白假丝酵母检测的研究进展

白念菌病已成为艾滋病等免疫功能低下患者的严重并发症和直接致死原因,是医源性感染的常见病之一,其早期诊断与防治是目前重要的研究课题。本文综述了近年来该菌免疫学及分子生物学检测技术试验与应用的研究进展。     

连续12年产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌感染分布及耐药性分析

目的了解产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）肺炎克雷伯菌（KPN）的临床分布及耐药性,为临床合理选用抗菌药物提供依据。方法用常规方法,结合法国梅里埃公司的自动化细菌鉴定分析仪分离鉴定细菌;用K-B纸片扩散法进行药敏试验;用双纸片协同筛选法和酶抑制剂增强纸片法检测ESBLs。对中国医科大学附属盛京医院1999年1月至2010年12月期间临床分离的产ESBLs和非产ESBLs KPN菌株的临床分布及其耐药趋势进行回顾性分析。结果 KPN的ESBLs检出率分别从1999年的19.82%上升至2010年的49.34%;KPN主要分离于痰占52.4%,其次是血液占17.74%,主要来源于外科病区和新生儿病区;产ESBLs菌和非产ESBLs菌对阿米卡星、左氧氟沙星等非β-内酰胺酶类抗菌药物的耐药率均显著增高,差异具有统计学意义（P〈0.01）,对亚胺培南和美罗培南都保持高度敏感,耐药率均低于2%。结论 12年间ESBLs检出率总体呈上升趋势,产ESBLs肺炎克雷伯菌表达对包括非β-内酰胺类在内的抗菌药物多重耐药,对碳青霉烯类抗菌药物仍保持高度敏感性。     

shRNA抑制宫颈癌Hela细胞株HPV18 E6、E7基因表达的研究

应用短发夹RNA(Short hairpin RNA,shRNA)表达载体抑制宫颈癌Hela细胞株HPV18 E6、E7基因的表达。应用已鉴定的shRNA表达载体pHPV1、pHPV2转染Hela细胞,G418筛选阳性细胞,建立稳定转染细胞株;倒置荧光显微镜检测转染情况;提取细胞内总RNA,RT-PCR方法检测HPV18 E6、E7 mRNA;WesternBlot检测HPV18 E6、E7蛋白表达的变化;采用灰度分析软件对PCR扩增条带与蛋白质条带进行灰度分析。pHPV1实验组细胞内HPV18 E6、E7 mRNA含量分别为阴性对照组的31%、38%,E6、E7蛋白分别为阴性对照组的37%、31%;pHPV2实验组细胞内HPV18 E6、E7 mRNA含量分别为阴性对照组的54%、77%,E6、E7蛋白分别为阴性对照组的52%、83%。pHPV1、pHPV2表达载体能抑制Hela细胞HPV18 E6、E7的表达,针对外显子区434-452的pHPV1抑制作用更强。     

ICU病房导管相关性血流感染的临床流行病学

目的调查重症监护病房住院患者导管相关性血流感染（CRBSI）的发生率、病原分布特点、高危因素,并和国际权威数据进行比较,了解中国医科大学附属盛京医院CRBSI发生状况,为进一步防治CRBSI提供依据。方法应用美国国家院内感染监测（NNIS）规定的关于CRBSI的定义、诊断标准和评估参数等统一标准系统,对2007年6月1日至2008年5月31日人住中国医科大学附属盛京医院综合性ICU病房内的所有符合条件的病例进行前瞻性研究。结果得到符合纳入研究条件的患者174例,累计行中心静脉导管日为1913日;发生CRBSI为23例次,感染率为13．2％,感染密度为12．0／1000,导管使用率为72．8％。其中以肠杆菌和假单胞菌为主的革兰阴性细菌感染9例;以屎肠球菌为主的革兰阳性细菌感染7例;真菌感染7例,均为假丝酵母菌属。多因素Logistic回归分析结果,CRBSI发生前抗生素应用个数≥3（OR=6．335）和中心静脉置管个数〉1（OR=5．981）是CRBSI发生的独立危险因素（P〈0．05）。结论该院CRBSI发生率高,感染密度大,多个中心静脉置管以及抗生素应用频繁可以增加CRBSI的发生率,必须进一步加强有效的预防和控制措施。     

医学微生物实验课教学的思考

医学微生物学是高等医学院校课程体系的重要组成部分,实验课在本课程中占有重要的地位。为提高学生学习的主动性及积极性,进而提高教学质量,作者就几年来教学经验谈些体会。     

四翼无刺线虫扫描电镜观察

应用扫描电镜观察四翼无刺线虫。虫体尖端较大，略呈方形。口囊方形。口囊较小，内有３个唇瓣。唇瓣上未见细齿。顶端具有４个不甚明显的乳头。头翼长片状，左右对称，明显突出于体表。侧翼波浪状向后止于虫体尾部的尖细部。阴门位于虫体前１／３处，外观似旧式抽屉拉手。     

呼吸道疾病发作期患者肺孢子菌寄植状况与肺疾病相关性研究

目的调查呼吸系统疾病急性发作期患者肺孢子菌定植或感染状况,探讨肺孢子菌寄植与呼吸系统疾病的相关性。方法构建检测肺孢子菌线粒体大亚基核糖体核糖核酸基因的mtLSU巢式PCR反应体系,鉴定其敏感性和特异性。利用新建立的巢式PCR检测呼吸系统疾病急性发作期患者痰液中肺孢子菌基因,分析肺孢子菌在呼吸系统疾病患者中的定植率及其与呼吸系统疾病的相关性。结果新建立的mtLSU巢式PCR扩增的肺孢子菌基因序列与GenBank中人源肺孢子菌基因序列同源性为100%,且与其他8种呼吸道病原体无交叉反应。敏感性检验结果表明,扩增基因的最小量为366 fg。对98例呼吸疾病急性发作期患者的103份标本检测的结果显示,肺孢子菌基因检出率为62.14%（64/103）。结论本研究建立的mtLSU巢式PCR方法具有较高的敏感性和特异性,适用于无创性呼吸道标本肺孢子菌基因检测;肺孢子菌在呼吸系统疾病患者中有较高的定植和感染率。     

铜绿假单胞菌的临床感染及耐药性分析

目的了解铜绿假单胞菌（PAE）临床感染特点和耐药特性,为医院感染的监测与控制提供依据。方法采用法国生物梅里埃公司的API鉴定系统及VITEK2系统进行细菌鉴定,用K-B纸片扩散法进行药敏试验,用WHONET 5.4软件分析PAE的耐药性。结果10年来共分离出2479株PAE,主要来源于病房的呼吸道标本,其对23种抗菌药物的耐药率逐年上升,只有美罗培南、亚胺培南、头孢他啶和环丙沙星的耐药率〈30%,多重耐药PAE共有188株,主要分布在重症监护病房、呼吸内科。结论PAE的耐药性已十分严重,必须进行严密监控,以预防PAE导致的医院感染暴发流行。     

EBV转化的人乳头瘤病毒感染者B淋巴母细胞系的建立及应用

建立EB病毒(EBV)转化的B淋巴母细胞系(LCL),应用此细胞系作为抗原递呈细胞筛选抗原特异性的T细胞克隆。收集人乳头瘤病毒(HPV)感染者外周血20份,分离外周血单个核细胞(PBMC),利用Pan T细胞试剂盒去除PBMC中的T细胞,获得non-T淋巴细胞,EBV病毒转化non-T淋巴细胞。应用转化的LCL细胞作为抗原递呈细胞,ELISPOT筛选可能的HPV抗原特异性的T细胞克隆。成功建立18个LCLs,建株成功率为90%。转化成功的LCL细胞体积增大,聚集成团状或簇状。建株失败的两份标本,用于转化的non-T淋巴细胞数少于2×106。应用LCL细胞作为抗原递呈细胞筛选出64个HPV抗原特异性的T细胞克隆。成功建立LCLs,此细胞系细胞可作为体外研究HPV特异性免疫反应的刺激细胞。     

HPV-siRNA 对Hela细胞生长抑制作用的实验研究

以HPV18 E6基因为靶位,研究siRNA对宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用。设计并合成siRNA,脂质体siNEO FX转染Hela细胞,分别用MTT法,双层软琼脂克隆形成试验和流式细胞术分析了siRNA对Hela细胞体外生长增殖活力、细胞周期分布的作用。siRNA作用后的Hela细胞增殖速度减慢,软琼脂克隆形成率降低,G0/G1期细胞比率增加。HPV18 E6 siRNA能抑制Hela细胞体外生长增殖能力并诱导细胞周期重新分布。