凝血因子Ⅸ基因剔除小鼠的遗传及血液学指标检测

目的鉴定凝血因子Ⅸ基因剔除小鼠.方法采用PCR扩增检测小鼠的DNA样品以及采用一期法检定小鼠血浆FIX活性和血浆凝血酶原时间(plasma prothrombin time,PT)、白陶土部分凝血活酶时间(Kaolin partialthromboplastin time,KPTT)值.结果小鼠PCR检测为阳性,FIX活性＜5%.结论凝血因子Ⅸ基因剔除小鼠能稳定遗传,鉴定结果提示该小鼠符合人血友病B相应临床症状.     

NJS小鼠与其亲本小鼠遗传多样性的RAPD分析

目的分析NJS及其亲本小鼠的遗传结构.方法筛选出5条随机引物对NJS及其亲本小鼠的遗传结构进行RAPD分析,并对NJS小鼠个体之间的基因组DNA进行相似性分析.结果两种小鼠均有相同的扩增片段且产生了各自的特异性条带;NJS小鼠不同个体间拥有的RAPD条带也具有差异,但拥有相同条带的个体小鼠比率较高.该群体小鼠的相似系数(F)为0.927(0.880～0.980).结论 RAPD分析获得的多态性可用于NJS与其亲本小鼠之间的遗传分析;而且NJS小鼠个体间具有较好的遗传一致性和遗传稳定性,其群体分化程度处在一个较低的水平.     

EMS对D6-2转基因小鼠骨髓组织细胞内lacⅠ靶基因的诱变率和诱变谱

对D6 -2转基因小鼠骨髓组织细胞内lacⅠ靶基因的自发突变率以及甲基磺酸乙酯 (ethylmethanesulfonate ,EMS)诱发的突变率和突变谱进行了研究 .将带有lacⅠ靶基因的pSPORT1质粒通过酶切、环化和转化DH1 0B宿主菌的方式从经和未经诱变处理的D6- 2转基因小鼠骨髓组织基因组DNA中回收出来 ,lacⅠ靶基因突变体用M9/L选择性平板进行正向选择 .结果从经EMS诱变处理的小鼠基因组DNA中回收出的约 1 1 935个pSPORT1质粒中筛选到 6个lacⅠ-突变体 (EMS诱发的突变率为 5 0× 1 0 ^-5 ) ,而从对照组小鼠基因组DNA中回收出的约 1 1 6 4 9个质粒中没有检测到lacⅠ^-突变体 (自发突变率则小于 8.6× 1 0 ^-5 ) .对 6个突变体的 2个突变高发区进行了序列分析 ,共检测出 1 6个点突变 .其中 ,碱基置换突变为主要突变类型 ,占 87.5 % ( 1 4) ,其余 1 2 .5 % ( 2 )的突变为缺失突变 .在碱基置换突变中 ,颠换占6 4 % ;而转换仅占 36 % ,这既不同于用BigBlue 转基因小鼠所测到的lacⅠ基因在小鼠体内的自发突变谱 ,又不同于用穿梭载体 /哺乳动物细胞系统所测到的EMS在体外的诱变谱 .而突变发生的位点则与其他的研究报道相同 ,主要出现在CpG二核苷酸 ,占全部点突变的 45 % .这些结果表明 :( 1 )基于含 pSPORT1质粒的D6- 2转基因小鼠是一个能用于研究体内基因突变的分子机理和评估化学物质的遗传毒性作用的有效模型 ;( 2 )EMS在体内和体外的诱变特性似有本质的不同 ,但这有待于进一步的研究证实     

凝血因子IX基因剔除小鼠的培育历史与建系方法

目的　培育凝血因子IX基因剔除小鼠近交系。方法　采用全同胞兄妹对交配 ,每代选用第一胎小鼠留种 ,记录繁殖性能 ;第 8代开始筛选纯合子。结果　凝血因子IX基因剔除小鼠已近交培育到第 12代 ,交配年龄 70 - 90d ,平均每窝产仔数 5只以上 ,离乳数 3只以上。结论　纯合子FIX剔除基因小鼠在子代鼠中能稳定遗传     

乙型肝炎病毒B基因组在转基因小鼠内的表达和复制

采用受精卵显微注射方法,产生了41只整合有完整的乙型肝炎病毒(HBV)B基因组的转基因小鼠建立者。建立者基因组中所整合的HBV基因组都能以孟德尔方式向后代传递。在这些建立者中,有33只为HBsAg阳性,同时也为HBeAg阳性的有18只。对血清HBsAg和HBeAg同时阳性的8只小鼠进行免疫组化分析,发现在它们的肝和肾组织中也有HBsAg和HBeAg的存在,但不存在于脾、脑、肺、睾丸、皮呋、卵巢及肌肉组织中。进而又采用了     

EMS-induced mutant frequency and spectrum in bone marrow of D6-2 transgenic mice

Ｔｈｅｌａｃｋｏｆｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｃａｐａｂｌｅｏｆｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇａｎｄｉｓｏｌａｔｉｎｇｍｕｔａｔｅｄｇｅｎｅｓｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙｍａｋｅｓｉｔｄｉｆｆｉｃｕｌｔｔｏｐｅｒｆｏｒｍｔｈｅｓｔｕｄｙｏｎｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓｉｎｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｇｅｎｅｓｏｆｈｕｍａｎａｎｄａｎｉｍａｌ.Ｔｏｄａｔｅ,ｔｈｅｓｅｐｒｏｂｌｅｍｓｈａｖｅｂｅｅｎｓｏｌｖｅｄｏｎｌｙｐａｒｔｉａｌｌｙｆｏｒａｖｅｒｙｌｉｍｉｔｅｄｎｕｍｂｅｒｏｆｌｏｃｉ,ｆｏｒｅｘａｍｐｌｅ,ｈｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅ…     

实验性雏鸡马立克病外周血淋巴细胞GRmRNA表达

目的探讨马立克病对鸡外周血淋巴细胞GRmRNA表达的影响,为马立克病的发病机理提供重要依据.方法采用3H-Dex和32P-GRcDNA两种分子探针,对7日龄接种MDV京-1株和1日龄免疫接种MD疫苗雏鸡的外周血淋巴细胞进行了GR和GRmRNA检测.结果攻毒组鸡淋巴细胞GR和GRmRNA含量逐渐下降,至攻毒2周后,显著低于免疫组和健康对照组(P<0.05),而免疫组和健康对照组之间差异无显著性(P>0.05).实验鸡经25mg/kg剂量的皮质酮缓释剂隔夜处理,外周血淋巴细胞GRmRNA水平略下降,为健康对照鸡下降幅度的一半.结论鸡血液中糖皮质激素活性增高和淋巴细胞GRmRNA表达水平低下介导MD鸡细胞免疫抑制,同时诱导广泛的淋巴组织增生性病变.     

凝血因子IX基因剔除小鼠的遗传及血液学指标检测

目的　鉴定凝血因子IX基因剔除小鼠。方法　采用PCR扩增检测小鼠的DNA样品以及采用一期法检定小鼠血浆FIX活性和血浆凝血酶原时间 (plasmaprothrombintime ,PT)、白陶土部分凝血活酶时间 (Kaolinpartialthromboplastintime ,KPTT)值。结果　小鼠PCR检测为阳性 ,FIX活性 <5 %。结论　凝血因子IX基因剔除小鼠能稳定遗传 ,鉴定结果提示该小鼠符合人血友病B相应临床症状。