鸡贫血病毒衣壳蛋白基因克隆、测序和比较

VP1 gene of chicken anemia virus in liver of infected chicken from Harbin was amplified by polymerase chain reaction and cloned into pUC18The recombinant vector was identified by restriction digestionThree clones were sequenced with sequencing kit ABI PRISM by TaKaRa CoLtdThe open reading frame of the VP1 gene is made up of 1,350bpIt encodes 449 amino acid residuesIt was found that there is an abundant Arg region from position 3 to 46Its isoelectric point is up to 107 because of its abundant basic amino acidsComparing this Harbin isolate with 26p4,Cux-1,82-2,Del-rose,A2,Connb,L-028,TR20,CIA-1,CAV15,2A9 showed there were 168 nucleoside differences which lead to 26 amino acid changes of the VP1The amino acid changes may influence the antigenic character of different VP1sIt was also found that there is a hyper-mutation region from amino acids position 139-157,its mutation frequency is up to 42% among these CAV's VP1s.It is necessary to research the function of this region     

转录因子Foxo3a高表达对小鼠T淋巴瘤EL-4细胞周期和凋亡的影响

为了研究转录因子Foxo3a高表达对小鼠T淋巴瘤EL-4细胞周期和凋亡的影响,采用电穿孔法将真核表达载体pEGFP-N1/Foxo3a转染小鼠T淋巴瘤细胞系EL-4细胞,并通过聚合酶链式反应和免疫印迹法分别检测Foxo3a mRNA及蛋白表达。转录因子Foxo3a高表达后,采用细胞计数法绘制其细胞生长曲线;采用荧光显微镜法及流式细胞仪定性和定量观察典型EL-4细胞凋亡形态特征、细胞凋亡百分率及细胞周期变化情况。结果表明,转录因子Foxo3a真核表达质粒pEGFP-N1/Foxo3a经酶切鉴定及测序检测序列正确。转染pEGFP-N1/Foxo3a的小鼠EL-4细胞表达Foxo3a mRNA和蛋白水平显著升高。Foxo3a高表达明显抑制EL-4细胞的增殖能力,并使EL-4细胞发生明显G2期阻滞(P<0.001)。Foxo3a基因高表达后,荧光显微镜可以观察到典型凋亡的细胞形态。同时,EL-4细胞凋亡百分率显著升高(P<0.01)。结果提示,Foxo3a高表达可以有效抑制小鼠T淋巴瘤细胞体外细胞增殖,使细胞周期G2时相阻滞,并具有诱导细胞凋亡的作用。     

黑曲霉pepB基因缺失菌株的构建及其功能分析

以黑曲霉(Aspergillus niger)GICC2773基因组DNA为模板,用PCR方法分别扩增pepB基因中的上游约1．4kb和下游约1．3kb两段DNA序列,将此两段序列按同一方向分别插入质粒pMW1中潮霉素抗性基因(hph)表达单元的5′和3′端,构建成重组质粒pMW1-pepB,用于通过同源重组靶向破坏基因组中的pepB基因。同源重组则采用原生质体-PEG方法,将酶切pMW1-pepB得到的线性片段转化A．niger GICC2773菌株,通过潮霉素选择平板得到62个Hgy抗性转化子,然后采用PCR方法从这些抗性转化子中筛选到1个由于同源重组产生的pepB基因缺失突变菌株pepB29。功能分析显示该突变株的酸性蛋白酶活性有明显下降,外源蛋白漆酶的分泌表达有所提高。     

荷斯坦奶牛红毛性状的基因检测及红毛形成机制的探讨

荷斯坦奶牛黑素皮质素受体1(MC1R)基因310G缺失突变产生e等位基因,导致红白花毛色。实验利用PCR-RFLP和DNA测序技术建立了荷斯坦奶牛红毛性状的基因检测方法,并在4个荷斯坦奶牛全同胞家系中得到了证实,可见其可用于鉴定携带e等位基因的种公牛,以指导奶牛育种。通过分析黑素皮质素(MC)受体蛋白家族序列,找到了MC1R蛋白结构与功能的区域(TM3、TM6、TM7和EL3)。利用VHMPT软件预测MC1R突变蛋白的结构,结果显示其丢失了TM3、TM6、TM7和EL3区,也失去了与α-促黑素(α-MSH)结合的区域,最终导致红毛的产生。     

衰变加速因子结构基因及调控

衰变加速因子ＤＡＦ是补体激活调节剂（ＲＣＡ）家族中重要成员之一,在体内的存在形式有３种,分泌型ＤＡＦ,跨膜型ＤＡＦ和ＧＰＩ锚链型ＤＡＦ,ＤＡＦ的分子结构,基因结构,合成及基因表达调控等方面的进展近颇为迅速,ＤＡＦ分子的研究,使人们了解在细胞表面控制补全活性的分子基础,ＤＡＦ基因克隆表达及转基因动物研制成功,为ＤＡＦ的研究和应用开辟了广阔的前景。     

马传染性贫血病毒基因非编码区LTR嵌合克隆的构建

在已有全长感染性克隆pLGFD3-8和pD70344的基础上,根据马传贫弱毒疫苗致弱过程中不同代次毒株LTR序列的分析,在LTR U3区选取特定的酶切位点对EIAV非编码区LTR基因进行了部分替换.将替换的全基因克隆转染驴胎皮肤细胞(FDD)并以驴白细胞(DL)传代,用逆转录酶活性检测、RT-PCR方法及Real-time RT-PCR验证其感染性.结果发现,其衍生病毒感染上述两种细胞均出现明显的细胞病变;细胞培养上清可检测到RT酶活性和RT-PCR阳性.电镜下可见大量典型的EIAV颗粒.pLGFD9-12嵌合克隆衍生病毒与其父本克隆衍生病毒pLGFD3-8具有相似的复制水平,pLGFD9-12嵌合克隆衍生病毒在DL细胞上复制水平略高于FDD细胞.此结果为进一步深入研究LTR对马传染性贫血病毒复制水平和毒力的影响奠定了基础.     

牛黑素皮质素受体1(MC1R)基因与毛色表形的研究

牛MC1R基因不仅与毛色有关, 而且与牛乳中乳蛋白的含量有关。利用PCR-RFLP和DNA测序技术分析了中国荷斯坦黑白花牛, 中国荷斯坦红白花牛, 鲁西黄牛和渤海黑牛共4个品种的MC1R基因。共检测出3种等位基因(E^D, E⁺, e)。中国荷斯坦黑白花牛主要是E^D和E⁺等位基因(E^D=0.12、E⁴=0.80); 渤海黑牛也主要是E^D和E⁺等位基因(E^D=0.52、E⁺=0.47); 中国荷斯坦红白花牛和鲁西黄牛大多为e等位基因(e=0.95)。中国荷斯坦红白花牛和鲁西黄牛还存在E⁺/e基因型。由此推测E^D和E⁺等位基因导致黑色素合成。另外发现牛MC1R基因编码区725处存在一重要的SNP(单核苷酸多态性)。     

保护剂与抑菌剂对生物肥料保存期的影响

在固氮菌、磷细菌、钾细菌等菌剂中加入 4 %的糖蜜、2 %的麸皮可显著提高产品的保存期。在同等条件下 ,与对照相比 ,固氮菌的保存期可提高至 12个月以上 ,磷细菌的保存期可提高 1倍以上 ;在以未灭菌的草炭作载体的微生物制剂中 ,同时添加 4 %糖蜜、2 %麸皮及 2‰～ 4‰苯甲酸钠、0 .5‰～ 1‰的多菌灵 ,与对照相比 ,产品的保存期可提高 5 0 %以上。     

绵羊肺腺瘤病毒中国NM株部分gag基因的克隆与序列分析

参照GenBank中已发表的绵羊肺腺瘤病毒的基因序列,设计合成一对引物,对绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)内蒙株的gag基因中主要编码CA蛋白的基因段进行PCR扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳分析,呈现一条约897bp的特异条带,将其回收后克隆入pMD—18T载体中,并进行序列测定与分析。结果表明,与南非株(基因序列号NC—001494)的gag基囚序列比较,核苷酸同源性为83％,推导出的氨基酸同源性为84％。与美国株(基因序列号AF105220)的gag基因序列比较,核苷酸同源性为81．5％,氨基酸同源性为83％。这是我国首次报道的绵羊肺腺瘤病毒的gag基因的一段序列,为我国科研工作者进行更深入的研究奠定基础。     

保护剂与抑菌剂对生物肥料保存期的影响

在固氮菌、磷细菌、钾细菌等菌剂中加入4％的糖蜜、2％的麸皮可显著提高产品的保存期。在同等条件下,与对照组相比,固氮菌的保存期可提高至12个月以上,磷细菌的保存期可提高1倍以上;在以未灭菌的草炭作为载体的微生物制剂中,同时添加4％糖蜜、2％麸皮及2‰-4‰苯甲酸钠、0．5‰-1‰的多菌灵,与对照相比,产品的保存期可提高50％以上。