三维能量多普勒超声联合血清HE4、TK1、YKL-40对绝经后出血患者子宫内膜癌的预测价值

摘要 目的：研究三维能量多普勒超声联合血清人附睾蛋白4（HE4）、胸苷激酶1（TK1）、甲壳质酶蛋白40（YKL-40）对绝经后出血患者子宫内膜癌的预测价值。方法：选择我院2019年10月～2022年10月收治的150例绝经后出血患者。将其按照病理检查结果的差异分为子宫内膜癌组31例与子宫内膜良性增生组119例。对所有患者均开展三维能量多普勒超声检查,并检测血清HE4、TK1、YKL-40水平。以受试者工作特征曲线（ROC）分析三维能量多普勒超声联合血清HE4、TK1、YKL-40水平预测绝经后出血患者子宫内膜癌的效能。结果：子宫内膜癌组血流指数（FI）、血管形成指数（VI）、血管形成-血流指数（VFI）以及由该三参数构建的综合指数I相较于子宫内膜良性增生组均更高（均P＜0.05）。子宫内膜癌组血清HE4、TK1、YKL-40水平相较于子宫内膜良性增生组均更高（均P＜0.05）。经ROC曲线分析发现：三维能量多普勒超声联合血清HE4、TK1、YKL-40水平预测绝经后出血患者子宫内膜癌的曲线下面积（AUC）、灵敏度、特异度以及约登指数均高于上述四项单独预测。结论：三维能量多普勒超声联合血清HE4、TK1、YKL-40水平预测绝经后出血患者子宫内膜癌的效能较佳。     

人附睾蛋白4与糖类抗原125在子宫内膜癌诊治中的临床价值

目的:探讨人附睾蛋白4(HE4)与糖类抗原125(CA-125)在子宫内膜癌(EC)诊治中的临床价值。方法:选择60例EC患者、60例功能失调性子宫出血(DUB)患者为研究对象(分别记为EC组、DUB组),以同期体检健康的60名女性为对照(NC组)。采用酶联免疫吸附法(ELISA)、电化学发光法(ECLA)分别检测三组受检者的血清HE4、CA-125水平并比较,绘制ROC曲线评价两指标单项及联合检测对EC的诊断效能。结果:EC组血清HE4[(141.16±46.43)pmol/L]、CA-125[(33.14±7.52)U/mL]水平均明显高于DUB组和NC组(P0.05),DUB组血清CA-125水平[(19.05±7.20)U/mL]明显高于NC组(P0.05),而HE4水平与NC组无显著差异(P0.05)。术前,ECⅢ期患者的血清HE4[(172.04±18.66)pmol/L]和CA-125[(45.05±4.11)U/mL]水平均明显高于Ⅱ期和Ⅰ期患者(P0.05);ECⅠ期的HE4阳性率(67.9%)明显高于CA-125阳性率(P0.05);HE4、CA-125诊断EC的临界值分别为65.42pmol/L和25.53 U/mL;单独检测HE4、CA-125诊断EC的敏感性分别为97.5%、78.3%,特异性分别为95.0%、98.3%,曲线下面积(AUC)分别为0.993、0.954;二者联合检测诊断EC的敏感性、特异性及AUC分别99.2%、95.0%和0.995;与术前比,EC患者术后血清HE4[(45.13±8.06)pmol/L]、CA-125[(11.22±5.50)U/mL]水平均显著降低(P0.05)。结论:血清HE4水平监测对EC的诊断、术前评估及疗效评判具有重要的参考价值,其与CA-125联合检测可提高EC诊断的准确性。     

子宫内膜癌患者血浆溶血磷脂酸、血清癌抗原125及人附睾蛋白4的表达及临床意义

目的:探讨子宫内膜癌患者血浆溶血磷脂酸(LPA)、血清癌抗原125(CA125)及人附睾蛋白4(HE4)的表达及与临床病理特征的关系。方法:选取2014年3月到2016年6月在同济大学附属第一妇婴保健院进行治疗的子宫内膜癌患者76例作为观察组,另选取我院同期收治的子宫内膜增生症患者50例作为良性病变组,再选取同期在我院体检结果为健康的志愿者50例作为对照组。比较三组受试者血浆LPA、血清CA125以及HE4水平。以病理检测结果为金标准,计算血浆LPA、血清CA125、HE4诊断子宫内膜癌的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。分析子宫内膜癌患者血浆LPA、血清CA125以及HE4水平与临床病理特征的关系。结果:观察组的血浆LPA、血清CA125以及HE4水平均高于对照组和良性病变组(P0.05),良性病变组的血浆中CA125水平高于对照组(P0.05)。血浆LPA、血清CA125以及HE4诊断子宫内膜癌的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值比较无统计学差异(P0.05)。子宫内膜癌患者LPA水平与年龄、肿瘤直径无关(P0.05),与淋巴结转移、临床分期、分化程度、疾病类型有关(P0.05);CA125、HE4水平与年龄、疾病类型无关(P0.05),与淋巴结转移、临床分期、肿瘤直径、分化程度有关(P0.05)。结论:子宫内膜癌患者血浆LPA、血清CA125以及HE4水平偏高,LPA、CA125、HE4与部分临床病理参数相关,三指标对子宫内膜癌均有较高的诊断价值。     

YKL-40 和NF-κ B 在子宫内膜异位症中的表达及相关性研究

目的:通过检测人类软骨蛋白39(YKL-40)和核转录因子KappaB(NF-κB)在子宫内膜异位症组织中的表达,探讨二者与子宫内膜异位症的关系及二者的相关性。方法:用免疫组化二步法检测40例子宫内膜异位症(EMS)患者的异位内膜和在位内膜及40例子宫肌瘤患者子宫内膜(对照组)YKL-40和NF-κB的表达,并对检测结果进行统计学分析。结果:YKL-40、NF-κB在子宫内膜异位症患者的异位和在位内膜及对照组内膜中的表达率分别为67.5%、62.5%、35%及88.5%、57.5%、32.5%,差异有统计学意义(P<0.01);在不同月经周期YKL-40表达无统计学意义;在位内膜和正常内膜NF-κB的表达分泌期高于增殖期,差异有统计学意义(P<0.05);YKL-40和NF-κB在三种内膜中的表达具有正相关性,相关系数分别是0.305,0.267和0.457(P<0.01)。结论:YKL-40和NF-κB在EMS发生发展中起重要的作用。     

子宫内膜异位症患者血清可溶性B7-H4的水平及意义

目的:探讨子宫内膜异位症患者血清可溶性B7-H4(sB7-H4)的水平及其临床意义。方法:用ELISA夹心法检测43例子宫内膜异位症患者术前血清sB7-H4的水平及40例子宫内膜异位症患者术后血清sB7-H4的水平,同时选取30例体检健康妇女血清sB7-H4水平作为对照。结果:子宫内膜异位症患者血清sB7-H4水平为(36.23±5.67)μg/L,体检健康者血清sB7-H4水平为(31.24±4.56)μg/L,两者比较差异有统计学意义(P0.01)。手术前,子宫内膜异位症患者血清sB7-H4水平为(36.23±5.67)μg/L,明显高于术后(32.54±4.27)μg/L(P0.05)。子宫内膜异位症患者血清sB7-H4水平与CA125水平呈显著正相关(r=0.531,P0.01)。结论:血清可溶性B7-H4可能与子宫内膜异位症的发病有关,检测血清中可溶性B7-H4水平对内异症的辅助诊断和疗效观察可能具有一定的临床意义。     

eIF-4E 和MMP9 在子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的:探讨真核翻译起始因子4E(e IF-4E)和基质金属蛋白酶9(MMP9)在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义。方法:应用免疫组化法检测e IF-4E和MMP9在16例正常子宫内膜组织、10例增生子宫内膜组织及42例子宫内膜癌组织中的表达,分析其与子宫内膜癌临床病理之间的关系,并研究二者的相关性。结果:e IF-4E与MMP9在三组组织中的表达阳性率逐渐增加,三组间的差异有统计学意义(P0.05),两两比较,正常内膜和内膜癌之间的差异有统计学意义(P0.0167)。e IF-4E和MMP9的表达与子宫内膜癌的FIGO分期、组织学分级及淋巴结转移具有显著相关性(P0.05);子宫内膜癌组织中e IF-4E与MMP9的阳性表达呈正相关(r=0.717,P0.05)。结论:e IF-4E和MMP9在子宫内膜癌组织中表达显著上调,随FIGO分期的增加、组织学分级的增高及有淋巴结转移而增高,可能与子宫内膜癌的发生发展相关,二者的联合检测对于评估子宫内膜癌患者的病情及预后有重要的参考意义。     

子宫内膜癌组织中GDF-15和p-mTOR蛋白的表达及临床意义

目的:研究子宫内膜癌组织中生长分化因子15(GDF-15)和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的表达,并分析其临床意义,为临床治疗提供依据。方法:选取2011年1月到2016年2月我院子宫内膜癌组织75例为研究组,另选取同期正常子宫内膜组织75例为对照组,应用免疫组化法检测GDF-15和p-mTOR蛋白的表达。结果:研究组GDF-15和p-mTOR蛋白的表达阳性率显著高于对照组,比较差异具有统计学意义(P0.05);子宫内膜癌分期Ⅲ-Ⅳ期、淋巴结转移者、病理分级G2+G3、肌层浸润深度≥1/2的GDF-15和p-mTOR蛋白的表达阳性率均较高(P0.05);子宫内膜癌组织GDF-15与p-mTOR蛋白表达呈正相关关系(P0.05)。结论:子宫内膜癌组织中GDF-15与p-mTOR蛋白表达升高,且与肿瘤转移、临床分期、肌层浸润深度有关。     

醋酸亮丙瑞林联合地屈孕酮片对子宫内膜异位症的疗效及对血清HE4、VEGF、TIMP、MCP-1的影响

目的:探讨醋酸亮丙瑞林联合地屈孕酮片治疗子宫内膜异位症的临床疗效及对患者血清人附睾分泌蛋白4(HE4)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)水平的影响。方法:选择我院2014年1月~2017年1月收治的150例子宫内膜异位症患者,按随机数表法分为对照组和研究组,每组75例。对照组予以醋酸亮丙瑞林治疗,研究组在对照组基础上联合地屈孕酮片治疗。比较两组临床疗效,治疗前后血清HE4、VEGF、TIMP、MCP-1、性激素水平、视觉模拟评分(VAS)及SF-36的变化,不良反应的发生情况和随访情况。结果:治疗后,研究组显著总有效率高于对照组(96%vs.85.33%)(P0.05);两组血清HE4、VEGF、TIMP、MCP-1、性激素、VAS水平均较治疗前显著下降,且研究组以上指标均明显低于对照组(P0.05);两组SF-36均较治疗前明显上升,且研究组明显高于对照组(P0.05)。两组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P0.05)。随访结果显示研究组妊娠率及复发率低于对照组(P0.05)。结论:醋酸亮丙瑞林联合地屈孕酮治疗子宫内膜异位症的疗效明显优于单用醋酸亮丙瑞林治疗,其可减轻临床症状,提高妊娠几率,这可能与其有效降低血清HE4、VEGF、TIMP、MCP-1水平有关。     

S100A4在子宫内膜癌中的表达及其临床病理意义

目的:检测S100A4在子宫内膜癌中的表达并分析其与子宫内膜癌临床病理指标的相关性,为子宫内膜癌的临床诊断、治疗及与预后预测提供参考依据。方法:采用免疫组织化学技术检测比较70例子宫内膜癌和40例正常子宫内膜组织中S100A4的表达,并分析子宫内膜癌组织中S100A4的表达与患者临床病理指标和生存期的相关性。结果:70例子宫内膜癌组织中S100A4的阳性表达率为57.14%(40/70),40例正常子宫内膜组织中S100A4的阳性表达率为10%(4/40),显著低于子宫内膜癌组织(P0.05)。子宫内膜癌组织中S100A4的表达与患者的年龄和淋巴结转移无显著相关,但与肿块浸润子宫肌壁深度、分化程度、临床分期均呈显著相关(P0.05)。S100A4呈阳性表达的子宫内膜癌患者的生存率和生存期均较S100A4呈阴性表达病例显著降低或缩短(P=0.01)。结论:子宫内膜癌组织中S100A4呈异常高表达,与子宫内膜癌的发生发展和预后密切相关,可能作为子宫内膜癌诊断和预后预测的参考标志物。     

子宫内膜异位症患者血清中TNF-α、LXA4、YKL-40的表达及其与r-AFS分期和痛经程度的关系

目的:探讨子宫内膜异位症(EMs)患者血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、免疫脂氧素A4(LXA4)、甲壳质酶蛋白40(YKL-40)的表达及其与美国生育协会(r-AFS)分期和痛经程度的关系。方法:选取我院于2017年1月～2018年1月期间收治的EMs患者92例作为研究组。根据r-AFS分期将患者分为I期20例,II期28例,III期26例,IV期18例。根据不同痛经程度将患者分为无疼痛14例,轻度24例,中度32例,重度22例。另选取同期因卵巢良性囊肿、子宫腺肌瘤等行腹腔镜术治疗的患者30例为对照组。检测并比较两组血清TNF-α、LXA4、YKL-40水平;比较不同r-AFS分期和不同痛经程度患者血清TNF-α、LXA4、YKL-40水平;采用Pearson相关性分析方法分析血清TNF-α、LXA4、YKL-40水平与r-AFS分期和痛经程度的相关性。结果:研究组患者TNF-α、YKL-40水平均显著高于对照组,而LXA4水平显著低于对照组(P0.05)。随着r-AFS分期的升高,EMs患者血清TNF-α、YKL-40水平逐渐升高,LXA4水平逐渐降低(P0.05)。随着痛经程度的增加,EMs患者血清TNF-α、YKL-40水平逐渐升高,LXA4水平逐渐降低(P0.05)。Pearson相关性分析显示,EMs患者TNF-α、YKL-40水平与r-AFS分期和痛经程度呈正相关,LXA4与r-AFS分期和痛经程度呈负相关(P0.05)。结论:EMs患者中血清TNF-α、YKL-40水平呈高表达,LXA4呈低表达。上述指标与EMs患者r-AFS分期和痛经程度关系密切,可考虑将其作为临床诊断EMs的生物学指标。     

Ontogenic expression pattern and genetic polymorphisms of the retinol-binding protein 4 (RBP4) gene in Erlang mountainous chickens

Retinol-binding protein 4 (RBP4) is the only circulatory transport protein for vitamin A. Based on the essential role of vitamin A in chicken reproduction, we measured RBP4 mRNA abundance in Erlang mountainous chickens. We also identified and analyzed the gene polymorphism and its effect on reproduction traits among 349 chickens. The expression of RBP4 mRNA showed specific developmental changes and striking differences among tissues. The mRNA abundance was greatest (P < 0.05) in the liver, intermediate in the ovary, kidney, small intestine, oviduct and heart, and lowest in the hypothalamus and pituitary, as compared to all other tissues (P < 0.05). We detected one single nucleotide polymorphism (g.19942455C>G) in intron 2 of the RBP4 gene. Three genotypes (CC, CG and GG) were identified, with a significant effect of genotype on the age at first egg (AFE), first egg weight (FEW), total eggs at 300 days (TE300), highest continuous laying days (HCLD) and average laying interval (ALI). The GG genotype, where chickens display earlier AFE, more TE300, longer HCLD and shorter ALI, would be genetically advantageous and its selection may improve reproduction traits. These results suggested that the RBP4 gene might play an important role in reproduction traits in chickens.     

Frameshift and double-amber mutations in the bacteriophage T4 uvsX gene: analysis of mutant UvsX proteins from infected cells

Summary The bacteriophage T4 uvsX gene encodes a 43 kDa, single-stranded DNA-dependent ATPase, double-stranded DNA-binding protein involved in DNA recombination, repair and mutagenesis. Mutants of uvsX have a DNA-arrest phenotype and reduced burst size. Western blot immunoassay of UvsX peptides made by a number of amber mutants revealed amber peptides ranging from 25–32 kDa. Wild-type UvsX protein was also detected in lysates of cells infected with uvsX amber mutants, suggesting that their mutations are suppressed by translational ambiguity. We investigated the effects of mutations near the 5 end of uvsX. A frameshift mutation was engineered at codon 33. Western immunoblots for UvsX protein demonstrated that the frameshift mutant expresses no detectable wild-type UvsX; instead, a 37 kDa reactive peptide was detected. In order to determine if this peptide represents truncated UvsX protein, the mutation was regenerated in the cloned uvsX gene and expressed in transformed Escherichia coli. Endopeptidase digestion of the 37 kDa protein from the cloned gene generated peptide fragments indistinguishable from those obtained from wild-type UvsX. A double-amber mutant of uvsX was also generated by oligonucleotide site-directed mutagenesis. No UvsX protein was detected in lysates of cells infected with the uvsX-am64am67 double mutant. Plaque size and sensitivity to UV inactivation for both the double-amber and the frame-shift mutants were indistinguishable from those of other uvsX mutants. Mutations in uvsY had no demonstrable effect on efficiency of plating or UV sensitivity of uvsX mutants. Thus, null mutants of uvsX are viable.     

Localisation and regulation of the eIF4E-binding protein 4E-BP3

The cap-binding protein eIF4E-binding protein 3 (4E-BP3) was identified some years ago, but its properties have not been investigated in detail. In this report, we investigated the regulation and localisation of 4E-BP3. We show that 4E-BP3 is present in the nucleus as well as in the cytoplasm in primary T cells, HEK293 cells and HeLa cells. 4E-BP3 was associated with eIF4E in both cell compartments. Furthermore, 4E-BP3/eIF4E association in the cytoplasm was regulated by serum or interleukin-2 starvation in the different cell types. Rapamycin did not affect the association of eIF4E with 4E-BP3 in the cytoplasm or in the nucleus.     

SDH-SV2C-L4融合蛋白的表达及山梨糖脱氢酶活性检测

目的:构建SDH-SV2C-L4融合蛋白表达载体,在大肠杆菌中表达具有山梨糖脱氢酶(SDH)活性的融合蛋白。方法:将C亚型突触囊泡蛋白2大突环L4(SV2C-L4)基因与SDH基因以GGGS柔性接头连接,在大肠杆菌DH5α中表达;用NBT染色和DCIP脱色的方法检测融合蛋白的SDH活性。结果:DNA测序及SDS-PAGE结果显示构建了融合蛋白表达载体,并表达了SDH-SV2C-L4融合蛋白,相对分子质量约80×103;DCIP脱色及NBT染色均检测到融合蛋白的SDH活性。结论:与SV2C-L4融合的SDH仍具有活性,为下一步SV2C-L4活性检测方法的建立及SDH与SV2C-L4的其他相关研究奠定了基础。     

The N terminus of the head protein of T4 bacteriophage directs proteins to the GroEL chaperonin

The head protein of T4 bacteriophage requires the GroEL chaperonin for its insertion into a growing T4 head. Hundreds of thousands of copies of this protein must pass through the chaperonin in a limited time later in infection, indicating that the protein must use GroEL very efficiently and may contain sequences that bind tightly to GroEL. We show that green fluorescent protein (GFP) fused to the N terminus of the head protein can fold at temperatures higher than those at which the GFP protein can fold well by itself. We present evidence that this folding is promoted by the strong binding of N-terminal head protein sequences to GroEL. This binding is so strong that some fusion proteins can apparently deplete the cell of the GroEL needed for other cellular functions, altering the cellular membranes and slowing growth.     

NK4蛋白在大肠杆菌中的表达及其活性研究

NK4蛋白是近年来发现的肝细胞生长因子的最佳拮抗剂。为规模化生产NK4蛋白,将NK4基因插入载体pET-26b(+),构建重组原核表达载体pET-26b(+)-NK4,并转化大肠杆菌Rosseta（DE3）。转化菌经IPTG诱导后以包涵体形式大量表达重组蛋白,占菌体总蛋白的42%。包涵体用盐酸胍溶解后经Ni NTA树脂亲和层析纯化,蛋白纯度约为95%,经Western blot证实为NK4蛋白。纯化的重组蛋白行稀释复性后可抑制Hela细胞的贴壁、迁徙,并诱导其凋亡,证实制备的NK4蛋白具有生物活性。NK4蛋白的成功制备将有助于NK4相关功能的深入研究。     

pQE32-FOXP4ORF质粒的构建及其表达的研究

利用已建立的GenBank数据库提供的已知序列,初步克隆了一个新的人类基因,经国际基因命名委员会批准命名为FOXP4(forkheadboxP4).FOXP4的开放阅读框ORF长4186bp,包含有17个外显子,可以编码一个667个氨基酸的多肽链,蛋白质相对分子质量大小为73.4kDa.为了研究FOXP4基因编码产物在细胞内的作用,构建表达型质粒(pQE32)与FOXP4基因的穿梭表达载体pQE32-FOXP4ORF.利用异丙基硫代-βD-半乳糖苷(isopropyl-βD-t-hiogalactoside,IPTG)对蛋白质的表达进行诱导,在适合的温度和浓度下,经过一定的时间,使细胞大量表达外源蛋白.用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行检测,得出诱导的最佳的浓度和温度,再进行大量诱导,通过电泳分离,将外源蛋白提取出来,从而对基因的功能进行进一步的研究.     

人视黄醇结合蛋白4在杆状病毒系统中的表达及其多克隆抗体制备

旨在利用杆状病毒系统表达、制备人视黄醇结合蛋白(RBP4)并检测其免疫原性。将人RBP4基因片段及信号肽SS64片段亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBac-dual(pFBd)中,获得相应的重组转移质粒;转化大肠杆菌菌株DH10bac,转座后经筛选获得重组穿梭质粒rbacmid,将重组穿梭质粒转染孔板培养的Sf9细胞,获得含人RBP4表达框的重组杆状病毒,经过扩增获得毒种。毒种感染对数生长期的Sf9细胞并表达人RBP4蛋白(I-RBP4),通过SDS-PAGE和Western blotting对表达蛋白进行检测和鉴定。用毒种感染悬浮培养的Sf9细胞制备一批RBP4蛋白,完成SDS、Western blotting的检测及少量的多抗制备。纯化重组蛋白并与E.coli重组人RBP4(E-RBP4)分别免疫家兔。实验结果,酶切鉴定及测序证实重组转移质粒构建正确;成功构建重组RBP4-bacmid;人RBP4蛋白在昆虫细胞获得高效表达。表达的RBP4蛋白可以分泌到培养基中,分子量约为23 kDa,经过计算表达量为100 mg/L;纯化蛋白免疫兔子制备了多抗血清,血清滴度为1∶100 000,高于原核表达的抗体滴度(1∶10 000),与人体提纯蛋白制备的抗体滴度相近。杆状病毒系统高效表达了人的RBP4蛋白,具有较好的抗原性,并获得高亲和力的抗血清,为下一步的人血RBP4检测试剂盒的制备打下了坚实的基础。     

CTLA4Ig融合蛋白在CHO细胞中的表达

CTLA4Ig是人CTLA4胞外区与人免疫球蛋白铰链区、CH2区、CH3区组成的融合蛋白,可以与B7结合,通过阻断B7与CD28的结合,从而阻断B7介导的T细胞活化必需的共刺激信号,可作为免疫抑制剂用于器官移植。将CTLA4Ig融合分子克隆到真核表达载体pCI-dhfr,并用脂质体方法转染到COS7和CHO-dhfr-细胞中,用氨甲喋呤筛选转染的CHO-dhfr-细胞。用RT-PCR、ELISA、细胞免疫荧光染色和Western-blot鉴定重组蛋白的表达。采用A蛋白纯化重组蛋白。     

S100A4在胰腺癌中的研究进展

胰腺癌最重要的生物学特性是容易发生转移和侵袭,致使很多患者无法得到根治性治疗。外科手术是胰腺癌惟一可能治愈的手段,但仅有10-20%的患者有机会手术治疗。错过早期诊断、常规疗法普遍不明显及快速肿瘤扩散共同导致患者的预后不良。胰腺癌的发生、发展受多基因调控。S100A4基因是近几年发现的一种具有促肿瘤作用的基因,目前研究认为该蛋白在胰腺癌的侵袭和转移中起重要作用.本文主要就S100A4与胰腺癌的有关研究进展加以综述。