伊枯草菌素A发酵过程中游离氨基酸的HPLC分析

建立一种快速、高效测定游离氨基酸含量的异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生高效液相色谱法,并利用此方法分析检测iturin A发酵过程中游离氨基酸的动态变化。以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂,采用Venusil-AA(4.6 mm×250 mm,5μm)氨基酸分析专用柱,并优化HPLC检测色谱条件。结果表明:梯度洗脱程序、流动相pH值、色谱柱温对分析时间、色谱峰分离及峰型具有重要影响。当最优色谱条件为:流动相A为0.1 mol/L无水乙酸钠缓冲溶液(pH6.4±0.1)-乙腈(66∶5),流动相B为乙腈-水(4∶1),流速1.0 mL/min,检测波长254 nm,色谱柱温40℃,梯度程序洗脱,35 min内可完全分离16种氨基酸,且各氨基酸在一定浓度范围内线性关系良好(R2均大于0.9986),加标回收率在83.84%-108.02%之间,RSD值均小于2.77%。该方法耗时短、操作简便、准确可靠,具有良好的精密度和稳定性。通过此方法研究分析伊枯草菌素A发酵过程中各游离氨基酸含量变化规律,发现其氨基酸浓度变化规律大致分为三类。     

柱前衍生反相高效液相色谱法测定绞股蓝茶叶中17种游离氨基酸含量

建立2,4-二硝基氟苯柱前衍生化-反相高效液相色谱法测定绞股蓝茶叶中17种游离氨基酸的含量。以Phenomenex Gemini NX C18(4.6mm×250mm,5μm)为分析柱,采用梯度洗脱,流动相A为0.05mol·L-1乙酸钠(pH=6.4,含0.1%N,N-二甲基甲酰胺),流动相B为乙腈-水(1∶1,v/v),检测波长为360nm,柱温35℃;经方法学考察,该方法具有良好的稳定性和重现性。测定结果表明,绞股蓝茶叶中17种游离氨基酸总量为39.79mg·g-1,其中人体必需氨基酸占游离氨基酸总量的36.57%。从氨基酸含量考虑,绞股蓝茶叶具备一定的开发利用价值。     

两种柱前衍生反相高效液相色谱法测定血液和尿液中游离氨基酸

建立以PITC法和AQC法为柱前衍生试剂测定血液和尿液中游离氨基酸含量的测定方法。采用Waters-e2695操作系统,色谱柱为Shim-vp,ODS(250mm×4.6mm,5μm)(日本,岛津公司),以甲醇/乙腈/水和醋酸钠溶液(pH 6.5)为流动相,梯度洗脱。分别采用紫外和荧光检测器对血液和尿液中游离氨基酸进行含量测定。结果显示,两种衍生化方法灵敏度好、分离度高,具有良好的线性范围(r>0.990 0),准确度高(平均回收率为75.1%～127.0%),进样精密度好(RSD为0.12%～3.42%)。PITC法在尿液中游离氨基酸含量测定中显示了良好的测试准确性;而AQC法测定尿液中组氨酸、苏氨酸、脯氨酸超出线性范围,需要对尿样的前处理进行深入研究。     

不同生态系统土壤氨基酸氮的组成及含量

采集于内蒙古白音锡牧场、陕西澄城、杨凌、宜川和太白山等地不同生态系统的 1 2个土样 ,用 6 mol/ L HCl水解 ,经 H型酸性阴离子交换树脂柱纯化后 ,用 Beckman 1 2 1 MB型氨基酸分析仪测定了 1 7种常见氨基酸。测定结果表明 ,不同生态系统土壤酸解氨基酸含量有很大差异 ,表现为草甸土壤 (氨基酸含量为 2 2 83.9μg N/ g) >森林土壤 ( 1 733.6μg N/g) >草原土壤 ( 85 6 .3μg N/ g) >农田土壤 (平均为 2 4 8.5± 37.8μg N/ g) ,并且氨基酸氮与土壤全氮有极显著的正相关关系 ( p<0 .0 1 ) ;在氨基酸中以中性氨基酸所占比例最大 ,平均为 5 3.99% ,其次为碱性和酸性氨基酸 ,分别为 2 4 .94 %和2 0 .5 9% ,含硫氨基酸最少 ,仅为 0 .4 8% .游离氨基酸以草甸土壤最高 ,为 1 4 .5 8μg N/ g,其它土壤在 1 .1 4～ 8.6 7μg N/ g之间 ,大部分在 2～ 3μg N/ g。游离氨基酸不仅数量低 ,而且种类也比酸解氨基酸少。不管是酸解氨基酸 ,还是游离氨基酸 ,在 0～ 2 0 cm土层的含量均大于 2 0～ 4 0 cm土层 ,从不同土壤样品的平均结果看 ,对酸解氨基酸 ,0～ 2 0 cm土层为96 0 .9μg N/ g,2 0～ 4 0 cm土层为 5 2 8.9μg N/ g ;对游离氨基酸氮 ,0～ 2 0 cm土层 6 .2 8μg N / g,2 0～ 4 0 cm土层 2 .2 2μgN/ g。施用氮     

血清游离精氨酸的快速检测

建立快速、准确的精氨酸定量检测方法。采用 6 30 0黄金系统氨基酸分析仪 ,在锂柱生理体液分析方法基础上 ,建立血清游离精氨酸 (ARG)快速测定方法。血清样本经磺基水杨酸沉淀蛋白后取上清液进行色谱分析 ,色谱柱为Beckman公司阳离子交换柱 (12cm× 4 .0mm) ;流动相为 2 0mmol·L- 1 柠檬酸锂水溶液 ,流速为 2 0ml·h- 1 ;比色波长 5 70nm。该法检测精氨酸浓度的线性范围为 5mg·L- 1 ～ 5 0mg·L- 1 ,相关系数 0 .99834,最低检测限 1mg·L- 1 ,重复性 :日内RSD 0 .4 0 % ,日间RSD 0 .5 5 % ,回收率 97.6 7%～ 10 0 .6 7% (平均值 99.0 7% ) ;整个实验过程耗时 2 8min。该法简便、快速、准确、可靠 ,适用于临床和科研工作。     

HPLC法测定感冒退热颗粒中连翘苷的含量

采用DiamonsiltmC18(4 6mm× 2 5 0mm ,5 μm)色谱柱 ;以乙腈 水 (2 0∶80 )为流动相 ,流速为 1mL/min ,柱温为 30℃ ,检测波长为 2 77nm ,以外标法用HPLC测定了感冒退热颗粒中连翘苷的含量。连翘苷在0 10 2 9～ 1 6 4 6 4 μg范围内呈线性关系 ,其在制剂中的平均回收率 (n =6 )为 99 5 5 %。     

HPLC同时测定伤科黄水中6个生物碱的含量

建立HPLC同时测定伤科黄水中6个生物碱的方法。采用XBridge C₁₈色谱柱(3. 5μm,2. 1 mm×100 mm),柱温35℃,测定波长280 nm,以0. 1%磷酸溶液(每100 mL加0. 3 g十二烷基苯磺酸钠)(A)-乙腈-水-磷酸-十二烷基苯磺酸钠(90∶10∶0. 1∶0. 3)(B)为流动相,进行梯度洗脱(0～30 min,B%:35～70; 30～31 min,B%:70～35; 31～40min,B%:35)。经方法学验证,黄柏碱、药根碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱等共6个生物碱分离情况良好,在测定时间段内无明显干扰峰;加样回收率均在95%～115%之间,RSD%均小于5%;精密度RSD%均小于5%;在测定浓度范围内(1～50μg/mL)线性关系良好,相关系数(R^2)大于0. 999。3个不同批次供试品的测定结果较一致。本研究建立的HPLC分析方法可用于同时测定伤科黄水中6个生物碱的含量。     

葡萄色顶枝瑚菌中矿质元素及氨基酸含量的测定

采用原子吸收分光光度法和FDBN柱前衍生高效液相色谱等方法测定了葡萄色顶枝瑚菌中的矿质元素、氨基酸和蛋白质的含量。矿质元素K、Ca、Mg、Cu、Zn、Fe的含量分别是 :4 2 .5 0 0 0mg/g、0 .90 0 0mg/g、0 .4 1 3 0mg/g、0 .0 1 1 2mg/g、0 .0 64 3mg/g、0 .0 3 1 7mg/g、0 .0 73 7mg/g;蛋白质含量为 2 8.1 7% ;氨基酸总量为 2 2 6.91mg/g,其中七种必需氨基酸含量占氨基酸总量的 4 9.2 5 %     

HPLC法测定国产葡萄酒中白藜芦醇的含量

采用HPLC法测定国产葡萄酒中白藜芦醇的含量。色谱条件为 :Shim packCLC ODS柱 (15 0mm× 6 0mm) ,流动相 :0 2mol/LH3 PO4 CH3 CN(2 0∶80pH 3 0～ 3 5 ) ,在 30 6nm测定。测得 15种国产葡萄酒中通化干红葡萄酒的白藜芦醇含量最高为 5 6 0mg/L。该方法灵敏 ,重现性好     

不同品种魔芋精粉中氨基酸含量分析研究

花魔芋和白魔芋精粉中均含有 18种水解氨基酸和 18种游离氨基酸 ,前者水解氨基酸的总量为 2 .4 4 % ,其中必须氨基酸质量分数为 0 .6 2 % ,游离氨基酸总量为 1.10 % ,其中游离必须氨基酸质量分数为 0 .33% ;后者水解氨基酸总量为 2 .0 1% ,其中必须水解氨基酸质量分数为 0 .5 6 % ,游离氨基酸总量为 0 .4 1% ,其中必须游离氨基酸质量分数为 0 .13%。提示白魔芋和花魔芋精粉中氨基酸含量略有差异 ,但此差异不大 ,其品质 ,营养价值及特性等主要取决于魔芋精粉中主要成分葡甘聚糖的含量     

高效液相色谱法测定17AA氨基酸注射液中N-乙酰-L-半胱氨酸和N-乙酰-L-酪氨酸

建立了一种用高效液相色谱测定 17AA氨基酸注射液中N 乙酰 L 半胱氨酸和N 乙酰 L 酪氨酸含量的方法。样品经稀释后 ,直接上机测定 ,其色谱条件为 :WatersSymmetryC18色谱柱 ,流动相为 8.5mmol/LNaAc - 5 %CH3 OH (pH =4.0 ) ,柱温36℃ ,流速 1.0ml/min ,检测波长 195nm ,N 乙酰 L 半胱氨酸在 5 .4mg/L到 5 40mg/L、N 乙酰 L 酪氨酸在 4.9mg/L到 490mg/L之间 ,标准曲线呈良好的线性关系 (r2 >0 .9999)。该方法具有良好的重现性 ,日内相对标准偏差小于 3% ,日间相对平均误差小于 7% ,样品回收率在 90 %～ 110 %之间。该方法与测定氨基酸注射液的其它高效液相色谱法相结合 ,能够对 17AA氨基酸注射液中所有氨基酸成分进行全面检测。     

DNFB柱前衍生化RP-HPLC测定大黄种子氨基酸的含量

采用柱前衍生RP-HPLC法测定大黄种子中氨基酸的含量。6 mol/L盐酸水解得到氨基酸,以2,4-二硝基氟苯(DNFB)为柱前衍生化试剂,梯度洗脱。色谱柱为Gemimi-NX C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相A相为0.1 M乙酸钠水溶液,B相为乙腈-水(1∶1),柱温37℃,检测波长360 nm。结果表明,三种正品大黄种子中均含有17种氨基酸,总量在11.30%~19.26%。该方法灵敏、准确,有良好的重复性和稳定性。     

高效液相色谱法检测发酵液中木糖和木糖醇

建立高效液相色谱检测发酵液中木糖和木糖醇含量的分析方法。色谱柱为HypersilNH2 柱 (4 .6mmi.d.× 2 5 0mm ,5 μm) ,柱温 3 5℃ ,流动相为乙腈—水 (80∶2 0 ) ,流速 1 .0mL .min 1,示差折光检测器检测。木糖和木糖醇在 3 .0～ 60mg.mL 1范围内 ,峰面积与其浓度线性关系良好 (г=0 .9995 ) ;平均回收率分别为 96.0 7% (n =5 ,RSD =0 .5 1 % )和 97.47% (n =5 ,RSD =1 .1 3 % )。方法简便、快速、准确。     

Xterra RP18柱高效液相色谱法快速分离测定氨基酸

建立了一种用XterraRP1 8色谱柱快速分离测定水解氨基酸的方法。所采用的色谱条件是 :WatersAlliance系统 ,柱温 5 6℃ ,流速 1 .8ml/min ,检测波长 2 4 8nm ,梯度分离 ,运行周期 2 5min,柱反压低于 2 0 0 0Psi。在 1 7.5min内分离了包括AMQ、NH3 和牛磺酸在内的 2 1种氨基化合物 ,适应于复合氨基酸注射液、含牛磺酸的氨基酸口服液及水解氨基酸样品的分析测定     

柱前衍生反相高效液相色谱法测定马尾松(Pinus massoniana )针叶中γ-氨基丁酸和17种游离氨基酸

建立了自动在线柱前衍生反相高效液相色谱法同时测定γ-氨基丁酸(GABA)和17种游离氨基酸含量的方法.以邻苯二甲醛-9-芴基甲基氯甲酸酯(OPA-FMOC)为衍生试剂进行衍生,Agilent Hypersil AA-ODS-C18色谱柱分离,梯度洗脱,二极管阵列检测器检测,在19min内分离测定了马尾松苗木针叶中GABA 和17种游离氨基酸的含量.该方法测定氨基酸的回收率高于90.1%,精密度和重现性均较好(相对标准偏差为0.21%～2.81%),经测定,发现马尾松被马尾松毛虫取食后,所测18种氨基酸总量明显降低,从418.3μg · g-1降低到310.4μg · g-1鲜重.     

高效液相色谱法测定郁金香鳞茎中3种内源激素

利用Agilent高效液相色谱仪,建立了同时测定郁金香鳞茎中GA_3、IAA、ABA 3种植物内源激素的高效液相色谱检测方法和异丙醇提取方法。采用外标法,C_(18)反相柱,流动相A(甲醇)∶B(磷酸缓冲液pH=3. 5)=45∶55;流速1 mL·min~(-1);检测波长0～3. 2 min 265 nm,3. 0～4. 5 min 212 nm,4. 5～6. 5 min 218 nm,6. 5～13. 0 min265 nm;柱温20℃进行测定;以异丙醇提取剂和二氯甲烷低温摇床提纯鳞茎中内源激素。整个过程操作简单,只需2. 0～2. 5 h可完成激素提取测定,检测方法线性相关度均在0. 995以上,测出限GA_3200 ng·mL~(-1),IAA5 ng·mL~(-1),ABA 20 ng·mL~(-1);提取方法回收率为84. 812%～95. 679%,相对标准偏差为6. 432%～2. 831%。用此方法提取郁金香的内源激素做出的图基线平稳,准确度高,可得到满意的峰形,且操作简单,各环节激素的损失较少。     

高效液相色谱-柱后光化学衍生法测定变性淀粉中黄曲霉毒素含量的研究

本文采用高效液相色谱 柱后衍生法对变性淀粉中的黄曲霉毒素G2、G1、B2和B1含量进行测定。样品采用乙腈 水(84∶16,v/v)提取,经免疫亲和柱净化,C18色谱柱分离,以乙腈 甲醇 水(10∶30∶60,v/v)为流动相进行洗脱,用HPLC光化学衍生 荧光检测器检测样品含量。结果表明,4种黄曲霉毒素的标准曲线线性均大于0.999 3,回收率96%～104%,黄曲霉G2、G1、B2和B1的检出限分别为0.010 0μg/kg、0.030 0μg/kg、0.010 0μg/kg和0.030 0μg/kg。该方法操作简便,准确度高,适用于变性淀粉中黄曲霉毒素的测定。与柱前衍生法相比,该法能节省检测时间和检测成本,同时减少化学试剂对检测人员的伤害。     

用高效液相色谱法(HPLC)测定肌苷中有关物质和降解产物

用HPLC测定肌苷中有关物质和降解产物 ,与主药有良好的分离效果。色谱柱为HypersilC1 8(2 5 0mm× 4 .6mm ,5 μm) ,流动相甲醇 -水 (甲醇与水体积比为 10∶90 ) ,流速 1mL·min- 1 ,检测波长 2 4 8nm。     

不同产地川佛手中8种化学成分的分析与评价

建立HPLC法同时测定不同产地川佛手中木犀草素、6,7-二甲氧基香豆素、莨菪亭、5,7-二甲氧基香豆素、7-羟基香豆素、橙皮苷、槲皮素、阿魏酸8种成分含量的方法。采用Thermo BDS HYPERSIL C18(250 mm×4. 6 mm,5μm)色谱柱,甲醇-0. 2%冰醋酸水溶液进行梯度洗脱,流速1 m L/min,柱温30℃,检测波长322 nm。在该色谱条件下,川佛手中8种成分分离良好,平均加样回收率为91. 22%～96. 52%,RSD <5. 0%。不同产地的川佛手中8种成分含量存在差异,部分成分之间存在相关性,样品聚为3类。产于四川省宜宾市长宁县老翁镇的川佛手质量最优。该方法可为川佛手的资源开发利用、质量控制以及安全评价提供参考依据。     

陕西三种特种稻米氨基酸及品质分析

以陕西洋县产茉莉香米、红香米和绿香粳米等 3种特种稻米为材料 ,分析了氨基酸及其它品质指标。结果表明 ,茉莉香米、红香米和绿香粳米均含有 1 7种氨基酸 ,氨基酸总含量 (mg/ 1 0 0 g)分别为 730 0、72 70、74 90 ;除Trp外 ,7种必需氨基酸占氨基酸总量分别为 34 .6 %、34 .5 %、34 .8% ;Lys含量 (mg/ 1 0 0g)分别为 5 5 0、5 2 0、5 30 ;粗蛋白质含量分别是 9.94 %、9.2 3%、8.5 2 % ;Cu含量 (mg/ 1 0 0g)分别是 0 .6 2、0 .94、0 .79;Zn含量 (mg/ 1 0 0 g)分别是 1 .99、1 .75、2 .0 2 ;Fe含量 (mg/ 1 0 0 g)分别是 1 .5 5、3.70、4 .5 0 ;直链淀粉含量分别是 1 5 .6 %、3.7%、1 5 .1 % ;胶稠度分别是 33mm、4 0 .6mm、78mm ;糊化温度分别是 6 .1级、6 .8级、7级 ;水分含量分别是 1 1 .2 7%、1 1 .5 5 %、1 2 .5 2 %。这 3种特种稻品质较优 ,具有推广价值