDNA插入片段,大小为1465个核苷酸,含有一个849个核苷酸的开放阅读框架,编码产生由282个氨基酸组成的分子量为31kDa的蛋白。与法国F2分离物RNA4相比,其核苷酸序列和由此推导的氨基酸序列同源性分别 相似文献
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Ω序列和3‘poly(dA)长度与基因表达效率的关系 总被引:3,自引:0,他引:3
基因表达效率是由基因的转录水平和翻译水平决定的。提高基因的表达效率可以是在转录水平上应用转录效率高的启动子(如35S启动子)增强转录,也可以是在翻译水平上应用病毒的引导序列和3′poly(A)增强翻译。来自烟草花叶病毒(TMV)RNA5′非翻译区的引... 相似文献
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烟草花叶病毒(普通株中国分离物)及其弱毒苗—N14(番茄株)组织 … 总被引:2,自引:0,他引:2
用双脱氧未端经终止法对侵染性烟草共现毒普通株中国分离物(TMV-virlgar,Chinese lsoblate,TMV-Cv)和番茄株弱毒轩TMV-N14(Attenuated TMV vaccine strain)基因组cDNAs的核苷酸全序列进行了测定,并分析和比较了其基因组的结构和特征。结果表明:普通株基因组(Genbank接收号:AF165190)为6395个核苷酸:4个功能性开放阅读框 相似文献