拟南芥基因转移新方法一真空渗入法的研究

以拟南芥（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａ）生态型Ｌａｎｄｓｂｅｎｇｅｒｅｃｔａ为试材,在含有所构建的ＣａＭＶＢａｒｉ－１株系基因ＶＩ的质粒（ｐＪＯ５３０Ｂａｒｉ－１ＧＶＩ）的根癌农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）菌种ＧＶ３１０１的介导下,研究了基因转移的新方法一真空渗入法。这种方法简便、快速、可靠且无需经过组织培养阶段即可获得大量转化植株。适宜的转化条件是将生长健壮,除去主苔后４－８ｄ的成株连同营养钵倒置浸入被渗入培养基稀释的农杆菌孢子悬浮液,其光密度为０．８,在吸力为１．７ｍ２／ｈ的真空泵下断续处理２ｍｉｎ／３０ｓ,置于２４ｈ连续光照下的气候室培养,待种子收获后在含有潮霉素的选择培养基选择转化植株．ＰＣＲ分析及ＥＬＩＳＡ检测,该方法的转化效果高达０．７１％。     

人基因使猪减少脂肪

美国农业部（ＵＳＤＡ）（Ｂｅｌｔｓｖｉｌｅ,ＭＤ）的研究者采用ＧｅｎｅｍｅｄｉｃｉｎｅＩｎｃ．’ｓ（ＴｈｅＷｏｏｄｌａｎｄｓ,ＴＺ）公司的胰岛素样生长因子－１（ＩＧＦ－１）基因培育出体脂减少的猪。此项研究将ＩＧＦ－１转基因猪与导入生长激素（ＧＨ）基...     

牛疱疹病毒Ⅰ型前早期基因BICPO的表达对牛免疫缺陷病毒LTR的反式激活作用

由含有ＢＨＢＶ－１（ＢｏｖｉｎｅＨｅｒｐｅｓＶｉｒｕｓ－１）前早期基因的基因组片段亚克隆ＢＩＣＰＯ（ＢＨＶ－１ＩｎｆｅｃｔｅｄＣｅｌｌＰｒｏｔｅｉｎＯ）的ＤＮＡ序列至表达载体ｐＳＶＫ３,构建质粒ｐＳＶ２．９。将该质粒与ｐＢＬＴＲ－Ｌｕｃ共转染小牛肺细胞,检测转染细胞裂解物的荧光素酶活性,ＢＩＣＰＯ的表达产物可以显著地激活ＢＩＶＬＴＲ启动子控制下的荧光素酶基因的表达。根据ｐＳＶ２．９与含有ＢＩＶＬＴＲ不同区段缺失的质粒ｐＤ－３１９－Ｌｕｃ、ｐＤ－１１５－Ｌｕｃ、ｐＤ－５２－Ｌｕｃ共转染小牛肺细胞的实验结果,推测ＢＩＶＬＴＲ－３１９位上游区的ＤＮＡ序列影响ＢＩＣＰＯ基因产物对ＢＩＶＬＴＲ表达的激活作用。     

普通小麦—提莫菲维小麦白粉病抗性渐渗系中渗入片段的准确鉴定

用小麦（ Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ａｅｓｔｉｖｕｍ Ｌ．） 第二部分同源群的３６ 个探针,对携带抗白粉病（ Ｅｒｙｓｉｐｈｅ ｇｒａｍｉｎｉｓｆ．ｓｐ ｔｒｉｔｉｃｉ） 基因Ｐｍ６ 的普通小麦提莫菲维小麦（ Ｔ．ｔｉｍｏｐｈｅｅｖｉ Ｚｈｕｋ ．） 渐渗系进行检测,通过这些渐渗系与受体亲本“Ｐｒｉｎｓ”之间杂交谱带多态性的比较,发现所测出多态性标记位点均位于这５ 个渐渗系的２Ｂ 染色体上,但其渗入片段的位置与大小有明显区别。ＩＧＶ１＿４５６ 和ＩＧＶ１＿４５８ 被鉴定为２Ｂ 染色体从短臂标记Ｘｃｄｏ４０５ 到长臂标记Ｘｂｃｄ１３５ 之间的区域已被提莫菲维２Ｇ 染色体区段所代替;而ＩＧＶ１＿４６３ 则在２Ｂ 染色体长臂Ｘｂｃｄ３０７ 到Ｘｃｄｏ６７８ 标记之间的区域被提莫菲维渗入成分所代替;ＩＧＶ１＿４６４ 、ＩＧＶ１＿４６５ ２ＢＬ染色体上的渗入片段更小,即ＩＧＶ１＿４６４ 在２ＢＬ染色体上标记Ｘｐｓｒ９３４ 与Ｘｂｃｄ１３５ 之间的区域有提莫菲维２Ｇ 染色质成分渗入,ＩＧＶ１＿４６５ 仅在Ｘｂｃｄ１３５ 附近有更小的外源成分渗入。根据５个渐渗系渗入成分重叠区段比较可把Ｐｍ６ 定位于２ＢＬ染色体上Ｘｂｃｄ１３５ ２ＢＬ标记的邻近区域内     

牛疱疹病毒I型前早期基因BICPO的表达对牛免疫缺陷病毒LTR的反式激活…

由含有ＢＨＶ－１（Ｂｏｖｉｎｅ Ｈｅｒｐｅｓ Ｖｉｒｕｓ－１）前早期基因的基因组片段亚克隆ＩＣＰＯ（ＢＨＶ－１Ｉｎｆｅｃｔｅｄ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｏ）的ＤＮＡ序列至表达载体ｐＳＶＤ３,构建质粒ｐＳＶ２．９。将该质粒与ＰＢＬＴＲ－Ｌｕｃ共转染小牛肺细胞,检测转染细胞裂解物的荧光素酶活性,ＢＩＣＰＯ的表达产物可以显著地激活ＢＩＶ ＬＴＲ启动子控制下的荧光素酶基因的表达。根据ＰＳＶ２．９与含有Ｂ     

王不留行环肽研究

从中药王不留行（Ｖａｃａｒｉａｓｅｇｅｔａｌｉｓ）种子中分离并鉴定了４个环肽化合物,分别命名为王不留行环肽Ａ,Ｂ,Ｃ,Ｄ（ｖａｃｃａｒｉｎｓＡ,Ｂ,Ｃ,Ｄ）,其中王不留行环肽Ａ为新环肽化合物。其结构通过光谱和化学方法分别确定为：ｖａｃｃａｒｉｎＡ——ｃｙｃｌｏ－（Ｔｒｐ－Ａｌａ１－Ｇｌｙ－Ｖａｌ－Ａｌａ２）,ｖａｃｃａｒｉｎＢ———ｃｙｃｌｏ－（Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ－Ｐｈｅ１－Ａｌａ－Ｐｈｅ２）,ｖａｃｃａｒｉｎＣ———ｃｙｃｌｏ－（Ｐｒｏ１－Ｇｌｙ－Ｔｙｒ－Ｖａｌ－Ｐｒｏ２－Ｌｅｕ－Ｔｒｐ）,ｖａｃａｒｉｎＤ———ｃｙｃｌｏ－（Ｐｒｏ－Ｖａｌ１－Ｔｒｐ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｖａｌ２）．     

BIV—1—gp120在重组杆状病毒系统中的表达

将中国株ＨＩＶ－１Ｂ亚型ｇｐ１２０全基因序列克隆到杆状病毒转座载体ｐＦａｓｔＢａｃＩ中多角体启动子下游,构建成重组转座载体ｐＦａｓｔＢａｃＩ－ｇｐ１２０,利用细菌／杆状病毒（Ｂａｃ ｔｏ Ｂａｃ）表达系统筛选重组杆状病毒,在昆虫细胞Ｓｆ９中高效表达了ＨＩＶ－１的外膜糖蛋白ｇｐ１２０,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析结果一致,证明表达了２种糖基化程度不同的ｇｐ１２０。     

Genetic Engineering of Tobacco with Double Resistance to Both Virus and Insect

ＧｅｎｅｔｉｃＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｏｆＴｏｂａｃｃｏｗｉｔｈＤｏｕｂｌｅＲｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏＢｏｔｈＶｉｒｕｓａｎｄＩｎｓｅｃｔＬＩＡＮＧＸｉａｏ－ｙｏｕ;（梁晓友）ＭＩＪｉｎｇ－ｊｉｕ;（米景九）,ＰａｎＮａｉ－ｓｕｉ（潘乃隧）,ＣＨＥＮｚｈ...     

竹节花黄斑驳病毒启动了在棉花维管组织中是一个强启动子

用竹节花黄斑驳病毒（Ｃｏｍｍｅｌｉｎａ Ｙｅｌｌｏｗ Ｍｏｔｔｌｅ Ｖｉｒｕｓ,ＣｏＹＭＶ）启动子－ｇｕｓ嵌合基因和ＣａＭＶ３５Ｓ－ｇｕｓ嵌合基因通过根癌土壤杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ（Ｓｍｉｔｈ ｅｔ Ｔｏｗｎｓｅｎｄ）Ｃｏｎｎ）ＬＢＡ４４０４介导分别转入棉花（Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ ｈｉｒｓｕｔｕｍ Ｌ．ｃｖ．Ｊｉｎｇｍｉａｎ７,Ｊ７Ｇ）,诱导再生了棉花转基因植株。Ｇ     

黄地老虎颗粒体病毒DNA片段的克隆与颗粒体蛋白基因的定位

用ｐＵＣ１９质粒作载体,克隆了黄地老虎颗粒体病毒（Ａｇｒｏｌｉｓｓｅｇｅｔｕｍｇｒａｎｕｌｏｓｉｓｖｉｒｕｓ,简称ＡｓＧＶ）ＤＮＡＰｓｔＩ－Ｄ．Ｅ．Ｆ．Ｇ．Ｈ．Ｊ．Ｋ．等７个片段。以［￣（３２）Ｐ］－ｄＣＴＰ标记的油桐尺蠖核型多角体病毒（Ｂｕｚｕｒａｓｕｐｐｒｅｓｓａｒｉａｎｕｃｌｃａｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ简称ＢｓＮＰＶ）多角体蛋白基因为探针,在３７℃条件下对ＡｓＧＶ）颗粒体蛋白基因进行了定位,将其分别定位于ＢｓｌⅡ－Ｓ或ＴＰｓＴＩ－Ａ或Ｂ和ＥｃｉＲＩ－Ａ片段上。     

逆转录病毒运载的人乙肝病毒（adr）X基因在辅助细胞中…

本文报道以人ａｄｒ亚型ＨＢＶ ＤＮＡ（３．２ｋｂ）为模板,经多聚酶链反应（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ,ＰＣＲ）扩增Ｘ基因片段（９４９ｂｐ）,以逆转录病毒体ｆＰＧＶ１为运载体,在它的克隆位点上插入Ｘ基因片段,由此获得逆转录病毒重组体ｆＰＧＶ１－Ｘ,并同时以含反向Ｘ基因顺序ｆＰＧＶ１－ａｎｔｉ－Ｘ及ｆＰＧＶ１为对照,通过对ψ２及ＰＡ３１７细胞的转染和感染,获得了高于１０＾４ｐｆ     

汉滩病毒核壳蛋白（NP）在杆状病毒系统的表达及其免疫原性研究

应用杆状病毒表达载体成功地表达了汉滩病毒７６－１１８株（ＨＴＮＶ）核壳蛋白,将ＨＴＮＶＳ基因插入杆状病毒转染质粒ｐＡｃＹＭＩＢ的多角体基因启动子下游附近,与经Ｂｓｕ３６１酶切线性化的杆状病毒（ＡｃＶＥＰＡ）ＤＮＡ共同转染Ｓ１９细胞,经空斑筛选获得了高效表达ＮＰ的重组杆状病毒（ＡｃＶＨａｎＳ）。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ证实,表达产物与ＨＴＮＶ毒粒ＮＰ分子量均为５０ＫＤ左右,紫外扫     

内皮细胞基因的切应力反应元件

内皮细胞与血流直接接触,血流产生的血管壁切应力直接调节内皮细胞基因的表达,其调节机制就是通过切应力反应元件调节基因的转录。切应力反应元件有кＢ位点、ＴＲＥ（ＡＰ－１）位点、Ｅｇｒ－１位点和Ｓｐ１位点。相关的基因有：ＰＤＧＦ－Ｂ、（人、猫、鼠）、ｔＰＡ（人、猫、鼠）、ＴＧＦ－β１（人、鼠）、Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ－１（人）、ｅｃ－ＮＯＳ（人）、ｃ－ｆｏｓ（人）、ＩＣＡＭ－１（人）、ＭＣＰ－１（人）、Ｖ     

人I型免疫缺陷病毒gag—env嵌合基因在重组痘苗中的表达

Ｇａｇ和Ｅｎｖ蛋白是人Ｉ型免疫缺陷病毒（Ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｔｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ １,ＨＩＶ－１）的结构蛋白,是ＨＩＶ－１诱导机体产生体液免疫和细胞免疫的主要抗原。本实验通过多交亚克隆,将ｅｎｖ基因以正确的三联密码读框插入ｇａｇ基因的下游制备了ＨＩＶ－１ ｇａｇ－ｅｎｖ嵌合基因,并将嵌合基因分别置于痘苗病毒ｐ７．５启动子和牛痘病毒Ａ型包涵体（ＡＴＩ）启动子的下游,经过同源     

白介素10的临床应用研究

１９８９年,Ｆｉｏｒｅｎｔｉｏ等发现Ｔｈ２细胞分泌一种能抑制Ｔｈ１细胞功能的未知因子,称为细胞因子合成抑制因子（ｃｙｔｏｋｉｎｅｓｙｎｔｈｅ－ｓｉｓｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｆａｃｔｏｒ,ＣＳＩＦ）。Ｍｏｏｒｅ等发现ＣＳＩＦ与ＥＢ病毒（ＥＢＶ）中ＢＣＲＦ－...     

鼠Ⅰ型可溶性白细胞介素1受体基因在昆虫细胞的克隆和表达

白细胞介素１（ＩＬ－１）是一种重要的细胞因子,具有广泛的生物学活性。它通过与细胞表面的白细胞介素 １受体（ＩＬ－１Ｒ）结合而起作用。以杆状病毒为载体在昆虫细胞中克隆表达了小鼠Ｉ型可溶性白细胞介素１受体（ｓＩＬ－１　ＲＩ）基因。以ＮＩＨ／３Ｔ３细胞ＲＮＡ为模板,采用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增得到小鼠ｓＩＬ－ＩＲＩ的ｃＤＮＡ,克隆至杆状病毒转移载体ｐＡｃＧＰ６７Ｂ,将转移重组质粒与野生病毒ＡＣＮＰＶ ＤＮＡ共转染昆虫细胞Ｓｆ９,经同源重组得到重组杆状病毒ｒＡＣＮＰＶ。应用经纯化的ｒＡｃＮＰＶ感染昆虫细胞Ｓｆ９,表达获得重组的ｓＩＬ－１ＲＩ。经对亲和层析样品的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析和对ＩＬ－１β生物活性阻断作用实验证实,表达产物能够与其配基结合,并且能够分泌至细胞培养上清中。     

传染性法氏囊病病毒CJ－801bkf毒株VP2 cDNA基因结构的分析

以传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＮ）中国毒株ＣＪ－８０１ｂｋｆ的基因组Ａ片段ｄｓＲＭＡ为模板,经反向转录和ＰＣＲ扩增,克隆了保护性抗原ＶＰ２ｃＤＮＡ基因。经Ｓａｎｇｅｒ法测序,确定了ＶＰ２ｃＤＮＡ基因有１４８４个核苷酸,推测了ＶＰ２氨基酸的顺序,与已报导的６株ＩＢＤＶ毒株ＣｕＩ、ＰＢＧ９８、５２／７０、００２－７３、ＳＴＣ和ＶａｒｉａｎｔＥ的ＶＰ２区做了比较,证明：克隆的ＣＪ－８０１ｂｋｆＶＰ２ｃＤＮＡ基因是全长的,含有正确的起始密码子ＡＴＧ;ＣＪ－８０１ｂｋｆ与毒株Ｃｕｌ和ｐＢＧ９８同源性最高;ＣＪ－８０１ｂｋｆＶＰ２高可变区内两个亲水区的氨基酸顺序与ＣｕＩ、ＰＢＧ９８、５２／７０、００２－７３和ＳＴＣ完全相同;７肽区内第三个丝氨酸残基则变异为精氨酸。这些结果提示,中国ＣＪ－８０１ｂｋｆ毒株应属标准血清Ｉ型ＩＢＤＶ弱毒株。     

鼠I型可溶性白细胞介素1受体基因在昆虫细胞的克隆和表达

白细胞介素１（ＩＬ－１）是一种重要的细胞因子,具有广泛的生物学活性。它通过与细胞表面的白细胞介素１受体（ＩＬ－１Ｒ）结合而起作用,以杆状病毒为载体在昆虫细胞中克隆表达了小鼠Ｉ型可溶性白细胞介素１受体基因,以ＮＩＨ／３Ｔ３细胞ＲＮＡ为模板,采用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增得到小鼠ｓＩＬ－１ＲＩ的ｃＤＮＡ,克隆至杆状病毒转移载体ｐＡｃＧＰ６７Ｂ,将转移重组质粒与野生病毒ＡｃＮＰＶ ＤＮＡ共转染昆虫细胞Ｓｆ９,     

EB病毒胸苷激酶基因的定向克隆

采用异硫氰酸胍（ＧｕＳＣＮ）和硅藻从Ｂ９５－８细胞中快速抽摸板ＤＮＡ。根据ＥＢ病毒（ＥＢＶ）Ｂ９５－８株ＤＮＡ全序列及编码ＥＢＶ胸苷激酶（ＴＫ）的开放读框ＢＸＬＦ１的结构,设计合成一对引物,并在引物的５′一端分别引入ＥｃｏＲＩ和ＰｓｔＩ切点,用ＰＣＲ技术扩增出一含完整的ＥＢＶＴＫ基因的１．８４３ＫｂＤＮＡ片段,ＮｃｏＩ酶切分析鉴定,ＥｃｏＲＩ／ＰｓｔＩ双酶切ＰＣＲ产物和载体,使目的基因定向克隆至选     

乙型肝炎、肝硬变和肝癌中HBxAg的表达及其在肝癌发生中的作用

对３７９例良、恶性肝组织进行的免疫组织化学研究显示,３３％的慢性迁延性肝炎（６／１８）、７６％的慢性活动性肝炎（２６／３４）、９２％的肝硬变（５７／６２）和９７％的肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）（５８／６０）中有ＨＢｘＡｇ表达,阳性率高于ＨＢｓＡｇ或ＨＢｃＡｇ。癌周肝中的ＨＢｘＡｇ阳性率显著高于非癌周肝。与其它２种ＨＢＶ抗原不同,ＨＢｘＡｇ表达在细胞类型上有较明显的选择性,在肝小多角细胞（ＳＰＬＣ）、小细胞性不典型增生（ＳＣＤ）及ＨＣＣ中较强。与ＩＧＦⅡ、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ｃ－ｍｙｃ和ＥＧＦ－Ｒ表达进行的对照研究表明ＨＢｘＡｇ与ＩＧＦⅡ和ｃ－ｅｒｂＢ－２这２种ＨＣＣ发生相关基因的表达关系密切。ＰＣＮＡ染色结果显示ＨＢｘＡｇ阳性组织的细胞增殖活性显著高于ＨＢｘＡｇ阴性组织。我们的结果还表明ＨＢｘＡｇ表达与肝细胞不典型增生的发生和进展有关、提出ＨＢＶＸ基因可能通过其表达产物（ＨＢｘＡｇ）首先激活ＩＧＦⅡ、ｃ－ｅｒｂＢ－２基因,继而引起显著的ＳＰＬＣ增生和ＳＣＤ而参与ＨＣＣ发生的．