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为了探讨受体介导的基因转移技术在治疗血小板减少症方面应用的可行性,将促血小板生成素(Thrombopoietin,TPO)基因克隆入质粒型EB病毒表达载体pDR2中,并与半乳糖化组蛋白结合,从而制备了一种为肝细胞表面特异的脱唾液酸糖蛋白受体识别并内吞的核酸-蛋白复合物。在经化疗药物卡铂诱发的血小板减少症的实验动物大鼠中,同时静脉注射该复合物,可将TPO基因特异地导入肝细胞并在其中得到表达。从而有效地阻止了血小板减少症的发生,提示了一种以非病毒感染方式对化疗后血小板减少症进行有效基因治疗的可能前景 相似文献
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血小板生成素的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
自1994年DeSauvage等克隆出了人的血小板生成素(TPO)的CDNA后,对TPO的结构与功能的研究有了突破性的进展。本综述了近几年对TPO研究的最新献,较系统地介绍了TPO基本结构、CDNA、TOP受体的基因结构特征和TPO基因的染色体定位及生物学作用。 相似文献
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重组人血小板生成素在大肠杆菌中表达的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
采用化学法全合成了编码人血小板生成素(thrombopoietin,TPO)成熟肽N端153氨基酸的基因序列,构建基于该合成基因的表达质粒,结果以谷胱甘肽转硫酶-TPO153(GST-TPO153)融合蛋白的方式获得了占全菌蛋白40%的高效表达.进一步采用PCR方法分别对TPO合成基因及TPOcDNA的翻译起始区(TIR)序列进行定点突变,以降低这一区域的G-C含量.将突变序列分别插入到pBV220表达载体中,重组质粒在转化大肠杆菌JM109后,均获得了表达,其中TIR区突变后的合成基因表达产物约占全菌蛋白的15%.为研究基因下游结构对表达的影响,在不改变氨基酸组成的基础上,构建了TPO合成基因与TPOcDNA的杂合序列表达质粒.研究结果表明翻译起始效率是影响rh-TPO在大肠杆菌中表达的重要因素之一,同时基因下游序列的组成对表达水平也会产生影响. 相似文献
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血小板生成素基因在体内的表达及对造血祖细胞增殖活性的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
探讨了从肌肉组织植入的人血小板生成素(TPO)基因在小鼠体内的表达规律,以及对造血祖细胞增殖活性的影响.基因在导入后的24小时内就开始转录,先于血小板、血液TPO浓度、及造血祖细胞的变化.所表达的TPO在血液中的聚积可持续4周以上.巨核祖细胞,粒系祖细胞都出现2周左右的增殖增长,长于血小板计数的升高,但红系祖细胞的变化不明显.这些结果显示,基因治疗过程中血小板计数等变化源于TPO的表达及刺激,而在此期间一些调控机制被激活,对血小板形成的平衡发挥作用. 相似文献
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受体介导的EBV复制子载体定向导入大鼠肝脏组织中表达 总被引:1,自引:0,他引:1
在先前的体外实验中,我们利用半乳糖基化组蛋白与带荧光素酶报告基因的EB病毒复制子载体pEBluc,在体外组建了一种核酸蛋白质复合物。它可被肝细胞表面特异存在的脱唾液酸糖蛋白受体识别,并通过该受体介导的内吞作用将外源基因特异性导入培养的肝细胞素中表达。 相似文献
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血小板生成素 (TPO)有望成为特异性治疗血小板减少症的理想药物 .对TPOcDNA离体细胞表达和基因治疗血小板减少症进行了初步尝试 :构建了pcDNA3 TPO高表达质粒 ,基因转移离体细胞 ,检测表达产物rhTPO具有完整的生物学活性 ;pcDNA3 TPO分别注射正常小鼠和血小板减少症小鼠 ,小鼠血浆中检测到rhTPO的表达 ,并且正常小鼠血小板水平上升至 1 .9倍 ,血小板减少症小鼠血小板降低的幅度减小、恢复的速度加快并达到原来值的 1 .8~ 2 .0倍 .该结果为TPO基因治疗血小板减少症提供了实验依据 . 相似文献
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血小板膜糖蛋白的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
主要有五种人血小板膜糖蛋白:糖蛋白Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ,在血小板活化过程中起着膜受体的作用。糖蛋白Ⅰ在血小板粘附过程中起着因子Ⅷ(vWF)受体的作用,同时具有凝血酶受体和药物性抗体的受体功能,最近研究表明糖蛋白Ⅰ还可能与胶原受体相关。糖蛋白Ⅱ与糖蛋白Ⅲ形成钙依赖性复合物,在血小板聚集过程中起着纤维蛋白原受体的作用。在糖蛋白Ⅱ和Ⅲ分子上还具有血小板特异的抗原PL~(A1)、Lek 等。 相似文献
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发展了一种高效的、能将携带外源基因的质粒型EB病毒载体特异性地导入肝细胞表达的方法。将EB病毒复制子载体pDR2经改造得到携带外源基因的pEBluc质粒。将pEBluc与人工制备的、既保留了DNA结合活性又能为肝细胞受体识别并内在化的半乳糖基化组蛋白的fl组分结合,形成pEBluc-半乳糖基化组蛋白复合物。该复合物通过脱唾液酸糖蛋白受体介导的内吞进入肝细胞并表达。pEBluc质粒在细胞内能稳定存在并自主复制。该系统具有应用于以肝细胞为靶组织的基因治疗的前景。 相似文献
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应用基因克隆技术,以人TPOcDNA为目的基因,构建真核细胞表达重组体VRTPO,藉脂质体将其转染于NIH3T3细胞,应用PCR、RT-PCR及Western印迹等技术对其转染及表达情况进行鉴定.结果表明:VRTPO构建成功,在NIH3T3细胞可表达人TPO,为应用人TPOcDNA进行质粒DNA骨骼肌直接注射于动物体内的基因治疗研究奠定了基础 相似文献
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特异性向肝细胞表达和复制的EB病毒载体系统的组建 总被引:2,自引:0,他引:2
发展了一种高效的、能将推带外源基因的质粒型EB病毒载体特异性导入肝细胞表达的方法,将EB病毒复制子载体pDR2经改造得到携带外源基因的pEBluc质粒,将pEBluc与人工制备的、既保留了DNA结合活性又有为为肝细胞受体识别并内在化的半乳糖基化组蛋白的fl组分结合形成pEBluc-半乳糖基化组蛋白复合物。该复合物通过脱唾液酸糖蛋白受体介导的内吞进入肝并表达。pEBluc质粒在细胞内能稳定存在并自主 相似文献
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人血小板生成素的研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
血小板生成素是新近发现的一个非常重要的造血调控因子。经过40多年的不懈努力,基本上阐明了血小板生成素及其受体系统(TPO/c-Mpl)在造血调控方面的作用。并在此基础上,研制了重组血小板生成素,以治疗放疗和化疗引发的血小板减少症,本综述了近年TPO及其受体c-Mpl系统对造血调控的研究进展,涉及TPO和c-Mpl的基因和蛋白分子结构。基因表达调控、可能经历的信号传导途径、TPO/c-Mpl系统主要的生理作用、TPO在血液循环中的代谢过程以及目前重组血小板生成素的临床研究现状等六个方面。深入理解TPO/c-Mpl系统的结构和作用。将加深人们对机体的造血调控和血液病的认识,并将有助于相关疾病的临床治疗。 相似文献
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以全长人TPOcDNA为模板,采用PCR方法扩增出TPO功能区段基因,克隆入PUC18中,经筛选鉴定后,插入原核表达载体中进行表达,结果rhTPO功能区片段在原核细胞中获得高效表达,表达量约占菌体总蛋白的415%,表达产物经初步纯化后测活,具有明显促进体外培养巨核细胞集落形成的作用。 相似文献
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人血小板生成素受体c—MPL膜内部分的聚合作用 总被引:3,自引:0,他引:3
血小板生成素(TPO)是调节血小板生成最主要的细胞因子,其生物学效应由其受体c-MPL介导。利用酵母双杂合系统研究c-MPL膜内部分在TPO信号转导途径中的功能。首先用反转录PCR(RT-PCR)方法从人红白血病HEL细胞系总RNA中扩增并克隆P型c-MPL(MPLP)膜内部分cDNA,经测序验证后克隆至双杂合载体pAS2和pGAD424中,重组质粒命名为pASMM和pGADMM。将pASMM与p 相似文献
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李崇辉 《生物化学与生物物理进展》1998,25(3):249-253
通过受体对DNA-配体复合物的特异识别和内吞, 可以将外源基因导入特定的细胞内进行表达,称为受体介导的基因转移技术. 对该项技术的基本方法、体内外应用研究进展以及发展方向等进行了介绍和综述. 相似文献
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血小板生成素研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
血小板生成素(thrombopoietin,TPO)是近几年发现的一种造血生长因子,其功能是促进巨核细胞的发育成熟,调节血液中血小板的水平。由于它在临床上纠正较难对付的血小板减少症方面具有较好的应用前景,短短两年时间其开发研究已进入了Ⅰ/Ⅱ期临床试验,据称初步结果比较乐观;在理论研究方面,TPO基因的克隆大大丰富了人们对巨核细胞发育过程和调控机制的认识,出现了大量相关文献。本文根据最新文献,综述人们在有关TPO的表达调控、信号转导、生物活性、临床应用等方面的认识。 相似文献
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人血小板生成素(hTPO)全长cDNA克隆及其在CHO细胞中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
以人胎肝mRNA为模板,采用RT-PCR扩增了人TPO编码区全长cDNA,全序列测定结果表明与国外报道序列一致;进而构建了pcDNA3-TPO永久表达载体,转染CHO细胞后经G418加压筛选、TPO表达稳定性等项指标测试,获得了稳定分泌TPO的工程细胞株。 相似文献