B类1型清道夫受体表达调控与信号转导通路

B类1型清道夫受体(scavenger receptor class B type 1,SR-B1)是一种与清道夫受体CD36具有高度同源性的膜糖蛋白,其表达相对广泛且有着众多生物学作用.体内外多种因素可从转录或转录后水平对SR-B1表达进行调控： PPARα/γ激动剂、部分LXR激动剂、LH/HCG、雌激素等能上调SR-B1的表达;维生素E、INFα、脂多糖、IGF-1、胆酸、PXR激动剂及高糖水平等能下调SR-B1的表达;而血管紧张素Ⅱ则可对SR-B1的表达进行双向调节,且它们具体的调节机制复杂.SR-B1作为一种具有多配体结合特性的膜受体,不同配体与其结合后可介导细胞内不同信号事件及生物学效应,如介导HDL激活细胞内PI3K/Akt及MAPK信号途径, 增加内皮型一氧化氮合酶的磷酸化、促进内皮细胞迁移与内皮重构.此外,非HDL类配体如LDL激活p38MAPK途径、凋亡细胞、血清淀粉样蛋白A等激活胞内MAPK途径均可由SR-B1介导.本文对近年来B类1型清道夫受体表达调控机制及信号转导通路的相关研究进行综述.     

血小板基础与临床研究进展

血小板有参与止血和形成血栓的重要功能,与出血和血栓性疾病关系密切。本文以血小板表面膜糖蛋白,血小板基因多态性和血小板药物为重点,介绍近年来在基础与临床两方面血小板研究取得的主要进展。     

ADAM-TS:一类新的金属蛋白酶亚家族

ADAM－TS是最近发现的一类整合于细胞外基质或游离于血浆中的金属蛋白酶亚家族,具有保守的潜在功能域,在细胞外基质的水解中发挥重要的作用。迄今为止已有13个成员被发现,它们参与排卵、组织发育等生理过程,并与血管新生、肿瘤和结缔组织疾病等密切相关。对它们的研究将有助于人们深入认识并诊治相关疾病。     

PPARδ在脂质代谢中的作用

PPARδ（peroxisome proliferator-activated receptor δ）是过氧化物酶体增殖物激活型受体家族中的一员,广泛表达于多种器官和组织,主要控制脂肪组织和肌肉中脂肪酸氧化和能量解耦联,抑制巨噬细胞诱导的炎症,并参与许多疾病的发生和发展。近年来随着PPARδ选择性激动剂的发展,PPARδ有望成为治疗多种疾病的一个靶点。     

逆病毒载体介导双耐药基因在脐血CD34+细胞中的表达和抗性研究

为探讨转染醛脱氢酶基因(ALDHl)和多药耐药基因(MDRl)的人脐血CD34+细胞能否同时增强对活性环磷酰胺(4-HC)和MDRl基因靶药的抗性,构建了同时含ALDHl和MDRl双耐药基因的逆转录病毒表达质粒GlNa-ALDHl-IRES-MDRl,经LipofectAMINE介导转染GP+E86和PA317包装细胞,采用含长春新碱(VCR)和4-HC的培养基克隆选择后收集重组病毒上清于单向型GP+E86与双嗜型PA317包装细胞行乒乓交互感染,获得PA317重组病毒生产细胞(最高滴度达5.6×105CFU／ml),将含ALDHl和MDRl双耐药基因重组病毒的上清在细胞生长因子刺激下重复感染人脐血CD34+细胞,用PCR、RT-PCR、Southernblot、Northernblot、FACS和MTT等方法检测外源ALDHl与MDRl基因在CD34+细胞中的转移和表达。结果显示逆转录病毒载体介导的双耐药基因已经整合人转染靶细胞基因组并获得有效表达,同时传递不同的耐药表型。经双耐药基因修饰的脐血CD34+细胞对4-HC和VCR药物同时产生抗性,其IC50值分别比未转染细胞高4倍和7.2倍,本研究为开展肿瘤基因治疗的临床研究奠定了实验基础。     

抗人活化血小板单抗SZ一51嵌合抗体的构建及表达

ＳＺ－５１是一种抗人活化血小板单克隆抗体,并显示了很好的导向血栓显像与导向溶栓性能。为了减少该单抗的免疫原性以及能获得高效表达的ＳＺ－５１“人源化”单抗,我们构建了真核表达载体ａ－Ｌｙｓ１７－５１ＶＫ／Ｈｕ．ａ－Ｌｙｓ３０－５１ＶＨ／Ｈｕ。应用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ方法分别将重、轻链表达载体导入骨髓瘤细胞ＳＰ２／０中,并在相应的选择性培养基中进行耐药克隆筛选,经过体外长期传代培养和二次单克隆化,获得了一株高效表达重组ＳＺ－５１嵌合抗体的细胞株。培养上清中抗体蛋白的表达量为５ｍｇ／Ｌ,经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实重组嵌合抗体具有与亲本鼠源单抗相同的ＧＭＰ－１４０结合特性,而且能与鼠源ＳＺ－５１单抗竞争结合活化血小板。本研究结果表明,基因工程“人源化”ＳＺ－５１单抗可以作为导向载体进行导向显像与导向溶栓,并为今后进一步应用于临床展示了良好的前景。     

dsPAα1的缺失突变体的构建及其活性

纤溶酶原激活剂dsPAα1(Desmodusrotundussalivaryplasminogenactivatoralpha 1)从吸血蝙蝠(Desmodusrotundus)唾液中提取 ,它包括Finger、EGF、Kringle和蛋白酶区 .dsPAα1的功能可能与其分子结构相关 ,特别是其Finger区和EGF区 .构建、表达了缺失Finger和EGF区的dsPAα1的缺失突变体 (dsPK) ,研究dsPAα1的结构与功能的关系 .Western印迹检测 ,转染后细胞上清见dsPK条带 ;用小分子底物S2 76 5测定dsPAα1和dsPK的酶动力学常数 ,在无纤维蛋白存在下 ,两者的Km 和kcat Km基本一致 .但在纤维蛋白存在下 ,dsPAα1的kcat Km 值增加了 3 9倍 ,而dsPK仅增加了 1 6倍 ;溶栓试验显示dsPK具有溶栓作用 ,但溶栓作用显著低于dsPAα1;PAI 1对dsPAα1和dsPK具有同等的抑制作用 .证实dsPAα1的Finger结构区和EGF结构区对dsPAα1的纤溶功能是非常重要的     

浙江产蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)蛇毒纤溶组份对凝血系统的作用

用二乙氨基乙基葡聚糖A-50两次柱层析及葡聚糖凝胶过滤,从浙江产蝮蛇毒中得到一个纤溶组份。体内外试验研究表明,这一纤溶组份对纤维蛋白和纤维蛋白原均有显著的溶解作用,它也作用于第Ⅷ凝血因子和第V凝血因子。浙江产蝮蛇毒纤溶组份的这些性质与血浆素(纤维蛋白溶酶)相似,因而是一种血浆素样物质。     

浙江产蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)蛇毒抗凝血活酶组份对凝血系统的作用

通过二乙氨基乙基葡聚糖A-50柱层析,从浙江产蝮蛇毒中得到一个抗凝血活酶组份。这一组份在体外显著地延长血浆复钙时间和凝血酶原时间,但不延长凝血酶时间,对纤维蛋白也无溶解作用。低浓度的抗凝组份就能干扰血液凝血活酶生成和抗组织凝血活酶。家兔静脉注射抗凝组份,全血凝固时间、血浆复钙时间、凝血酶原时间和凝血酶时间均显著而短暂地延长,纤维蛋白原浓度也会突然下降至原来的20％,而优球蛋白溶解时间始终大于24小时,没有缩短现象。     

一氧化氮及其合成酶异常与疾病

原发性高血压、动脉粥样硬化、糖尿病、慢性肾衰患者的血管生成一氧化氮（ＮＯ）降低,对乙酰胆碱的舒张效应丧失,而对儿茶酚胺类的缩血管反应异常敏感,血管舒、缩失衡,病人易患高血压。败血症病人体内ＮＯ生成过多,血管过分扩张,导致败血症休克,可用ＮＯ合成酶抑制剂治疗。ＮＯ还参与男性性功能的调控,局部注射ＮＯ生成药物能治疗射精功能低下。ＮＯ吸入疗法已被用于治疗肺高血压疾病,短期疗效甚佳。