EMS对D6-2转基因小鼠骨髓组织细胞内lacⅠ靶基因的诱变率和诱变谱

对D6 -2转基因小鼠骨髓组织细胞内lacⅠ靶基因的自发突变率以及甲基磺酸乙酯 (ethylmethanesulfonate ,EMS)诱发的突变率和突变谱进行了研究 .将带有lacⅠ靶基因的pSPORT1质粒通过酶切、环化和转化DH1 0B宿主菌的方式从经和未经诱变处理的D6- 2转基因小鼠骨髓组织基因组DNA中回收出来 ,lacⅠ靶基因突变体用M9/L选择性平板进行正向选择 .结果从经EMS诱变处理的小鼠基因组DNA中回收出的约 1 1 935个pSPORT1质粒中筛选到 6个lacⅠ-突变体 (EMS诱发的突变率为 5 0× 1 0 ^-5 ) ,而从对照组小鼠基因组DNA中回收出的约 1 1 6 4 9个质粒中没有检测到lacⅠ^-突变体 (自发突变率则小于 8.6× 1 0 ^-5 ) .对 6个突变体的 2个突变高发区进行了序列分析 ,共检测出 1 6个点突变 .其中 ,碱基置换突变为主要突变类型 ,占 87.5 % ( 1 4) ,其余 1 2 .5 % ( 2 )的突变为缺失突变 .在碱基置换突变中 ,颠换占6 4 % ;而转换仅占 36 % ,这既不同于用BigBlue 转基因小鼠所测到的lacⅠ基因在小鼠体内的自发突变谱 ,又不同于用穿梭载体 /哺乳动物细胞系统所测到的EMS在体外的诱变谱 .而突变发生的位点则与其他的研究报道相同 ,主要出现在CpG二核苷酸 ,占全部点突变的 45 % .这些结果表明 :( 1 )基于含 pSPORT1质粒的D6- 2转基因小鼠是一个能用于研究体内基因突变的分子机理和评估化学物质的遗传毒性作用的有效模型 ;( 2 )EMS在体内和体外的诱变特性似有本质的不同 ,但这有待于进一步的研究证实     

环境和遗传因素与慢性代谢性疾病的人群研究

几十年来我国居民经历了快速的营养转型,与不健康的膳食和生活方式相关的＂致肥环境＂,以及遗传倾向是导致我国慢性代谢性疾病如代谢综合征和2型糖尿病快速流行的主要推手。然而,我国目前非常缺乏针对导致慢性代谢性疾病的主要遗传和环境危险因素而开展的系统研究。在过去若干年中,通过开展基于社区人群的流行病学研究,本课题组发现了多个与代谢性疾病相关的基因变异、环境因素和生物标记物。与此同时,通过对代谢综合征或2型糖尿病患者进行的营养干预,发现添加亚麻子或其衍生物木酚素、核桃,以及用糙米替代白米能不同程度地改善代谢综合征或血糖控制。总之,所有努力旨在增进对导致中国人代谢性疾病高易感性相关的病因和机制的理解,同时也希望为疾病的预测和预防提供新的思路和线索。     

EMS-induced mutant frequency and spectrum in bone marrow of D6-2 transgenic mice

Ｔｈｅｌａｃｋｏｆｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｃａｐａｂｌｅｏｆｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇａｎｄｉｓｏｌａｔｉｎｇｍｕｔａｔｅｄｇｅｎｅｓｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙｍａｋｅｓｉｔｄｉｆｆｉｃｕｌｔｔｏｐｅｒｆｏｒｍｔｈｅｓｔｕｄｙｏｎｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓｉｎｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｇｅｎｅｓｏｆｈｕｍａｎａｎｄａｎｉｍａｌ.Ｔｏｄａｔｅ,ｔｈｅｓｅｐｒｏｂｌｅｍｓｈａｖｅｂｅｅｎｓｏｌｖｅｄｏｎｌｙｐａｒｔｉａｌｌｙｆｏｒａｖｅｒｙｌｉｍｉｔｅｄｎｕｍｂｅｒｏｆｌｏｃｉ,ｆｏｒｅｘａｍｐｌｅ,ｈｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅ…     

一种新型的双功能体内突变检测系统的建立

将含有两个LacI靶基因的穿梭质粒pMCLacI/neo整合入小鼠的基因组中 ,建立一种能同时分析体内表达基因和沉默基因的双功能的新型体内突变检测系统 ,使在体内比较分析不同组织、器官中表达基因和沉默基因的突变谱和突变率成为可能。486个经显微注射过 pMCLacI/neo质粒的C5 7BL/ 6小鼠的受精卵 ,分别移植入 18只假孕母鼠的输卵管中 ,产下 32只存活小鼠 ,进一步检测证实 :(1)有 5只小鼠在基因组中整合有 pMCLacI/neo基因 ;(2 )该质粒中的两个LacI靶基因 ,只有一个表达 ;(3)能有效地从小鼠基因组中回收 pMCLacI/neo基因。因此 ,成功建立了pMCLacI/neo的转基因小鼠品系 ;可以将该小鼠用于整体动物水平研究表达基因和沉默基因突变机制的模型 ;该模型为一种具有双功能的新型体内突变检测系统     

pMCLacI／neo转基因小鼠靶基因突变检测的新策略

由于pMCLacI／neo转基因小鼠含有两种不同状态的LacI靶基因,有别于以往所建立的只含有一种靶基因的系统。因此,建立一种能快速、有效的分析这两种靶基因的检测方法,成为该转基因小鼠建立后的又一新课题。通过适当方法将pMCLacI／neo中两种LacI靶基因分析后,采用了新近建立的M9／L正向选择系统进行检测,并用已知的LacI基因突变作为阳性对照,验证该策略的可行性。实验结果提示,M9／L正向选择系统可应用于pMCLacI／neo转基因小鼠中两种LacI靶基因的检测;实验中所建立的突变检测方法快速、有效。     

pMCLacⅠ/neo转基因小鼠靶基因突变检测的新策略

由于pMCLacⅠ/neo转基因小鼠含有两种不同状态的LacⅠ靶基因,有别于以往所建立的只含有一种靶基因的系统.因此,建立一种能快速、有效地分析这两种靶基因的检测方法,成为该转基因小鼠建立后的又一新课题.通过适当方法将pMCLacⅠ/neo中两种LacⅠ靶基因分开后,采用了新近建立的M9/L正向选择系统进行检测,并用已知的LacⅠ基因突变子作为阳性对照,验证该策略的可行性.实验结果提示,M9/L正向选择系统可应用于pMCLacⅠ/neo转基因小鼠中两种LacⅠ靶基因的检测;实验中所建立的突变检测方法快速、有效.     

nm23基因与肿瘤转移

ｎｍ２３基因位于人１７号染色的着丝点附近,其蛋白产物为１７ｋＤ的核苷二磷酸激酶,许多研究表明ｎｍ２３基因的表达水平和恶性肿瘤的转移有关,但也有与此相左的报道,本综述了ｎｍ２３基因的研究现状及其与肿瘤转移的关系。