花生根瘤菌类菌体氢氧化体系的研究

花生根瘤菌类菌体含有吸H₂酶,以O₂或亚甲蓝为电子受体均表现吸H₂活性。类菌体还原减氧化的吸收差示光谱在424、500、520、550、560、585及595 nm处呈现吸收峰,表明细胞色素c、b、和o参与H₂的氧化过程。CN-明显影响520、550、560 nm处的吸收峰,意味着有些细胞色素c和b对CN^-敏感,在H₂代谢中充当末端氧化酶的作用。抗霉素A、HONO、CN^-、N₃^-和DBMIB均强烈抑制吸H₂活性,但鱼藤酮不抑制吸H₂活性。说明细胞色素b、c、a和泛配参与H₂氧化的电子传递,而NADH脱氢酶不参与。花生根瘤菌类菌体的H₂氧化系统是个复杂具分支的电子传递体系。     

花生根瘤菌类菌体氢酶的分离提纯及特性

花生根瘤菌类菌体经超声波破碎,ＴｒｉｔｏｎＸ－１００溶解,正已烷－硫酸铵处理后,再经ＤＥＡＥ－纤维素和Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ凝胶柱层析等纯化步骤,获得凝胶电泳纯的膜结合态氢酶,比活为７１．４μｍｏｌＨ２ｍｇ－１Ｐｒｏｔｍｉｎ－１,为类菌体吸Ｈ２活性的２１１倍。纯化的氢酶分子量为１１０ｋＤ。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后,呈现两个蛋白带,分子量分利为６５ｋＤ和３５ｋＤ。纯酶的Ｎｉ含量为０．６２ｍｏｌＮｉ／ｍｏｌ氢酶。在磷酸缓冲液中其活性的最适ｐＨ为６．５。ＤＣＩＰ、亚甲蓝、铁氰化钾、细胞色素Ｃ均可作为氢酶的电子受体,其中以ＤＣＩＰ为最适。