不同剂量鱼藤酮对拟帕金森病模型大鼠行为学及纹状体多巴胺含量的影响

目的观察不同剂量鱼藤酮皮下注射对大鼠行为学及脑纹状体多巴胺含量的影响,探讨鱼藤酮拟帕金森病大鼠模型的适宜造模条件。方法Lewis大鼠分别给予鱼藤酮不同剂量（1．0、1．5和2．0ms／ks／d）皮下注射共28d。应用旷场实验和斜板实验分别测定大鼠的运动功能和协调性,高效液相色谱一电化学法检测大鼠纹状体内多巴胺含量。结果模型组大鼠存活率随鱼藤酮注射剂量的升高呈逐渐下降趋势。鱼藤酮2．0mg／kg组大鼠体重最先明显降低,随着注射时间的延长,各模型组大鼠均出现显著的体重降低。旷场实验结果显示,各剂量鱼藤酮组大鼠跨格次数和站立次数均明显下降。斜板实验结果显示,鱼藤酮1．5mg／kg组大鼠在斜板的停留角度较对照组显著减小。鱼藤酮I．5ms／kg组大鼠脑纹状体内多巴胺含量显著降低。结论鱼藤酮1．5ms／kg皮下注射28d,大鼠出现明显的运动功能障碍和脑内多巴胺含量减少,而死亡率相对较低,因此是建立帕金森病大鼠模型的适宜剂量。     

MES23.5细胞酪氨酸羟化酶的种属来源及其重组酶的活性测定

MES 2 3 5细胞作为研究神经变性疾病的工具 ,是一种杂交瘤性多巴胺能神经元细胞系 ,由大鼠胚胎中脑细胞与小鼠神经母细胞瘤 胶质瘤细胞系N18TG2杂交而成 .其酪氨酸羟化酶 (tyrosinehydroxylase ,TH)的动物种属来源不清楚 .应用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)法从MES 2 3 5细胞系中克隆了编码TH的cDNA ;结构分析表明 ,其cDNA编码区由 14 97碱基构成 ,共编码 4 98个氨基酸 ,与大鼠和小鼠TH的同源程度分别为 93%和 10 0 % .该杂交瘤细胞系表达小鼠TH .将该cDNA亚克隆至原核表达载体pGEX 4T 1,经原核细胞表达、亲和层析得到了电泳纯的基因重组小鼠TH(recombinantmousetyrosinehydroxylase ,rmTH) .改良和建立了一种体外分析TH活性的新方法 .活性分析证明 ,纯化的rmTH能催化L 酪氨酸发生加单氧反应生成L 3,4 二羟基苯丙氨酸 (L 多巴 ) .rmTH的表观分子量为 5 6kD ;其酶促加单氧反应的最适pH值为 7 0 .乙二胺四乙酸能显著抑制此酶的活性 ,而亚铁离子能明显增强其活性 .     

热量限制对SH-SY5Y细胞氧化损伤的影响

目的观察热量限制培养条件下,SH-SY5Y细胞抗氧化应激损伤的能力。方法建立过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞损伤模型。体外培养SH-SY5Y细胞,分为对照组、损伤组（50、100、250、500、1 000μmol/L H2O2）、低糖组（2 g/L）、低糖＋损伤组,进行细胞形态观察、测定各组细胞的噻唑蓝（MTT）代谢率、乳酸脱氢酶（LDH）漏出率。结果与对照组比较,（50、100、250、500、1 000）μmol/L H2O2损伤1 h后MTT代谢率测定细胞活力,50μmol/L组与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;其他组与对照组比较,随着H2O2浓度的增加,细胞活力呈递减趋势,差异具有显著性（P〈0.01）;选定250μmol/L H2O2组为损伤应激源。用低糖预处理细胞24 h,给与250μmol/L H2O2损伤1 h后测定MTT代谢率显示,与对照组比较,损伤组活力明显下降,低糖组活力上升（P〈0.01）;与损伤组比较,低糖＋损伤组活力明显上升（p〈0.01）;继续培养至7 h发现,与对照组比较,低糖组活力上升（P〈0.01）;与损伤组比较,低糖＋损伤组活力明显上升（P〈0.01）。进一步检测LDH漏出率显示,损伤1 h后结果显示,与对照组比较,损伤组漏出率明显增加（P〈0.05）,低糖组漏出率稍有减少（P〉0.05）;与损伤组比较,低糖＋损伤组漏出率明显减少（P〈0.01）;继续培养7h显示,低糖7h组与低糖1 h组比较,漏出稍有增多（P〉0.05）,低糖＋损伤组7 h组与低糖＋损伤组1 h比较漏出率稍有增加（P〈0.05）;细胞形态学观察显示,未加损伤之前,低糖组的细胞形态,与对照组比较无明显改变。加入损伤药物1h后的细胞形态与对照组比较无明显改变。加入损伤药物7 h后的细胞形态,低糖组和对照组细胞突起伸展良好细长,损伤组可见细胞数目明显减少,死细胞多,突起回缩,细胞明显变圆,贴壁性不好,透光性差。结论热量限制能提高神经细胞的抗氧化应激能力,增加细胞生存率,降低死亡率。     

满江红鱼腥藻glnA启动区的克隆及在烟草中的活性表达

利用ＰＣＲ技术获得满江红鱼腥藻ｇｌｎＡ启动区,经克隆测序后构成谷氨酰胺合成酶基因启动子驱动的ＧＵＳ基因表达载体用基因枪经,将表达载体导入烟草中,在其叶片和茎中检测到ＧＵＳ活性,而在烟草根中未见表达。实验结果对真核生物与原核生物间基因表达调控、转录因子识别的研究以及构建衫载体具有一定价值。     

不同能量的培养条件对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞生长的影响

目的建立热量限制的体外模型,观察不同能量培养条件下对人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞生长代谢的影响。方法将人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞分别采用含有低浓度（2 g/L）、正常浓度（3.15g/L）或高浓度（4.5 g/L）葡萄糖的培养基进行常规传代培养,利用MTT代谢率、细胞生长曲线及LDH漏出率等指标观察各组细胞生长情况。结果与正常葡萄糖浓度培养条件下培养的对照组相比,高糖组细胞突起缩短,细胞胞体皱缩,MTT代谢率稍低（0.573±0.001）,LDH漏出率高,细胞生长状态差;与对照组相比,低糖组细胞突起伸展,MTT代谢率较低（0.428±0.003）,LDH漏出率低,细胞生长速度缓慢,但是形态良好。结论高糖培养对细胞有损伤作用,细胞代谢加速,更容易衰老死亡;而低糖培养起到保护作用,在热量限制允许范围内降低培养液的含糖量,不但不会对细胞造成损伤,反而对细胞的代谢及生长起到保护作用,延长细胞的总体寿命。