热量限制对SH-SY5Y细胞氧化损伤的影响

目的观察热量限制培养条件下,SH-SY5Y细胞抗氧化应激损伤的能力。方法建立过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞损伤模型。体外培养SH-SY5Y细胞,分为对照组、损伤组（50、100、250、500、1 000μmol/L H2O2）、低糖组（2 g/L）、低糖＋损伤组,进行细胞形态观察、测定各组细胞的噻唑蓝（MTT）代谢率、乳酸脱氢酶（LDH）漏出率。结果与对照组比较,（50、100、250、500、1 000）μmol/L H2O2损伤1 h后MTT代谢率测定细胞活力,50μmol/L组与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;其他组与对照组比较,随着H2O2浓度的增加,细胞活力呈递减趋势,差异具有显著性（P〈0.01）;选定250μmol/L H2O2组为损伤应激源。用低糖预处理细胞24 h,给与250μmol/L H2O2损伤1 h后测定MTT代谢率显示,与对照组比较,损伤组活力明显下降,低糖组活力上升（P〈0.01）;与损伤组比较,低糖＋损伤组活力明显上升（p〈0.01）;继续培养至7 h发现,与对照组比较,低糖组活力上升（P〈0.01）;与损伤组比较,低糖＋损伤组活力明显上升（P〈0.01）。进一步检测LDH漏出率显示,损伤1 h后结果显示,与对照组比较,损伤组漏出率明显增加（P〈0.05）,低糖组漏出率稍有减少（P〉0.05）;与损伤组比较,低糖＋损伤组漏出率明显减少（P〈0.01）;继续培养7h显示,低糖7h组与低糖1 h组比较,漏出稍有增多（P〉0.05）,低糖＋损伤组7 h组与低糖＋损伤组1 h比较漏出率稍有增加（P〈0.05）;细胞形态学观察显示,未加损伤之前,低糖组的细胞形态,与对照组比较无明显改变。加入损伤药物1h后的细胞形态与对照组比较无明显改变。加入损伤药物7 h后的细胞形态,低糖组和对照组细胞突起伸展良好细长,损伤组可见细胞数目明显减少,死细胞多,突起回缩,细胞明显变圆,贴壁性不好,透光性差。结论热量限制能提高神经细胞的抗氧化应激能力,增加细胞生存率,降低死亡率。     

低氧预适应对氧糖剥夺损伤SH-SY5Y细胞的保护作用

目的：观察低氧预适应（HPC）对氧糖剥夺（OGD）损伤人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）的保护作用,并探讨其可能机制。方法：SH-SY5Y细胞随机分为4组：正常对照组：常规培养,不进行OGD处理;HPC处理组：将神经元放入低氧培养箱内（2% O₂）,30 min后立即取出,再恢复常氧培养,反复5次;OGD组：无糖培养基、低氧培养箱内（1% O₂）处理细胞10 h,然后复氧复糖培养24 h;HPC+OGD处理组：细胞HPC后,行OGD处理。通过形态学观察,MTT比色法检测细胞存活率,乳酸脱氢酶（LDH）漏出量判断细胞损伤的程度,原位末端标记（TUNEL）法检测凋亡水平,Western blot检测Caspase 3、低氧诱导因子1α（HIF-1α）的蛋白表达。结果：HPC可减轻OGD引起的SH-SY5Y细胞凋亡,降低LDH漏出量,明显增加OGD组SH-SY5Y细胞的活力（P<0.05）。Western blot显示HPC+OGD组Cas-pase 3蛋白的表达明显低于OGD组（P<0.05）;HIF-1α蛋白的表达明显高于OGD组（P<0.05）。结论：HPC对体外培养的SH-SY5Y细胞OGD损伤具有保护作用,其机制可能与上调HIF-1α蛋白有关。     

阿魏酸钠生物学活性——对高糖诱导SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

探讨阿魏酸钠对高糖诱导的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞凋亡的保护作用及其机制。分别通过葡萄糖培养液,以及具有阶梯阿魏酸钠含量的葡萄糖混合培养液进行SH-SY5Y细胞培养,持续时间为48 h。对其中细胞的存活率使用MTT比色法检测;通过Hoechst33258染色观察细胞核形态改变;细胞凋亡率引入流式细胞仪进行测验;离心获得细胞上清液后,使用对其中含有的8-羟基脱氧鸟苷酸(8-OHd G)组分使用酶联免疫吸附法检测。结果显示阿魏酸钠保护组细胞存活率明显升高,细胞核形态明显改善,组细胞早期凋亡率、上清液中8-OHd G的分泌量均明显降低。结果可见,阿魏酸钠对高糖诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与阿魏酸钠的抗氧化作用有关。     

氯化钾或谷氨酸对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞钙离子通透性的影响

用人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系作为研究对象,通过测定细胞存活率(MTT法)和脂质过氧化代谢产物丙二醛(MDA),探讨了氯化钾(KCl)或谷氨酸分别对入神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的损伤作用。结果发现在含Ca     

山楂叶金丝桃苷对高糖诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及机制

为研究金丝桃苷对高糖诱导的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞氧化损伤的保护作用及机制,用含100mmo L/L葡萄糖和分别为20、50、100μmo L/L金丝桃苷的培养基共同孵育SH-SY5Y细胞36 h,检测细胞活力、细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性,细胞内活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及SIRT1和NF-кB基因的mRNA水平和蛋白含量。结果显示金丝桃苷可提高高糖诱导后SH-SY5Y细胞的存活率,抑制细胞LDH释放,清除ROS,降低MDA含量与caspase-3活性,增强SOD、CAT活性和GSH含量;同时,金丝桃苷还能提高SIRT1基因的mR-NA表达及蛋白含量,降低NF-кB基因的mRNA水平和蛋白含量。结果表明金丝桃苷能通过激活SIRT1基因,抑制NF-кB基因保护高糖所致SH-SY5Y细胞的氧化损伤。     

脉络宁对SH-SY5Y细胞氧糖剥夺再恢复损伤的保护作用及其机制研究

目的：研究脉络宁注射液对SH—SY5Y细胞氧糖剥夺／再复氧糖（OGI）／R）损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法：体外培养SH-SY5Y细胞,将细胞随机分为正常组、氧糖剥夺模型组和脉络宁组（1．0mL·L^-1）,建立体外OGD／R细胞模型。倒置显微镜观察细胞形态;MTT法测定细胞存活率;测定乳酸脱氢酶（LDH）漏出量;Western Blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax蛋白表达的变化。结果：与模型组相比,脉络宁能减轻OGD／R引起的SH-SY5Y细胞的损伤,明显提高细胞存活率（P〈0．05）,减少LDH的释放量（P〈0．05）,有效抑制Bax蛋白的表达（P〈0．05）,上调Bcl-2的表达（P〈0．05）。结论：脉络宁注射液对OGD／R引起的SH-sY5Y细胞损伤有保护作用,其机制可能与影响凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达有关。     

低糖低氧对神经干细胞增殖和代谢的影响

目的:本研究旨在探讨低糖低氧对大鼠神经干细胞增殖和代谢的影响。方法:实验采用不同葡萄糖浓度的培养基以及不同的氧浓度进行处理:高糖(4.5g/L)、低糖(1.4g/L);常氧(20%O2)、低氧(3%O2);神经干细胞(NSCs)来自孕13.5d的大鼠中脑,在不同糖浓度下培养至第三代进行低氧处理,分为低糖常氧(L+N)、低糖低氧(L+H)、高糖常氧(H+N)、高糖低氧(H+H)组。神经干细胞在上述四种条件下分别培养1、3、5d后,利用CCK-8检测神经干细胞的增殖情况;生化分析仪测定细胞培养上清液中葡萄糖、乳酸、丙酮酸浓度;RT-PCR方法检测葡萄糖转运蛋白4(GluT4)、葡萄糖激酶(GK)、丙酮酸激酶(PK)和乳酸脱氢酶(LDH)的表达变化。结果:在低糖低氧条件下培养3d时NSCs的数量增加最为明显;低糖低氧条件下,葡萄糖浓度降低最为显著;而丙酮酸浓度在低糖处理组均高于高糖处理组;同样地,在低糖低氧处理组培养上清中乳酸含量增加的幅度最大;此外,在低糖或低氧时Glut4和PK的表达也明显高于对照组。结论:低氧能促进NSCs的增殖,而以低氧和低糖共同作用时更为明显;在低氧低糖条件下,神经干细胞的代谢发生变化,葡萄糖的利用明显增加,主要通过糖酵解途径代谢产能。     

葛根素对大鼠星形胶质细胞的体外保护作用

目的：研究葛根素（Pue)对缺氧缺糖（OGD）、谷氨酸钠（Glu)或反式－氨基－环戊基－ 1,3－二羧酸（trans-ACPD)引起的体外培养大鼠星形胶质细胞损伤的保护作用。方法：用乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒测定细胞LDH漏出,用3－氧－甲基[1-^3H]－D－葡萄糖摄取法测定细胞体积。结果：缺氧缺糖5h、Glu 0.5mmol/L或trans-ACPD 1mmol/L作用星形胶质细胞1h,细胞体积及LDH漏出明显增加;当细胞在缺氧缺糖、Glu或trans-ACPD损伤的同时,加Pue 0.1mmol/L,能明显减少细胞的体积及LDH的漏出。结论：Pue对OGD、谷氨酸或trans-ACPD致大鼠星形胶质细胞损伤有保护作用。     

Neuroligin对SH-SY5Y细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨Neuroligin(NLG)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y增殖和凋亡的影响。方法:体外培养SH-SY5Y细胞24 h后,分别用浓度为50,100,200μmol/L的NLG siRNA转染SH-SY5Y细胞并共孵育24 h,然后采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度NLG siRNA对SHSY5Y细胞增殖率的影响,以及Real-time PCR法检测SH-SY5Y细胞中凋亡基因Bax、Bcl-2、Bcl-x L和caspase-9基因表达水平的变化。结果:与空白对照组及siRNA阴性对照组相比,转染NLG siRNA后SH-SY5Y细胞增殖率显著下降,细胞凋亡相关基因被激活,导致细胞凋亡。结论:NLG对神经元细胞具有保护作用,抑制神经细胞凋亡。     

蜗牛多肽混合物对过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞PCNA表达的影响

采用H2O2诱导人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)细胞损伤,MTT法测定细胞存活率,不同浓度蜗牛多肽混合物(SPM)处理后,Hoechst染色检测细胞凋亡,细胞免疫化学技术和Western blot技术检测细胞PCNA的表达。结果发现1.54 mmol/L H2O2可诱导SH-SY5Y细胞凋亡,PCNA的表达明显降低。经用39 mg/L(SPM-L组)和156 mg/L(SPM-H组)浓度的SPM处理后,SH-SY5Y细胞凋亡明显减少(H2O2VS.SPM-L:58.39±8.67%VS.44.06±4.35%,P0.05;H2O2VS.SPM-H:58.39±8.67%VS.32.45±9.44%,P0.01),同时PCNA的表达呈浓度依赖性升高。提示SPM可抑制H2O2诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,其作用机制可能与其增加细胞PCNA的表达有关。     

应用两种方法诱导SH-SY5Y细胞分化的研究

目的：观察全反式维甲酸（ATRA）处理和ATRA与十四烷酰佛波醇乙酸酯（TPA）序贯处理（ATRA/TPA）对人类神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞增殖抑制和形态分化的影响。方法：应用10μM ATRA处理6天和10μM ATRA处理3天继以80 nMTPA处理3天这两种方法使SH-SY5Y细胞分化;用倒置光学显微镜动态观察SH-SY5Y细胞形态学变化;并用MTT比色法比较两种分化方法对SH-SY5Y细胞的体外抗增殖作用。结果：ATRA处理和ATRA与TPA序贯处理对SH-SY5Y细胞都有抗增值和诱导细胞分化作用,细胞形态发生明显的变化,分化成神经元表型,前者主要表现为两端带有长突起的纺锤体样细胞形态,而后者主要是由细胞体延伸出多个突起的多边形的细胞。ATRA分化6天的细胞的存活率下降为78.7%±2.0%。当去除ATRA后,继续培养1天的细胞存活率上升为89%±0.2%,而继续培养2天的细胞存活率为86.3%±1.4%;ATRA与TPA序贯分化6天细胞存活率下降为75.9±0.4%。当去除TPA后,继续培养一天的细胞存活率为75.5±0.7%,继续培养2天的细胞存活率为74.9±1.0%。结论：维甲酸（ATRA）处理和ATRA与十四烷酰佛波醇乙酸酯（TPA）序贯处理（ATRA/TPA）均能明显诱导SH-SY5Y细胞分化。这两种分化细胞为神经科学的研究提供了优良的体外培养模型细胞,尤其是ATRA与TPA序贯处理能获得分化完全而稳定的神经元样细胞。     

IGF-1对冈田酸所致细胞损伤和Tau蛋白过度磷酸化的保护作用

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对冈田酸(OA)诱导的细胞损伤和tau蛋白过度磷酸化的保护作用。方法:模型组以OA40nmol/L作用于SH-SY5Y细胞24h;IGF-1预处理组分别以100、200和400ng/mlIGF-1预处理2h,再加入OA作用24h。倒置显微镜观察细胞形态学变化;MTT法检测细胞活力;Hoechst染色和分光光度法检测Caspase-3活化程度观察细胞损伤;蛋白免疫印迹法检测tau蛋白磷酸化程度。结果:与模型组比较,IGF-1预处理组细胞形态改善,细胞活力增强,Caspase-3活化程度降低,且磷酸化tau蛋白(Ser396)水平下降。结论:IGF-1可能通过抑制tau蛋白过度磷酸化对OA诱导的细胞损伤具有保护作用。     

热量限制延缓人二倍体成纤维细胞衰老的体外模型

为建立人二倍体成纤维细胞IMR 90的热量限制体外模型 ,分别采用低浓度、正常浓度和高浓度葡萄糖培养条件 ,常规传代培养IMR 90细胞 ,利用综合细胞衰老指标对模型进行评价 .低、正常和高浓度葡萄糖培养条件组IMR 90细胞平均寿限分别为 5 8 3、5 5 0和 4 7 2PDL(群体倍增水平 ) .低浓度葡萄糖培养IMR 90细胞早期增长速度有所减慢 ,但仍保持对生长因子诱导的细胞增殖能力 ,并使晚期IMR 90处于细胞周期S期的比例以及其DNA修复能力显著高于其他条件培养的晚期细胞 .低浓度葡萄糖培养IMR 90晚期细胞的半乳糖苷酶染色阳性率亦明显低于其他条件培养的晚期细胞 .实验结果表明 ,低浓度葡萄糖培养可以延缓IMR 90复制衰老 ,建立了热量限制延缓衰老体外模型 ,为进一步探讨热量限制延缓衰老作用机制的研究打下基础     

Preparation of CoS nanoparticles-cisplatin bio-conjugates and investigation of their effects on SH-SY5Y neuroblastoma cell line

Neuroblastoma is one of the most widely seen under the age of 15 tumors that occur in the adrenal medulla and sympathetic ganglia. Cisplatin, an antineoplastic drug, is a Platinum-based compound and is known to inhibit the proliferation of neuroblastoma cells. Effective applications of nanoparticles in biomedical areas such as biomolecular, antimicrobial detection and diagnosis, tissue engineering, theranostics, biomarking, drug delivery, and anti-cancer have been investigated in many studies. This study aims to prepare the bioconjugates of CoS (cobalt sulfide) nanoparticles (NPs) with cisplatin combination groups and to evaluate their effects on the neuroblastoma cell line. Nanoparticle synthesis was done using the green synthesis technique using Punica granatum plant extract. The size and shape of CoS NPs were characterized by SEM, FT-IR, and XRD. Zeta potential was confirmed by the DLS study. For this purpose, the SH-SY5Y neuroblastoma cell line was cultured in a suitable cell culture medium. Cisplatin 5 µg and different concentrations (Cisplatin + CoS NPs bioconjugates (5, 10, 25, 50, 75 μg) doses were applied to SH-SY5Y neuroblastoma cell lines for 24 h. TAC, TOS and MTT tests were performed 24 h after the application. According to the MTT test results, cisplatin and CoS NP combinations reduced the proliferation of neuroblastoma cells by 78 to 57% compared to the cisplatin control. From the findings obtained; the most effective Bio-conjugate group was Cisplatin 5 μg/mL + CoS 75 μg/mL.