蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂的酵母表达及其对B16细胞体外侵袭的抑制作用*

目的：建立毕赤酵母表达质粒pPICZαA-cystatin,转化酵母细胞生产重组蛋白,探讨蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂（sv-cystatin）对肿瘤侵袭的生物学作用。方法：利用PCR扩增技术从pUC18/sv-cystatin质粒中扩增sv-cystatin cDNA并克隆至酵母表达载体pPICZαA上,构建重组质粒pPICZαA-cystatin电激转化Pichia pastori酵母细胞GS115,经1%甲醇诱导获得稳定表达的重组蛋白,改良Boyden小室分析重组sv-cystatin蛋白处理对B16F1细胞体外侵袭力的影响。结果：SDS-PAGE检测和Western blot分析显示分泌表达的sv-cystatin重组蛋白相对分子量约为14 kD,摇瓶发酵每升发酵培养上清可获得16 mg的重组蛋白,经亲和层析纯化获得的sv-cystatin重组蛋白具有抑制木瓜蛋白酶的活性。改良Boyden小室实验结果显示：经0.5mg/ml浓度的重组蛋白处理的B16F1细胞穿过Matrigel的细胞数明显低于对照组(52.60±4.58,106±5.9,P<0.01) ,抑制率为50%。结论：成功实现sv-cystatin的酵母表达,初步证明sv-cystatin重组蛋白可抑制小鼠B16F1细胞体外侵袭作用。     

奥曲肽治疗急性弥漫性腹膜炎术后患者的临床疗效及对血清内毒素和TNF-α、IL-6水平的影响

目的:探讨奥曲肽治疗急性弥漫性腹膜炎术后患者的临床疗效及对血清内毒素和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平的影响。方法:收集我院2014年5月~2016年5月收治的86例急性弥漫性腹膜炎患者,按照不同治疗方式分作对照组与研究组,每组43例。两组均采用手术治疗,对照组术后予以常规治疗,研究组基于对照组加以奥曲肽治疗,两组均持续治疗14天。比较两组临床疗效,治疗前后血清内毒素和TNF-α,IL-6水平的变化及不良反应发生情况。结果:治疗后,研究组总有效率显著高于对照组(P0.05);两组血清内毒素和TNF-α、IL-6水平均较治疗前显著下降,且研究组上述指标明显低于对照组(P0.05)。研究组不良反应发生率显著低于对照组(P0.05)。结论:奥曲肽可显著提高急性弥漫性腹膜炎术后患者的临床疗效,有效降低血清内毒素和IL-6、TNF-α水平,且安全性较高。     

BJ46a基因在昆虫细胞的转染、蛋白表达及超微结构观察

目的研究蛇毒金属蛋白酶抑制剂BJ46a在杆状病毒表达系统的表达及宿主细胞Sf9超微结构的变化。方法将构建的杆状病毒重组穿梭载体Bacmid BJ46a,经Cellfectin脂质体介导转染Sf9昆虫细胞,获重组杆状病毒颗粒;以高滴度病毒感染Sf9昆虫细胞,行Western blot观察BJ46a融合蛋白的表达。在病毒扩增、蛋白表达过程应用透射电镜和超薄切片技术观察Sf9细胞超微结构的变化。结果Western blot分析表明：在转染病毒的Sf9细胞出现BJ46a融合蛋白表达条带。电镜观察表明：Sf9细胞在病毒扩增过程,细胞核增大,病毒发生基质形成,杆状病毒在其周围装配。蛋白表达期间,杆状病毒量剧增,细胞核内外存在大量丝状纤维。结论BJ46a基因可在杆状病毒表达系统成功表达,并伴随着宿主细胞超微结构的显著变化,其结果为杆状病毒表达系统的研究奠定坚实的基础。     

环境和遗传因素与慢性代谢性疾病的人群研究

几十年来我国居民经历了快速的营养转型,与不健康的膳食和生活方式相关的＂致肥环境＂,以及遗传倾向是导致我国慢性代谢性疾病如代谢综合征和2型糖尿病快速流行的主要推手。然而,我国目前非常缺乏针对导致慢性代谢性疾病的主要遗传和环境危险因素而开展的系统研究。在过去若干年中,通过开展基于社区人群的流行病学研究,本课题组发现了多个与代谢性疾病相关的基因变异、环境因素和生物标记物。与此同时,通过对代谢综合征或2型糖尿病患者进行的营养干预,发现添加亚麻子或其衍生物木酚素、核桃,以及用糙米替代白米能不同程度地改善代谢综合征或血糖控制。总之,所有努力旨在增进对导致中国人代谢性疾病高易感性相关的病因和机制的理解,同时也希望为疾病的预测和预防提供新的思路和线索。     

大肠杆菌脂蛋白在CTB—pres2抗原基因的融合及表达

首次采用基因融合方式,在乱毒素Ｂ亚基－乙型肝炎病毒Ｐｒｅｓ２抗原融合基因的５‘端引入编码大肠杆菌脂蛋白信号肽及Ｎ端九个氨基酸的核苷酸序列,分别置于ｃｔｂ及ｌａｃ启动子下在大肠杆菌中获得分泌性表达,表达的融合蛋白均定位于膜上,并且可以和ＧＭ１、抗－ＣＴＢ抗体及ＨＢＶＰｒｅＳ２单克隆抗体结合说明该融合蛋白保留了ＣＴＢ的基本高级结构及ＣＴＢ、ＰｒｅＳ２抗原的抗原性,＾３Ｈ－棕榈酸标记实验证实该融合蛋白发     

"中国老龄人口营养健康状况项目"简介及阶段性成果

近20年来,随着我国经济的快速发展和膳食结构的不断西化,肥胖、2型糖尿病和心脑血管疾病等一些与营养、代谢和生活方式密切相关的慢性代谢性疾病在我国的发病率急剧上升,成为我国居民健康的主要威胁和主要致死性、致残性疾病。世界卫生组织2005年一份控制慢性疾病的报告预计,如果不采取有效措施,在未来10年中仅心脏病、中风和糖尿病就将给中国带来至少5500亿美元的经济损失。此外,我国人口老龄化发展迅速,已成为世界上目前唯一的老年人口超过1亿的国家。由于老龄化本身与各种慢性疾病关系密切,发现危害老年人健康的主要危险因素,对预防疾病和促进老年人的健康至关重要。     

Hv古细菌SRP19基因的克隆、表达、重组蛋白的纯化及生物学活性的研究

目的：构建Hv古细菌SRP19蛋白的表达载体pET23d-HvSRP19并在大肠杆菌中表达后进行纯化和研究其生物学活性,为研究SRP循环的分子机制奠定基础。方法：用体外合成的重组DNA技术,先合成具有重叠碱基的10个寡核苷酸短序列,通过拼接,获得Hv SRP19基因全长DNA后,克隆到pET23d载体上。重组质粒在大肠杆菌BL21（DE3）pLysS中的大量表达产物经Q-Sepharose离子交换层析柱纯化后再用蔗糖密度梯度超速离心法分析其生物学活性。结果：正确构建了pET23d-Hv SRP19表达载体,并在大肠杆菌BL21（DE3）pLysS中获得良好的表达;成功地纯化了表达产物,纯度达95%;证明了具有SRP19蛋白的生物学活性,能够与Hv SRP RNA相互作用形成SRP19-SRP RNA的复合物。结论：纯化的Hv SRP19蛋白与Hv SRP RNA相互作用所形成的复合物,被认为是启动SRP颗粒形成和功能发挥的开始。     

北京房山发现华南水鼠耳蝠

目前我国基础资源调查中有关翼手目物种多样性及其分布的项目正在开展,着手建立翼手目物种多样性和分布数据库,对翼手目物种在中国的分布情况亟需广泛调查和深入研究。我们于2021年9月在北京市开展翼手目物种调查时,在北京房山十渡镇四御洞使用竖琴网捕获8只蝙蝠,经过COI和Cyt b序列比对和系统发育关系重建以及外部形态数据鉴定为华南水鼠耳蝠（Myotis laniger）。此次发现华南水鼠耳蝠是北京市翼手目物种分布新记录种。     

人群变异的分子基础:从单核苷酸多态性到单氨基酸多态性

单核苷酸多态性可以划分为位于基因编码区的SNP和非编码区的SNP两大种类;而在基因编码区的SNP还可以进一步划分为两个亚类:不改变氨基酸序列的同义SNP和改变氨基酸序列的非同义SNP.显然,非同义SNP将导致氨基酸序列的改变,即形成单氨基酸多态性.基于蛋白质组学方法,对亚洲人群血浆样本中的SAP进行了系统研究,发现某一特定SAP在纯合人群和杂合人群中可能与生理或病理性状有着不同的关联.更为重要的是,近期有研究发现,在生物体中广泛存在着RNA序列与DNA序列不一致的现象.导致这种差异的主要原因是在转录水平上存在着规模化的RNA编辑(被称为RNA编辑组,RNA editome).该发现表明,个体拥有的SAP中可能有一部分与基因组SNP无关,而是源于RNA编辑组.进一步推论,可能在翻译水平上存在着不依赖DNA和RNA序列的全新的SAP.     

急进高原驻训人员外周血裂片红细胞的变化分析及意义

目的:探讨急进高原驻训人员外周血裂片红细胞(FRC)的变化及意义。方法:以南海空军某部高原驻训人员37名(飞行员8名,地勤人员29名)为研究对象,用全自动血液细胞分析仪检测急进高原驻训前后外周血FRC参数,比较各组间差异,分析其变化情况在高原驻训人员习服脱习服评估中的意义。结果:飞行员和地勤人员驻训后[外周血FRC绝对值为(15.5±39.3)×10~2/μL,百分比为2.9%±7.8%]比驻训前[外周血FRC绝对值为(39.4±52.4)×10~2/μL,百分比为8.0%±10.8%]FRC明显降低,差异极其显著(P0.01);飞行员外周血FRC绝对值和百分比驻训前后差值比地勤人员驻训前后差值显著升高,具有统计学意义(t=2.012、2.216,P0.05)。结论:急进高原驻训人员外周血FRC的降低,提示其外周血红细胞受挤压损伤下降,进入微循环顺畅;FRC可作为评价高原驻训人员微循环状况的快速、简便的新指标。