突触小体相关蛋白SNAP25的原核表达、纯化及鉴定

目的:克隆突触小体相关蛋白(SNAP25)基因,原核表达、纯化并鉴定SNAP25蛋白。方法:PCR扩增SNAP25基因,克隆至表达质粒pTIG-Trx,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,Ni2+-NTA亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE及Western印迹分析肉毒神经毒素BoNT/A轻链对该蛋白的裂解情况。结果:构建了pTIG-SNAP25表达质粒,经IPTG诱导表达,目的蛋白占全菌蛋白的26.2%,表达形式为可溶性表达,表达量达115.4mg/L,纯化后蛋白纯度达95%以上;经SDS-PAGE及Western印迹分析,SNAP25蛋白可被BoNT/A轻链特异降解。结论:克隆了SNAP25基因,在原核系统中表达、纯化并鉴定了重组SNAP25蛋白。     

牛磺酸及微量营养素对大鼠视网膜NOS表达及cGMP含量影响的研究

目的：探讨大鼠补充一定剂量牛磺酸及微量营养素后,能否通过影响视感受器或视中枢ＮＯ合成酶（ＮＯＳ）表达及第二信使（ｃＧＭＰ）合成,影响视觉信号传导。方法：Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为三组,即对照组（正常饲料组）、实验１组（５倍需要量组）和实验２组（１０倍需要量组）,喂养３周后,每组动物再随机分为光照组和暗适应组（平均照度为３．０３ＬＸ）,以正常饲料喂养７２ｈ,大鼠活杀取样,以放射免疫方法分析ｃＧＭＰ含量     

突触泡蛋白2研究进展

突触泡蛋白2(SV2)是一类跨膜糖蛋白,定位于脊椎动物神经元及内分泌细胞,与神经递质的释放、内分泌泡胞吐作用、突触泡稳态的维持、神经肌肉接头的形成及肾上腺素能受体α2C的定位密切相关。最近还发现SV2是肉毒神经毒素BoNT/A的受体,介导BoNT/A进入神经元。SV2可作为突触泡标记蛋白,广泛应用于生物学研究及肿瘤诊断。此外,SV2还是抗癫痫药物的作用靶标。     

A型肉毒毒素中和抗体S25全抗体的表达

目的:用HEK293细胞表达A型肉毒毒素(BoNT/A)中和抗体S25。方法:按哺乳动物偏好密码子设计合成S25可变区编码序列,κ链可变区序列构建到带有轻链恒定区的载体L293,重链可变区构建到带有重链恒定区的载体H293,轻、重链载体共转染至HEK293细胞,进行瞬时表达;用重链C端(HCC)及S25中和表位突变的HCC与细胞培养上清ELISA检测S25表达。结果:测序结果表明正确设计合成了S25可变区编码序列;ELISA结果显示分泌表达上清可以与抗原结合,而不能与S25中和表位突变的HCC结合。结论:按哺乳动物偏好密码子设计的S25编码序列可以用HEK293细胞进行表达,并且具有活性。     

SDH-SV2C-L4融合蛋白的表达及山梨糖脱氢酶活性检测

目的:构建SDH-SV2C-L4融合蛋白表达载体,在大肠杆菌中表达具有山梨糖脱氢酶(SDH)活性的融合蛋白。方法:将C亚型突触囊泡蛋白2大突环L4(SV2C-L4)基因与SDH基因以GGGS柔性接头连接,在大肠杆菌DH5α中表达;用NBT染色和DCIP脱色的方法检测融合蛋白的SDH活性。结果:DNA测序及SDS-PAGE结果显示构建了融合蛋白表达载体,并表达了SDH-SV2C-L4融合蛋白,相对分子质量约80×103;DCIP脱色及NBT染色均检测到融合蛋白的SDH活性。结论:与SV2C-L4融合的SDH仍具有活性,为下一步SV2C-L4活性检测方法的建立及SDH与SV2C-L4的其他相关研究奠定了基础。     

Rho GTPase对细胞骨架及信号通路的多重影响

Rho GTPase最基本的功能是结合和水解鸟嘌呤核苷酸，目前已从晡乳动物中分离出16种不同的Rho GTPases，其中以Rho、Rac和Cdc42最为人们关注。研究发现Rho GTPases参与基因转录、细胞周期进程的调控及多条信号通路的调节，与细胞凋亡、肿瘤侵润及细胞骨架构成关系密切。现普遍认为Rho GTPases是调节细胞功能的一类重要蛋白分子，越来越多的Rho家族成员及其调控的蛋白数量逐渐被发现和认识。