生物被膜肺炎克雷伯菌产ESBLs的耐药性和基因型分析

目的检测临床分离的肺炎克雷伯菌在体外形成生物被膜后产超广谱β-内酰胺酶（Extended-Spectrum β-Laetamases,ESBLs）的情况,分析及研究其耐药性和耐药基因的分型情况。方法采用改良平板法在体外建立肺炎克雷伯菌生物被膜模型,用三维试验确认产ESBLs菌株,用K-B法进行药敏试验,用聚合酶链反应（Polymerase chain reaction,PCR）进行blaSHV、blaTEM和blaCTX—M基因扩增,产物分别克隆人pMD18-T载体后测定其核苷酸序列,分析其基因亚型。结果临床筛选出的60株ESBLs阴性肺炎克雷伯菌有46株在体外成功建立了生物被膜模型,并有9株产生了ESBLs表型。产酶后菌株的耐药性明显高于产酶前。PCR结果显示9株细菌均携带SHV基因,有4株同时携带TEM基因,没有检出携带CTX-M基因的菌株。9株细菌的SHV基因分别属于SHV-5、SHV-12和SHV-28亚型。4株携带TEM基因的细菌均为TEM-1亚型。结论生物被膜的形成能够诱导肺炎克雷伯菌产生ESBLs。本实验中检出的产ESBLs的基因型都是由SHV-1突变产生的。生物被膜的形成和产生ESBLs的协同作用是生物被膜肺炎克雷伯菌耐药性增强的主要原因之一。     

产ESBLs大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的耐药特征和基因分型研究

目的了解广东省中医院产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的流行、耐药特点和基因型分布。方法对该院2001年7月至2003年8月间临床分离保存的208株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,用VITEK-32细菌鉴定仪进行细菌鉴定,用K—B法进行药敏试验,用双纸片法进行ESBLs初筛,用NCCLS1999年推荐的确证方法进行ESBLs确证。并采用PCR扩增和PCR产物测序方法对产ESBLs菌株进行基因分型。结果分离到产ESBLs细菌76株,总检出率为36．5％,其中肺炎克雷伯菌阳性率为41．9％（39／93）、大肠埃希菌阳性率为32．2％（37／115）,产酶株的耐药率明显高于非产酶株,产ESBLs细菌对青霉素类、环丙沙星及头孢菌素类耐药率较高,加酶抑制剂克拉维酸或他唑巴坦后耐药率有明显下降;PCR初步分型结果表明：TEM型42株（55．3％）,均为TEM-1型,CTX-M型27株（35．5％）,SHV型33株（43．4％）。结论产ESBLs细菌具有多重耐药的特点;CTX-M型和SHV型是该院产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中流行的基因型。     

同时产多种基因型ESBLs肺炎克雷伯菌的分析

目的分析汕头大学医学院第一附属医院临床分离的肺炎克雷伯菌同时产多种基因型ESBLs的情况。方法采用PCR扩增对产ESBLs的肺炎克雷伯菌初步分型,然后PCR扩增阳性产物克隆测序分析,脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型;用浓度梯度法检测10种抗菌药物对同时产多种基因型ESBLs的肺炎克雷伯菌的最低抑菌浓度（MIC）。结果83株产ESBLs的肺炎克雷伯菌中,发现9株同时产TEM、SHV和CTX-M型,测序结果为CTX-M-3、TEM-1及多种SHV型（SHV12及SHV28）。将这9株细菌作PFGE分析,结果共被分成7个型。药敏结果表明,9株菌除对亚胺培南敏感外,对氨曲南、头孢曲松、头孢噻肟、头孢他啶、丁胺卡那和四环素均高度耐药,对哌拉西林／三唑巴坦、头孢吡肟、环丙沙星极少菌株敏感。结论发现CTX—M-3超广谱-及多种SHV型超广谱-和TEM-1广谱β-内酰胺酶基因同时存在该院临床分离的肺炎克雷伯菌中,耐药十分严重,应引起重视。     

产AmpC酶肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性分析

目的了解本地区质粒介导的耐药机制在产AmpC酶肺炎克雷伯菌多重耐药中的作用、氨基糖苷修饰酶(AMEs)基因类型及转移方式。方法头孢西丁三维试验方法,检测产AmpC酶菌株;采用接合转移试验了解肺炎克雷伯菌耐药基因转移方式。采用K-B纸片测定产AmpC接合子对4种氨基糖苷类抗生素的敏感性,并采用PCR技术检测AMEs基因。结果临床分离的820株肺炎克雷伯菌共筛选出108株疑产AmpC酶菌株,阳性率为13.17%。经接合转移试验、AmpC酶表型确认试验共获得53株产AmpC接合子。其中67.9%的接合子(36/53)检出氨基糖苷修饰酶基因,aac(3)-I和aac(6′)-II未检出,对4种常用氨基糖苷类抗生素(阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、奈替米星)耐药率分别为37.7%、68.0%、43.4%和62.3%。结论本地区质粒介导AmpC酶是肺炎克雷伯菌产生多重耐药的重要原因,产酶株对氨基糖苷类高度耐药,其耐药性与AMEs密切相关,耐药基因质粒的转移可导致耐药性的传播扩散。     

铜绿假单胞菌β-内酰胺类药物耐药相关基因(12种)研究

目的了解临床分离的铜绿假单胞菌β-内酰胺类药物耐药相关基因（12种）存在状况。方法自临床分离40株对铜绿假单胞菌。采用聚合酶链反应（PCR）检测耐药基因（TEM、SHV、OXA-10群、CTX-M-1群、PER、VEB、GES、CARB、IMP、VIM、DHA和oprD2）。结果40株中CARB阳性18株（45．0％）、35株oprD2基因缺失（87．5％）．其余基因均阴性。结论临床分离的铜绿假单胞菌CARB基因携带率高。     

一株解鸟氨酸克雷伯菌的鉴定和碳青霉烯类耐药基因的检测

目的对来自住院患者血液标本分离出的1株菌株进行鉴定及碳青霉烯类抗生素耐药的基因型分析。方法利用DL-96II细菌测定系统进行菌株B1635-1的初步鉴定及药敏试验;采用PCR法扩增菌株B1635-1的16SrDNA基因序列;应用MEGA 5.0软件构建菌株B1635-1的系统发育树,确定其种属地位;采用PCR法克隆菌株B1635-1的碳青霉烯类耐药基因。结果 DL-96II细菌测定系统初步鉴定菌株B1645-1为解鸟氨酸克雷伯菌,并显示该菌株对除氨曲南以外的几乎所有β-内酰胺类抗生素耐药,对磺胺类、喹诺酮类和氨基糖苷类抗生素也耐药,但对四环素类抗生素敏感。对菌株B1645-1的16SrDNA基因序列的系统发育树分析,最终鉴定该菌为解鸟氨酸克雷伯菌(Klebsiella ornithinolytica)。菌株B1645-1扩增出编码碳青霉烯酶blaNDM-1基因,未扩增出编码碳青霉烯酶blaKPC、blaVIM、blaTME和blaSHV基因。结论首次从湖北医药学院附属东风医院住院患者的血液标本中成功分离获得一株携带blaNDM-1基因解鸟氨酸克雷伯菌株,产NDM-1型碳青霉烯酶是该株解鸟氨酸克雷伯菌耐碳青霉烯类药物的主要原因,为临床鸟氨酸克雷伯菌的感染治疗提供参考依据。鉴于肠杆菌科细菌耐药速率传播更快,警示相关部门应重视并加强对blaNDM-1基因携带菌的监测与筛查。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对三种氨基糖苷类抗生素的耐药性分析

【摘 要】 目的 评价庆大霉素、妥布霉素及阿米卡星三种氨基糖苷类抗生素（AGs）对大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的体外抗菌活性。方法 对902株大肠埃希菌和404株肺炎克雷伯菌,采用VITEK-2全自动微生物分析仪配套的AST-GN13药敏卡进行庆大霉素、妥布霉素及阿米卡星的体外药敏试验。结果 大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株检出率分别为40.8％和36.6％;产ESBLs的大肠埃希菌对庆大霉素、妥布霉素及阿米卡星的敏感率分别为42.4%、39.1%和96.5%,与非产ESBLs菌株比较,敏感率差异均有统计学意义（P<0.01）;产ESBLs的肺炎克雷伯菌对庆大霉素、妥布霉素及阿米卡星的敏感率分别为64.2%、62.8%和91.9%,与非产ESBLs菌株比较,敏感率差异均有统计学意义（P<0.01）;阿米卡星对产与非产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌均高度敏感,敏感率均在91%以上。结论 本地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs菌株流行严重,ESBLs的产生可使大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对AGs的耐药情况加重,提示ESBLs和AGs引起的耐药可能存在一定的相关性。     

呼吸道产超广谱β-内酰胺酶分离株耐药基因初步分型

目的了解产超广谱β-内酰胺酶 (ESBLs)呼吸道分离株的主要基因型分布特点.方法用表型确证试验确定临床呼吸道标本中产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌.应用聚合酶链反应(PCR)方法扩增产ESBLs株的bla(TEM)、bla(SHV)和bla(CTX-M)基因.结果 PCR结果显示bla(TEM)、bla(SHV)和bla(CTX-M)基因的总阳性率分别为40 .7%、45.7%和75.3%,其中大肠埃希菌分别为:64.9%、2.7%和91.9%,肺炎克雷伯菌分别为:20.5%、81.8%和61.4%.67.6%的大肠埃希菌和95.5%的肺炎克雷伯菌同时携带多个基因.结论深圳市人民医院呼吸道分离的产ESBLs大肠埃希菌的主要基因型为CTX-M,肺炎克雷伯菌主要基因型为SHV.大多数菌株同时携带多个基因.     

肺炎克雷伯菌耐药性与I类整合子关系的研究

目的检测I类整合子在肺炎克雷伯菌临床分离株中的分布,分析整合子对细菌耐药性的影响。方法采用K—B纸片扩散法对127株肺炎克雷伯菌临床分离株进行药敏试验;并用WHONET5．6软件分析菌株药敏情况;采用聚合酶链反应（PCR）分析127株肺炎克雷伯菌株的I类整合子。并对I类整合子阳性株与阴性株的耐药性进行对比分析。结果127株菌中有53株（41．70％）含有I类整合子,I类整合子阳性菌株对氨基糖苷类、喹诺酮类及大多数B一内酰胺类的耐药率高于整合子阴性的菌株。结论I类整合子在肺炎克雷伯菌临床分离株存在较广,含有I类整合子的肺炎克雷伯菌更易获得耐药性。     

临床分离肺炎克雷伯菌Ⅰ整合子分布及其与qnr基因关系研究

目的 了解临床分离肺炎克雷伯菌中qnr基因和Ⅰ类整合子基因的分布及其耐药特征.方法 采用PCR法对45株耐环丙沙星肺炎克雷伯菌进行qnrA、qnrB、qnrS基因筛查并测序,用PCR法检测qnr阳性菌株Ⅰ类整合子基因,并采用SPSS 13.0和Whonet 5.4软件分析药敏结果及比较.结果 45株肺炎克雷伯菌中,24株(51.1％)细菌检出qnrS基因,未检出qnrA和qnrB基因.20株qnr阳性菌株同时携带Ⅰ类整合子基因.qnr阳性菌株Ⅰ类整合子基因携带率显著高于阴性菌株,qnr阳性菌株对阿米卡星、妥布霉素、亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦及头孢哌酮舒巴坦的敏感性较高.结论 肺炎克雷伯菌对氟喹诺酮类抗菌药物耐药主要由qnrS引起,qnr阳性株同时携带Ⅰ类整合子,导致呈现多重耐药性,加强临床耐药监测对控制多重耐药传播有着重要的意义.     

产超广谱β-内酰胺酶细菌耐药性基因型分析

检测我院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性和基因型。表型确定临床分离产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌56株,应用PCR基因扩增技术及双脱氧DNA测序方法,分别对TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-2和CTX-M-9编码基因进行分析。产酶菌株对亚胺培南、美洛培南、阿米卡星、头孢吡肟耐药性较低,对其他16种抗生素耐药性较高。在56株菌株中有50株为CTX-M型,占89%,34株为TEM型(60.7%),20株SHV型(35.7%);其中CTX-M-9型共计39株占78%,CTX-M-1型19株占38%,CTX-M-2型16株占32%。产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性值得关注,主要临床流行基因型是CTX-M型。     

产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌呼吸道分离株的基因分型及耐药性分析

目的了解深圳市人民医院大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌呼吸道分离株超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型特点及耐药性。方法采用临床实验室标准化协会(CLSI)推荐的表型确证试验筛选出该院呼吸道分离株产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌共78株。应用PCR及DNA测序法分析产酶株的TEM、SHV及CTX-M3种β-内酰胺酶基因,用琼脂稀释法测定细菌最低抑菌浓度(MIC)。结果 37株产ESBLs大肠埃希菌中,28株(75.7%)检出CTX-M-14基因,4株(10.8%)检出CTX-M-9基因,其他型较少见。41株肺炎克雷伯菌中,25株(61.0%)检出SHV-12基因,4株(9.8%)检出SHV-11基因,其他SHV型较少。20株(48.8%)检出CTX-M-14基因,5株(12.2%)检出CTX-M-3基因,其他型较少。产ESBL菌株均对亚胺培南敏感,对氨苄西林/舒巴坦的耐药率最高(90%),对其他抗生素有不同程度耐药。结论深圳市人民医院呼吸道分离的产ESBLs大肠埃希菌以CTX-M-14型为主,产酶肺炎克雷伯菌以SHV-12和CTX-M-14型为最常见。     

产ESBLs肺炎克雷伯菌AmpC酶的检测及耐药性分析

目的了解深圳市人民医院产ESBLs肺炎克雷伯菌中产AmpC酶的情况及其耐药性。方法收集产ESBLs肺炎克雷伯菌临床株126株,应用Tris-EDTA纸片法检测AmpC酶。用琼脂稀释法测定菌株对11种抗生素的最低抑菌浓度（MIC）。结果126株ESBLs阳性的肺炎克雷伯菌中12株检出AmpC酶,检出率为9.5%。AmpC阳性菌株对头孢西丁、头孢他啶、氨曲南、氨苄西林/舒巴坦和阿莫西林/克拉维酸的耐药率达100%,对阿米卡星和哌拉西林/他唑巴坦的耐药率分别为83.3%和33.3%,其中头孢西丁、头孢他啶、氨曲南、阿莫西林/克拉维酸、阿米卡星和哌拉西林/他唑巴坦的耐药率显著高于AmpC阴性株（P〈0.05）。结论深圳市人民医院产ESBLs肺炎克雷伯菌中检出AmpC酶阳性株,其耐药性强于单产ESBLs菌株。     

多重耐药铜绿假单胞菌的耐药性及耐药基因检测分析

目的探讨呼吸内科病房分离的多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因。方法采用纸片扩散法进行体外药敏试验,聚合酶链反应（PCR）对其中32株多重耐药铜绿假单胞菌进行相关基因TEM、SHV、CTX-M-9、DHA、VIM、PER、OXA、IMP和OprD2检测,并对耐药基因进行测序。结果 32株多重耐药铜绿假单胞菌对多黏菌素B耐药率是3.1%,对其余抗菌药物耐药率为53%～100%,β-内酰胺酶基因OXA-10、TEM-1、DHA-1、PER-1和IMP-1基因阳性率分别为46.9%、21.9%、15.6%、12.5%和31.3%,未检出SHV基因、CTX-M-9基因和VIM基因;另外OprD2基因缺失率达68.8%。结论呼吸内科病房多重耐药的铜绿假单胞菌携带多种β-内酰胺酶基因,应引起高度重视。     

Occurrence of qnr-positive clinical isolates in Klebsiella pneumoniae producing ESBL or AmpC-type beta-lactamase from five pediatric hospitals in China.

The plasmid-mediated quinolone resistance qnr genes in clinical isolates in adults have been described in different countries; however, the frequency of their occurrence has not been detected in pediatric patients. A total of 410 clinical isolates of Klebsiella pneumoniae, identified as producers of an extended-spectrum beta-lactamase (ESBL), or AmpC beta-lactamase, were collected from five children's hospitals in China during 2005-2006. The isolates were screened for the presence of the qnrA, qnrB, and qnrS genes, and then the harboring qnr gene isolates were detected for a bla gene coding for the TEM, SHV, CTX-M, and plasmid-mediated ampC gene by a PCR experiment. Ninety-two isolates (22.7%) were positive for the qnr gene, including 10 of qnrA (2.4%), 25 of qnrB (6.1%), and 62 of qnrS (15.1%). Eighty-one of the 92 (88.0%) qnr-positive isolates carried at least one bla gene for TEM, SHV, CTX-M, or DHA-1. The ciprofloxacin resistance increased 16-256-fold and oflaxacin resistance increased 2-32-fold in transconjugants, respectively. These results indicated that the plasmid-mediated qnr quinolone resistance gene was qnrS, followed by qnrB and qnrA. Most of the isolates also carried a bla gene coding ESBL or ampC gene coding DHA-1 among Klebsiella pneumoniae isolated from Chinese pediatric patients.     

产ESBLs肺炎克雷伯菌的基因型和耐药性研究

超广谱β-内酰胺酶(extended spectrumβ-lactamase,ESBLs)与细菌耐药性密切相关,为了揭示产ESBLs肺炎克雷伯菌的基因型和耐药性,本研究在2017年1月至2018年9月期间,共检测了466例肺炎克雷伯菌感染的患者标本,并分析了产ESBLs肺炎克雷伯菌的基因型和耐药性。研究结果显示,466例患者中共检出562个肺炎克雷伯菌菌株。其中,呼吸内科的检出数最多(212株,37.72%),其次为重症监护科(106株,18.86%)。对于不同标本来源,痰液中检出菌数最多(331株),占总数的58.90%。562株肺炎克雷伯菌中共检测出237株产ESBLs(42.17%)。产ESBLs肺炎克雷伯菌对阿莫西林(89.03%)、替卡西林(87.34%)、氨苄西林(81.43%)的耐药率最高;而对替加环素(9.28%)、阿米卡星(6.75%)、亚胺培南(1.27%)和美罗培南(0.84%)的耐药率最低。237株产ESBLs的肺炎克雷伯菌菌株中,53.59%扩增出CTX-M型,48.95%扩增出TEM型,40.93%增出SHV型。另外,237株产ESBLs的肺炎克雷伯菌菌株中,产两个及以上的ESBLs的菌株共111株(46.84%)。     

连续12年产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌感染分布及耐药性分析

目的了解产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）肺炎克雷伯菌（KPN）的临床分布及耐药性,为临床合理选用抗菌药物提供依据。方法用常规方法,结合法国梅里埃公司的自动化细菌鉴定分析仪分离鉴定细菌;用K-B纸片扩散法进行药敏试验;用双纸片协同筛选法和酶抑制剂增强纸片法检测ESBLs。对中国医科大学附属盛京医院1999年1月至2010年12月期间临床分离的产ESBLs和非产ESBLs KPN菌株的临床分布及其耐药趋势进行回顾性分析。结果 KPN的ESBLs检出率分别从1999年的19.82%上升至2010年的49.34%;KPN主要分离于痰占52.4%,其次是血液占17.74%,主要来源于外科病区和新生儿病区;产ESBLs菌和非产ESBLs菌对阿米卡星、左氧氟沙星等非β-内酰胺酶类抗菌药物的耐药率均显著增高,差异具有统计学意义（P〈0.01）,对亚胺培南和美罗培南都保持高度敏感,耐药率均低于2%。结论 12年间ESBLs检出率总体呈上升趋势,产ESBLs肺炎克雷伯菌表达对包括非β-内酰胺类在内的抗菌药物多重耐药,对碳青霉烯类抗菌药物仍保持高度敏感性。     

多药耐药鲍曼不动杆菌老年患者分离株发现ADC型β-内酰胺酶基因新的变异型

目的调查多药耐药鲍曼不动杆菌老年患者分离株(MDR-ABA-5077)β-内酰胺酶基因分布情况。方法 MDR-ABA-5077株分离自宁波市医疗中心李惠利医院2009年7月住院老年患者,采用聚合酶联反应(PCR)及序列分析的方法分析21种β-内酰胺酶基因。结果本株MDR-ABA共检出3种β-内酰胺酶基因:TEM、SHV、ADC,其余18种β-内酰胺酶基因未检出。ADC阳性基因测得序列经BLAST比对与已在GenBank登录的ADC型AmpC均不相同,经与GenBank登录的ADC型序列分子进化分析,确认为ADC型β-内酰胺酶新的变异型。结论本株MDR-ABA多种β-内酰胺类药物耐药与产TEM、SHV、ADC等3种β-内酰胺酶相关。