番茄果实ACC合成酶的纯化

以伤诱导的番茄囊果皮为材料,改进了ＡＣＣ合成酶（ＥＣ４．４．１．１４）纯化方法。经改进的５步纯化后,ＡＣＣ合成酶被纯化７３００倍,比活性达到１１６８７０Ｕ／ｍｇ蛋白,回收率为７％．以较少的步骤得到了较高的纯化倍数。纯化的ＡＣＣ合成酶经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和银染检验为一条带,分子量为５０ｋＤ,等电点为ｐＨ６．５。     

菜豆幼苗EPSP合成酶的分离纯化和它的部分性质

利用硫酸铵分级沉淀,Ｓｅｐｈｅｄｅｘ Ｇ－５０凝胶柱层析,ＦＰＬＣ Ｍｏｎｏ－Ｑ和磷酸纤维素离子层析法从菜豆幼苗中分离提纯了ＥＰＳＰ合成酶。该酶被纯化２９６１．６倍,比活性达到６２１９．４ｎｍｏｌｍｇ＾－１蛋白ｍｉｎ＾－１。该酶分子量经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测为５１ｋＤ,等电点为ｐＨ５．７,酶促反应最适ｐＨ７．５,最适温度４５℃。６．２μｍｏｌ／Ｌ的除草剂草甘膦能抑制ＥＰＳＰ合成酶活性的５０％。     

大熊猫乳酸脱氢酶同工酶H_4的分离纯化和某些性质的研究

采用８－（６－氨己基）－氨基－５＇－ＡＭＰＳｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析法和ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换层析法从大熊猫心肌中分离纯化出了乳酸脱氢酶同工酶Ｈ４．纯化的大熊猫ＬＤＨ－Ｈ４,比活为４４５Ｕ／ｍｇ蛋白,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ,ＰＡＧＥ,等电聚焦电泳鉴定均为一条带,其亚基分子量为３６０００,等电点为５．４５．经测定大熊猫ＬＤＨ－Ｈ亚基Ｎ端被封闭,Ｃ端氨基酸残基经测定为Ｌｅｕ．氨基酸组成分析表明每个亚基含有５个Ｃｙｓ,９个Ｍｅｔ．     

大熊猫乳酸脱氢酶同工酶H4的分离纯化和某些性质的研究

采用８－（６－氨己基）－氨基－５－ＡＭＰＳｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层分析法和ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换层析法从大熊猫心肌中分离纯化出乳酸脱氢酶同工酶Ｈ４,纯化的大熊猫ＬＤＨ－Ｈ４,比活为４４５Ｕ／ｍｇ蛋白,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ,ＡＰＧＥ,等电聚焦电泳鉴定均为一条带,其亚基分了量为３６０００,等电点为５．４５。经测定大熊猫ＬＤＨ－Ｈ亚基Ｎ端被封闭,Ｃ端氨基酸残基经测定为Ｌｅｕ。氨基酸组成分析表明     

柑叶片蔗糖酶的分离纯化及其部分性质的研究

柑（Ｃｉｔｒｕｓｒｅｔｉｃｕｌａｔａ Ｂｌａｎｃｏ）幼叶中存在高活性的酸性蔗糖酶。经硫酸铵盐析、ＤＥＡＥ－琼脂糖离子交换层析、ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００ 凝胶层析纯化,活性回收率６．４％ ,纯化倍数１７９．２ 倍。纯化的酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单一蛋白带,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示１ 条蛋白带,其亚基分子量４０ ｋＤ。用ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００ 凝胶层析法测得分子量为８０ ｋＤ。推测该酶由两个相同亚基构成。以蔗糖为底物测定该酶的表观Ｋｍ 为１．６×１０－ ２ ｍ ｏｌ·Ｌ－ １,Ｖｍ ａｘ为１００ ｍ ｇ 还原糖·ｍ ｇ－ １蛋白质·ｈ－ １。最适ｐＨ ５．０,酸碱稳定区在ｐＨ ４．５—５．５ 之间。最适温度５５℃     

甲基单胞菌Methylomonassp.GYJ3中甲烷单加氧酶还原酶组分的…

Ｍｅｙｌｏｍｏｎａｓ ｓｐ．ＧＹＪ３菌的甲烷单加氧酶（ＭＭＯ）粗酶提取液经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－６Ｂ阴离子交换层析,Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００凝胶过滤层析和ＤＥＡＥ－ＴＳＫｇｅｌ ＨＰＬＣ分离纯化出ＭＭＯ还原酶组分,经ＨＰＬＣ分析,纯度大于９５％,纯化倍数为４．４,加入至ＭＭＯ羟基化酶和调节蛋白Ｂ的体系中表现比活为２２８ｎｍｏｌ环氧丙烷每分钟毫克蛋白,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳表明的酶由     

湖南尖吻蝮蛇毒两个出血毒素的纯化和理化性质

经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤,ＱＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０和ＣＭ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ－２５离子交换层析的步骤,从湖南产尖吻蝮蛇毒中纯化出两个出血毒素。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得分子量均为２３．５ｋＤ,ＩＥＦ－ＰＡＧＥ测得等电点分别为５．６和５．２,两者具有相似的氨基酸组成,其中酸性氨基酸分别占２３％和２４％。ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２的最小出血剂量（ＭＨＤ）分别为０．５μｇ和０．８μｇ。都具     

猪肝微粒体NADH—细胞色素b5还原酶的纯化及特性分析

采用硫酸铵分级分离,Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００凝胶过滤,ＤＥＡＥ－纤维素离子交换层析以及５＇－ＡＭＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和层析,从猪肝微粒体中纯化得到可溶性的ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶,提纯倍数为７５０－８００。总回收率为４０％左右。纯化的酶呈典型的黄素蛋白吸收光谱,Ａ２７３／Ａ４６０比值为５．８．在ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳板上呈单一的蛋白质区带,分子量为３２ｋｄ。ＮＡＤＨ和２,６－     

昆虫谷胱甘肽S-转移酶分离纯化的新方法

谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ,ＧＳＴ）是一类具有多种生理功能的同功酶．从蜡螟幼虫（Ｇａｌｅｒｉａｍｅｌｏｎｅｌａ）的提取液中分离纯化谷胱甘肽Ｓ－转移酶的基本方法如下：首先将冷冻的蜡螟幼虫在磷酸缓冲液中匀桨,经１００００ｇ和１０００００ｇ分级离心;取上清液通过ＱＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５离子交换柱层析除去部分色素和杂蛋白;然后采用谷胱甘肽－琼脂糖凝胶亲和层析（ＧＳＨ－ＱＴ４）,四溴酚酞二磺酸盐－琼脂糖凝胶亲和层析（ＢＳＰ－ＱＴ４）,铜离子－琼脂糖凝胶螯合层析（Ｃｕ２＋－ＱＴ４）及ＰＢＥ９４－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（ＰＢＥ９４）聚焦层析等层析技术进一步分离纯化．将上述方法获得的色谱峰以ＣＤＮＢ和ＤＣＮＢ为底物检测生物活性．具有生物活性部分的蛋白质,通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其分子量．实验结果表明,采用ＧＳＨ－ＱＴ４亲和层析法获得的活性峰,在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱上呈现出两条带,分子量为２４ｋＤ,２４．５ｋＤ左右;Ｃｕ２＋－ＱＴ６螯合层析法分离的活性峰,呈现出一条带,分子量为２４ｋＤ左右;ＰＢＥ９４－聚焦层析法分离获得三个活性峰：第一色谱峰,呈现出一条带,分子量为２３ｋＤ左右     

一种快速非同位素测定2',5'-寡聚腺苷酸合成酶活性的方法

介绍一种新的非同位素测定２′,５′－寡聚腺苷酸合成酶（２′,５′－ＯＡＳＥ）活性的方法．反应液经已糖激酶处理,点样于ＰＥＩ－纤维素薄层层析板上,经甲醇浸泡与预层析和在０．７５ｍｏｌ／ＬＫＨ２ＰＯ４（ｐＨ３．５）缓冲液中的层析可使ＡＤＰ和２′,５′－Ａｎ分离开,系统偏差和２′,５′－ＯＡＳＥ测活分析表明,本方法可用于粗酶液及部分纯化酶液的２′,５′－ＯＡＳＥ活性测定,并可用于临床生化分析     

番茄感染TMV诱导的β—1,3—葡聚糖酶的纯化和性质

番茄系统感染ＴＭＶ诱导叶胞外β－１,３－葡聚糖酶活性升高,番茄叶胞外提取液经冰冻干燥浓缩、－２０℃丙酮沉淀、ＣＭ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ－２５离子交换层析和ＰＢＥ９４聚焦层析纯化,获得ＰＡＧＥ和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ均一的β－１,３－葡聚糖酶,测得该酶的分子量为２２ｋＤ;以昆布多糖为底物,该酶的最适ｐＨ５．４,最适温度３０－４０℃;Ｋｍｔ Ｖｍａｘ值分别为５．６４ｍｇ／ｍｌ和０．３２８ｎｍｏｌ／ｓ。在感染     

尖吻蝮蛇酸性磷脂酶A2的纯化和初步晶体学

为进一步揭示影响血小板聚集活性的结构基础,纯化了江西尖吻蝮蛇（Ａｇｋｉｓｔｒａｄｕｎ ａｃｕｔｕｓ）酸性磷脂酶Ａ２。江西省吻蝮蛇蛇毒经ＣＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换柱层析,两步ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换柱层析以及Ｍｏｎｏ）ＧＦＰＬ离子交换柱层析,得到了ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳和等和集电泳均一的磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）,其分子量为１６．５ＫＤ,等电点为４．３,经测定,该酶具有抑制ＡＤＰ诱地     

花生根瘤菌类菌体氢酶的分离提纯及特性

花生根瘤菌类菌体经超声波破碎,ＴｒｉｔｏｎＸ－１００溶解,正已烷－硫酸铵处理后,再经ＤＥＡＥ－纤维素和Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ凝胶柱层析等纯化步骤,获得凝胶电泳纯的膜结合态氢酶,比活为７１．４μｍｏｌＨ２ｍｇ－１Ｐｒｏｔｍｉｎ－１,为类菌体吸Ｈ２活性的２１１倍。纯化的氢酶分子量为１１０ｋＤ。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后,呈现两个蛋白带,分子量分利为６５ｋＤ和３５ｋＤ。纯酶的Ｎｉ含量为０．６２ｍｏｌＮｉ／ｍｏｌ氢酶。在磷酸缓冲液中其活性的最适ｐＨ为６．５。ＤＣＩＰ、亚甲蓝、铁氰化钾、细胞色素Ｃ均可作为氢酶的电子受体,其中以ＤＣＩＰ为最适。     

一个高效表达,快速纯化大肠杆菌精氨酰—tRNA合成酶的 …

编码大肠杆菌精氨酸－ｔＲＮＡ合成酶的基因ａｒｇＳ被克隆到ｐＭＦＴ７－５载体上。将此质粒转化的大肠 力ＪＭ１０９（ＤＥ３）中,该转化子粗抽液的比活是宿主菌的２５００倍。通过ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－６Ｂ ＦａｓｔＦｌｏｗ和ＢｌｕｅＳｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－６Ｂ两步柱层析在一天内即可将精氨酰－ｔＲＮＡ合成酶纯化至电泳一条带,比活为３６０００ｕ／ｍｇ,总收率可达６９％。     

抗寒剂CR－4提高玉米幼苗抗寒力及质膜5＇－核苷酸酶冷稳定性的研究

抗寒剂ＣＲ－４提高玉米幼苗抗寒力及质膜５＇－核苷酸酶冷稳定性的研究孙龙华,简令成,王瑞萍（中国科学院植物研究所,北京１０００４４）ＳＴＵＤＩＥＳＯＦＣＯＬＤ－ＲＥＳＩＳＴＥＲＣＲ－４ＦＯＲＩＮＣＲＥＡＳＩＮＧＣＯＬＤＨＡＲＤＩＮＥＳＳＡＮＤＳＴＡＢＩ...     

蛇毒蛋白C激活物的初步研究

目的：研究蝮蛇毒蛋白Ｃ激活物的分离纯化与理化性质。方法：经ＤＥ５２－纤维素、ＣＭ－Ｓｐｈａｄｅｘ Ｃ－５０、Ｇ－７５柱层析,从安徽芜湖产蝮蛇（Ａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎ ｈａｌｙｓ）蛇毒中纯化一种均一的蛋白Ｃ激活物（ＰＣＡ）。结果：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定分子量约为１５５０００Ｄａ,ＩＥＦ－ＰＡＧＥ测定等电点为４．８。它能使人血浆的ＫＰＴＴ明显延长,显示出强烈的抗凝活性。通过中和试验与显色肽定量实验表明,     

光系统II核心天线CP43和CP47的分离纯化及光谱性质研究

采用ＤＥＡＥ－ＦｒａｃｔｏｇｅｌＴＳＫ６５０２阴离子交换树脂柱层析法从菠 菜中分离纯化了ＰＳＯⅡ核心天线复合物ＣＰ４３和ＣＰ４７,计算出每分子ＣＰ４３含１９－２０个Ｃｈｌａ和４－５个β－Ｃａｒ;     

甲基单胞菌Methylomonas sp.GYJ3中甲烷单加氧酶还原酶组分的纯化和性质

Ｍｅｔｙｌｏｍｏｎａｓｓｐ．ＧＹＪ３菌的甲烷单加氧酶（ＭＭＯ）粗酶提取液经ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ阴离子交换层析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤层析和ＤＥＡＥ－ＴＳＫｇｅｌＨＰＬＣ分离纯化出ＭＭＯ还原酶组分．经ＨＰＬＣ分析,纯度大于９５％,纯化倍数为４．４,加入至ＭＭＯ羟基化酶和调节蛋白Ｂ的体系中表现比活为２２８ｎｍｏｌ环氧丙烷每分钟毫克蛋白．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳表明还原酶由一种亚基组成,分子量４２ｋＤ．ＩＣＰ－ＡＥＳ测定还原酶的Ｆｅ含量为１．８３ｍｏｌＦｅ每ｍｏｌ蛋白．ＵＶ－Ｖｉｓ光谱表明还原酶除２８０ｎｍ蛋白质特征峰外在４６０ｎｍ有最大吸收峰,且Ａ２８０ｎｍ／Ａ４６０ｎｍ为２．５０,与其它黄素一铁硫蛋白相似,推测还原酶可能含一个ＦＡＤ辅基和Ｆｅ２Ｓ２中心．在厌氧条件下,还原酶能够和ＮＡＤＨ作用,ＵＶ－Ｖｉｓ光谱分析表明还原酶４６０ｎｍ处特征吸收峰消失,说明在ＭＭＯ催化过程中还原酶接受ＮＡＤＨ的电子．ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ阴离子交换层析分离出调节蛋白Ｂ,部分纯化的调节蛋白Ｂ的分子量大约在２０ｋＤ,它能够提高ＭＭＯ比活性４０倍,ＭＭＯ还原酶和调节蛋白Ｂ单独存在时不具有ＭＭＯ     

应用生态学报第5卷（1994）关键词索引

应用生态学报第５卷（１９９４）关键词索引ＣＨＩＮＥＳＥＪＯＵＲＮＡＬＯＦＡＰＰＬＩＥＤＥＣＯＬＯＧＹＶｏｌ．５（１９９４）ＫＥＹＷＯＲＤＩＮＤＥＸＡＡｃａｎｔｈｏｐａｎａｘｓｅｎｌｉｃｏｓｕｓｉｇｌｏｏ５（３）：２３７Ａｇｒｏｅｃｏｓｙｓｔｅｍ￥ｋ４...     

系统感染TMV的番茄叶胞外β-1,3-葡聚糖酶

系统感染ＴＭＶ （ｔｏｂａｃｃｏ ｍ ｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ）的番茄（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ Ｍｉｌｌ．）叶胞外蛋白提取液经冰冻干燥浓缩、－ ２０℃丙酮沉淀、ＣＭ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ－２５离子交换层析、ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－２５离子交换层析和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５凝胶层析纯化,获得ＰＡＧＥ均一的β－１,３－葡聚糖酶．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ证明,它包含分子量为３６ ｋＤ 和２７ ｋＤ的两个同工酶．以昆布多糖为底物,酶的最适ｐＨ 在４．８—５．２之间,在ｐＨ ４—８稳定;酶的最适温度在３０—４０℃之间,在４０℃保温１ｈ 后酶活性不变;Ｋｍ 值为９．２ ｍ ｇ／ｍ Ｌ．在系统感染ＴＭＶ 的番茄叶胞外蛋白提取液中,有分子量为２２ ｋＤ、２７ ｋＤ和３６ ｋＤ的３个β－１,３－葡聚糖酶同工酶