硼酸盐对细菌α-淀粉酶的稳定作用

近年来微生物酶制剂生产剂型多采用液体酶,但液体酶容易失活。为了长期而有效的保持液体酶的酶活力,国内外多采用浓缩酶液,添加钙、钠、多元醇等稳定剂。在过去工作的基础上,进一步试验了硼酸盐和硼酸盐、钙、钠等同时作用于细菌α-淀粉酶时对酶活力     

黄原胶对α-淀粉酶耐热性及其在热变性过程中构象变化的影响

黄原胶（ＸＧ）对α－淀粉酶（ＢＦ－７６５８）具有较好的热稳定作用,０．２％黄原胶α－淀粉酶液７５℃处理７分钟残余酶活为２５．８％,而对照酶液几乎完全失活。酶分子立体构象的变化与其相应的生物活力有着一定的联系。加胶酶在相同条件的部分热变性过程中,酶活损失较少,其分子构象的变化程序也较弱。     

甘薯β—淀粉酶制剂制备与应用的研究

本研究以甘薯为材料,在不影响甘薯淀粉得率与质量的情况下,采用“等电点”法制制备出酶活高、稳定性好,安全无毒的甘薯β-淀粉酶制剂。应用此酶制剂可生产出组成、风味及色泽俱佳的饴糖。     

四株冰川雪细菌产酶能力的初步研究

目的:从青藏高原冰川雪中筛选出一菌多酶的菌株.方法:对恢复出的4个细菌,通过平板透明法研究其产淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶的特性.结果:LHG-C-9为惟一可以产淀粉酶的菌株,所产脂肪酶活性最高.4个菌株均不产蛋白酶.结论:LHG-C-9最适生长温度为15℃,属于耐冷菌.对该菌所产淀粉酶和脂肪酶的性质进行了初步研究,其随产淀粉酶的最适作用温度为50℃;最佳产酶pH值为7.0,该pH值所产酶活为83.9U/mL;在60℃的高温下温浴10min后酶活为0%.该菌株所产脂肪酶的最适作用温度为20℃;最佳产酶pH值为7.0,该pH值所产酶活为9.2U/mL;50℃温浴1h后酶活力不足34%.     

生淀粉酶生产菌株Paenibacillus sp.的筛选和酶的纯化及酶学性质

分离得到1株产生淀粉酶的菌株,通过扩增和测定16S rDNA序列并进行比对,发现是Paenibacillus属的细菌。液体摇瓶发酵结束后,其产生的生淀粉酶比酶活达108.5U/mL。通过饱和(NH4)2SO4沉淀、Sephacryl S-300层析的方法对其所产的生淀粉酶进行分离纯化,得到纯化的酶蛋白比酶活为5112.04U/mg,纯化倍数为14.1,相对分子质量约为1.0×105。该酶以木薯生淀粉为底物时,最适pH5.6,最适温度50℃。金属离子Ca2+、Mg2+对该酶具有激活作用,Zn2+、Cu2+、Fe2+、Ni2+、Mn2+、Co2+和EDTA2-对该酶均具有抑制作用。     

渗透压冲击法快速高效提取青霉素酰化酶

青霉素在临床上的大量使用造成了细菌的耐药性增强,青霉素本身又具有不宜口服、过敏性强等缺点,人们正致力于研究有诸多优良特性的半合成青霉素。大肠杆菌青霉素酰化酶用于裂解青霉素生产6-氨基青霉烷酸(即6-ＡＰＡ,半合成青霉素的重要中间体),该酶的提取、纯化和固定化研究在半合成青霉素工业有重要的意义[1]。大肠杆菌青霉素酰化酶属胞内酶,文献报道多采用超声波法提取,该法得到的粗酶液比活低,一般要经过四、五步纯化才能得到较高比活[2,3,4]的酶液。采用渗透压冲击法提取青霉素酰化酶,得到的粗酶液比活高,只需经过硫酸铵沉淀一步纯化就…     

有机磷农药在水生态系中生物净化机理研究——1.对硫磷的酶解

从氧化塘系统中分离出能降解对硫磷的细菌Pseudomonas sp.代号CTP-01,能将对硫磷分解成对硝基酚和二乙基硫代磷酸酯,并进一步分解对硝基酚。在有Cu++存在的情况下,酶比活可以达到1×104毫微克分子/毫克蛋白/分钟,Cu++对酶有激活作用,并对温度和pH影响有保护作用。对硫磷水解酶反应最适温度为40—50℃,超过50℃活性急剧降低,80℃完全失活。 CTP-01的对硫磷水解酶大部分是同膜片结合状态存在,超声破碎的无细胞酶制剂中,只有37.2%的活力存在于可溶性蛋白部分。       

酶组织化学最佳染色方法的探讨

酶组织化学用来显示酶在组织或细胞内的活性及定位,酶组织化学能否成功很大程度取决于材料的制备,固定液能很好的保存组织的形态结构,使酶的活动保持在生活时的位置,定位准确。但实验室常用固定液可导致酶部分或完全失活。故酶组织化学染色几乎全使用冰冻切片。但冰冻切片存在三方面不足：①损伤结构的完整性,使酶不能很好定位,②可溶性酶可因弥散而失活,③不能做回归性研究。且作经多年研究发现：因各种酶有其特定的生物学特性,对化学试剂的敏感性不同,一种实验方案不能适用于所有的酶。     

精制三酶试制投产

湖南津市酶制剂厂去年试制成功精制糖化酶,精制α—淀粉酶、葡萄糖异构酶。在食品工业的制糖中,用在含饴糖、口服葡萄糖、葡萄糖异构糖的生产中。目前国内生产的酶制剂多为粗制品,由于含过量的硫铵(提取过程中加入),     

β-葡萄糖苷酶产生菌的分离筛选

从土样中分离筛选到3株β-葡萄糖苷酶产生菌,其中As.n.XD-1酶活力最高,pNPG酶活为19.67U,纤维二糖酶活为31.47U。该β-葡萄糖苷酶在pH4-6及4-60℃之间较稳定;4℃存放60d酶活仍可保留90.6％。粗酶液中还含有α-葡萄糖苷酶（0.02U）、淀粉酶（1.13U）、纤维素酶（0.16U）和CMC酶（1.18U）。     

α—淀粉酶发酵工艺的研究

α—淀粉酶产量最高,用途最广。提高α—淀粉酶生产菌株的产酶活力主要有两个重要问题,一是具有产高酶活的菌株,二是能准确地把握工艺生产条件。本文主要报告α—淀粉酶高产菌种86315的发酵培养基是氮源以棉籽饼粉替代豆饼粉,经正交试验确定最佳发酵培养基配方。待喷发酵液加入0.5％—1％的硼砂,对贮存中的α—淀粉酶有明显的稳定作用,以及在发酵过程中控制好补料等发酵工艺的研究。     

一株布氏乳杆菌所产类细菌素的初步纯化与部分特性

从分离自内蒙古传统乳制品的67株乳酸菌中筛选得到一株产生类细菌素的布氏乳杆菌KLDS1.0364, 对其所产类细菌素进行初步分离纯化, 同时研究其所产类细菌素的生物学特性。KLDS1.0364无细胞发酵上清液经阳离子交换树脂纯化后, 采用tricine-SDS-PAGE测定类细菌素分子量, 并测定了类细菌素的部分特性。KLDS1.0364产生的类细菌素分子量约为21.6kD, 对热和pH值稳定, 可被多种蛋白酶失活, 不能被过氧化氢酶和α-淀粉酶失活。KLDS1.0364产生的类细菌素的作用方式是杀菌, 且抑菌谱广, 可抑制多种革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌。     

家蚕肠道产淀粉酶细菌的分离鉴定及其酶基因的克隆与表达

从家蚕(Bombyx mori L.)5龄幼虫肠道分离鉴定产淀粉酶细菌菌株以用作微生态制剂的研究,并对该菌α-淀粉酶基因进行克隆、序列分析及在大肠杆菌中原核表达.通过含淀粉NA培养基筛选分离得到产淀粉酶菌,通过形态学观察及16S rDNA序列分析鉴定其种属,DNS法测定酶活,并设计了淀粉酶基因引物进行克隆,构建了DZ-...     

一株布氏乳杆菌所产类细菌素的初步纯化与部分特性

从分离自内蒙古传统乳制品的67株乳酸菌中筛选得到一株产生类细菌素的布氏乳杆菌KLDS1.0364,对其所产类细菌素进行初步分离纯化,同时研究其所产类细菌素的生物学特性.KLDS1.0364无细胞发酵上清液经阳离子交换树脂纯化后,采用tricine-SDS-PAGE测定类细菌素分子量,并测定了类细菌素的部分特性.KLDS1.0364产生的类细菌素分子量约为21.6kD,对热和pH值稳定,可被多种蛋白酶失活,不能被过氧化氢酶和α-淀粉酶失活.KLDS1.0364产生的类细菌素的作用方式是杀菌,且抑菌谱广,可抑制多种革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌.     

以Fe(III) 改性胶原纤维为载体固定过氧化氢酶

将胶原纤维用三价铁改性后作为载体,通过戊二醛的交联作用将过氧化氢酶固定在该载体上。制备的固定化过氧化氢酶蛋白固载量为16.7 mg/g,酶活收率为35％。研究了固定化酶与自由酶的最适pH、最适温度、热稳定性、贮存稳定性及操作稳定性。结果表明：过氧化氢酶经此法固定化后,最适pH及最适温度与自由酶相同,分别为pH 7.0和25 ℃;但固定化酶的热稳定性显著提高,在75 ℃保存5 h后,仍能保留30％的活力,而自由酶则完全失活;固定化酶在室温下保存12 d后,酶活力仍保持在88％以上,而自由酶在此条件下则完全失     

饲料酶制剂的生产和应用

本文就涉及饲料酶制剂生产和应用中的发酵方法;酶制剂的耐热和贮存稳定问题;酶活力测定和表示方法;使用酶制剂可降低饲料生产成本;酶制剂在环境保护中发挥重要作用共五个方面进行了论述。由于酶制剂用作饲料添加剂的良好表现,预测未来我国饲料酶制剂将持续发展。     

工业酶生产和应用开发

前言 大规模工业化生产酶已有数十年历史,并开发出复杂的基础技术:从自然界筛选微生物;用诱变得到高产高纯产物的生产菌,在诱导酶形成的培养基和培养条件下培养选得的微生物;澄清,浓缩及稳定发酶液以产出酶制剂。     

红曲霉葡萄糖淀粉酶色氨酸残基的修饰与酶活力的关系

试验了几种蛋白质侧链修饰剂对锈色红曲霉(Monacus rubiginosus Sato)的葡萄糖淀粉酶(EC3．2．1．3)的影响,发现以N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)选择性氧化能使酶失活,预先加入酶的底物可溶性淀粉或麦芽糖对酶有保护作用,表明色氨酸残基对于该酶的活性是重要的,可能位于酶的结合部位或其附近。     

淀粉酶高产菌株的筛选、紫外诱变及产酶条件优化

【背景】提高淀粉酶的稳定性进而适应多变的工业生产条件,是淀粉酶开发的重要方向。【目的】淀粉酶在食品加工、布料退浆、酿酒制造、养殖等领域都有广泛的应用,但目前生产用的淀粉酶来源单一,在溶液中的稳定性较差,需要扩大淀粉酶来源,增强酶的稳定性,使其进一步适应复杂多变的工业生产环境。【方法】利用选择培养基在三门峡黄河湿地表层土样中筛选得到20株具有淀粉酶活性的菌株,采用杯碟法检测粗酶液的活性并对其中活性最高的3株菌进行鉴定,对其中酶活性最高的菌株运用紫外照射的方式进行诱变并测定致死率,选择突变后酶活最高的菌株,优化培养条件,并测定突变后淀粉酶的活性和作用条件范围。利用3,5-二硝基水杨酸（3,5-dinitrosalicylic acid,DNS）法测定诱变前后酶活并进行活性对比。【结果】在三门峡黄河湿地表层土壤中筛选得到3株淀粉酶活性较高的菌株并编号S03、S08和S17。根据16S rRNA基因序列比对、革兰氏染色形态观察结合生理生化分析显示,菌株S03、S08和S17分别为Aeromonas、Exiguobacterium和Bacillus,其淀粉酶最适NaCl浓度是10%-12%,最适...     

鸡粪堆肥的酶活特性研究

目的研究以鸡粪和菌糠为主体物料在高温堆肥发酵过程中纤维素酶、木聚糖酶、淀粉酶以及蛋白酶酶活性的变化。方法通过测定各酶活动态变化,了解各酶在鸡粪堆肥中的变化规律。其中纤维素酶和淀粉酶采用DNS比色法,木聚糖酶活采用还原糖法,蛋白酶活采用福林法进行测定。结果随温度不断变化和酶本身的性质以及物料的作用机制机制不同,酶活动态变化表现出一定的差异性。物料发酵温度在0～3 d时迅速上升,在3～18 d持续高温期,15 d之后下降趋于恒定。各酶活变化基本上符合先上升至峰值再下降,最后保持恒定的规律。其中各酶发生高效反应的时间具有不一致性,纤维素酶活在第18天时达到峰值,淀粉酶活在第9天时达到峰值,木聚糖酶在第12天时达到峰值,而蛋白酶活在第3天时即达到峰值。结论酶对物料腐熟具有重要用,本研究结果为堆肥腐熟提供参考指标,对优化堆肥工艺具有重要意义。