成体干细胞的可塑性

随着大量实验不断证明成体干细胞可塑性的存在,人们便试图从理论上对该现象的发生机制作出解释,以期更好地开展研究与应用。该探讨成体干细胞可塑性的相关研究进展和应用前景中存在的诸多问题。     

黏着斑激酶的结构与功能

黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)是细胞内一种重要的信号转导分子,参与多条重要信号通路和多种细胞生物学行为的调控。该文结合当前的研究进展,总结了FAK通过其复杂的信号转导通路在细胞迁徙、增殖、抗凋亡方面的功能,并简要归纳了FAK与肿瘤之间的密切联系。     

基于凝血因子IX基因剔除小鼠建立血友病乙转基因动物模型

为在凝血基因IX基因剔除小鼠基础上建立基因组中整合有含特定点突变的人凝血因子IX基因表达载体原转基因小鼠家系,为血友病乙的研究提供更接近临床实际的动物模型。利用体外定点突变技术,构建含有特定点突变的人凝因IX基因表达载体,该载体包括由人凝血因子IX编码区及第一内含子构成的人凝血因子IX基因（hFIXml）、4个拷贝的MCK增强子（MCKe）、鸡β－肌动蛋白启动子（bA）及PolyA,命名为pMe4bAIXml质粒。将其线性化后,用显微注射法注射入817只凝血因子IX基因剔除小鼠受精卵雄原核,再将它们分别回输45只假孕受体母鼠的输卵管中,共产仔69只,存活63只。采用PCR与基因组Southern杂交筛选法鉴定小鼠,证实6只小鼠基因组中整合有含特定点突变的pMe4bAIXml质粒,并对1只小鼠的PCR产物进行测序,证实转基因结构特征符合设计要求。     

一种新型的双功能体内突变检测系统的建立

将含有两个LacI靶基因的穿梭质粒pMCLacI/neo整合入小鼠的基因组中 ,建立一种能同时分析体内表达基因和沉默基因的双功能的新型体内突变检测系统 ,使在体内比较分析不同组织、器官中表达基因和沉默基因的突变谱和突变率成为可能。486个经显微注射过 pMCLacI/neo质粒的C5 7BL/ 6小鼠的受精卵 ,分别移植入 18只假孕母鼠的输卵管中 ,产下 32只存活小鼠 ,进一步检测证实 :(1)有 5只小鼠在基因组中整合有 pMCLacI/neo基因 ;(2 )该质粒中的两个LacI靶基因 ,只有一个表达 ;(3)能有效地从小鼠基因组中回收 pMCLacI/neo基因。因此 ,成功建立了pMCLacI/neo的转基因小鼠品系 ;可以将该小鼠用于整体动物水平研究表达基因和沉默基因突变机制的模型 ;该模型为一种具有双功能的新型体内突变检测系统     

pMCLacI／neo转基因小鼠靶基因突变检测的新策略

由于pMCLacI／neo转基因小鼠含有两种不同状态的LacI靶基因,有别于以往所建立的只含有一种靶基因的系统。因此,建立一种能快速、有效的分析这两种靶基因的检测方法,成为该转基因小鼠建立后的又一新课题。通过适当方法将pMCLacI／neo中两种LacI靶基因分析后,采用了新近建立的M9／L正向选择系统进行检测,并用已知的LacI基因突变作为阳性对照,验证该策略的可行性。实验结果提示,M9／L正向选择系统可应用于pMCLacI／neo转基因小鼠中两种LacI靶基因的检测;实验中所建立的突变检测方法快速、有效。     

pMCLacⅠ/neo转基因小鼠靶基因突变检测的新策略

由于pMCLacⅠ/neo转基因小鼠含有两种不同状态的LacⅠ靶基因,有别于以往所建立的只含有一种靶基因的系统.因此,建立一种能快速、有效地分析这两种靶基因的检测方法,成为该转基因小鼠建立后的又一新课题.通过适当方法将pMCLacⅠ/neo中两种LacⅠ靶基因分开后,采用了新近建立的M9/L正向选择系统进行检测,并用已知的LacⅠ基因突变子作为阳性对照,验证该策略的可行性.实验结果提示,M9/L正向选择系统可应用于pMCLacⅠ/neo转基因小鼠中两种LacⅠ靶基因的检测;实验中所建立的突变检测方法快速、有效.     

液-液相分离与神经系统退行性疾病

细胞区室化(compartmentation)有助于分隔不同的生化反应，使其相互不产生干扰。有膜细胞器是通过生物膜把细胞内不同的空间分隔，进而实现细胞区室化。研究发现，细胞区室化也会通过细胞中无膜细胞器实现，但核仁等无膜区室的形成机制一直未得到明确。“液-液相分离”(liquid-liquid phase separation, LLPS)机制的发现，为解开无膜区室的谜题提供了全新的思路。现在认为，多种蛋白质和RNA也是通过LLPS机制形成局部的高浓度冷凝物，发挥更强或独特的基因表达调控、细胞信号转导等功能。LLPS的形成主要依赖于蛋白质和/或核酸之间的多价态非共价键相互作用，主要包括由低复杂序列区域介导的相分离及由多个重复结构域间特异性作用介导的相分离。组分浓度、pH和翻译后修饰等条件均能改变分子多价相互作用的强度，从而调节相分离和相变过程。蛋白质相分离的失调与肌萎缩性侧索硬化症、阿尔茨海默病、亨廷顿舞蹈症和帕金森病等多种神经退行性疾病的发生有关。在这些退行性疾病中，已发现TDP-43、FUS、Ataxin-2、Tau蛋白等致病基因的突变，以及修饰会导致LLPS异常而形成病理特征性的...