人呼吸道合胞病毒M蛋白非复制型重组腺病毒的构建和鉴定

人呼吸道合胞病毒（human respiratory syncytial virus, RSV)基质蛋白（matrix protein,M）在RSV形态发生上具有重要作用,因含有CTL抗原表位,在疫苗研究上具有一定意义。为此,应用RT-PCR 方法从感染RSV的HEp-2 细胞中扩增获得M蛋白基因,构建了含M基因的非复制型重组腺病毒并进行表达和鉴定。基因序列分析显示RSV M基因仅有一处碱基发生错义突变。非复制型重组腺病毒DNA分子FGAd/RSVM转染293细胞,观察到细胞出现CPE,RT-PCR发现M基因有转录,Western blotting及间接免疫荧光分析检测到M蛋白。成功克隆A亚型RSV Long株M基因,并获得一株可表达A亚型RSV M蛋白的非复制型重组腺病毒FGAd/RSVM,可用于体内研究观察其免疫效果及免疫保护作用。     

盐酸氨基葡萄糖联合非甾体抗炎药治疗中度膝关节骨关节炎的临床研究

目的:探讨盐酸氨基葡萄糖联合非甾体抗炎药治疗中度膝关节骨关节炎的临床疗效。方法:收集2010年5月至2013年9月我院中度膝关节骨关节炎患者214例,随机分为实验组和对照组各107例,对照组单独给予盐酸氨基葡萄糖治疗,实验组给予盐酸氨基葡萄糖联合非甾体抗炎药治疗,于用药后2、4、8、12周对比两组Lequesne评分、治疗效果和不良反应。结果:两组治疗前Lequesne评分比较差异无统计学意义(P>0.05)。实验组用药后2、4、8、12周Lequesne评分均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),且两组Lequesne评分均于用药后2、4周达到最低;用药12周后,两组有效率均有所下降,实验组用药后2、4、8、12周有效率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),且两组有效率均于用药后2、4周达到最高;实验组不良反应发生率为6.54%(7/107),显著高于对照组的3.74%(4/107),差异无统计学意义(P>0.05)。结论 :盐酸氨基葡萄糖联合非甾体抗炎药治疗中度膝关节骨关节炎短期疗效较好,长期服用副作用大,临床应推荐2-4周内短期服用。     

幽门螺杆菌感染与全身各系统疾病的研究最新进展

随着近年来对幽门螺杆菌感染研究的不断深入,学者们发现幽门螺杆菌不仅是消化系统疾病的重要病因之一,还与血液、风湿免疫、神经以及其他甲状腺、妊娠高吐、眼部疾病等全身多系统疾病具有密切相关性。就近几年国内外对幽门螺杆菌与全身各系统疾病的相关性以及其机制的最新研究进展进行综述,为临床的诊断和治疗提供参考。     

前部缺血性视神经病变患者图形视觉诱发电位与视功能改变的关系及其临床意义

目的:探究前部缺血性视神经病变(AION)患者图形视觉诱发电位(P-VEP)检查结果与预后间的关系。方法:选择2016年12月-2019年12月于我院就诊并确诊的AION患者作为研究对象,入院后接受综合治疗,治疗后评估患者的视功能,评价患者的治疗效果,采用相关性分析探究患者入院后P-VEP检查结果与经治疗后患者视功能改善值间的相关性。结果:研究组15'棋盘格和60'棋盘格P100波潜伏时均高于对照组,P100波振幅均低于对照组,差异均具有统计学意义(P0.05)。治疗后3个月AION患者最佳矫正视力和视野平均敏感度(MS)高于治疗前,视野平均缺失值(MD)低于治疗前,差异均具有统计学意义(P0.05)。AION患者治疗前后视力差值与15'棋盘格P100波振幅呈正相关,视野MD差值和视野MS差值与P-VEP四项反应值不具有相关性。结论:P-VEP检查结果 15'棋盘格P100波振幅与患者视力改善差值间存在显著的正相关性,可提示患者视功能恢复程度及预后。     

人呼吸道合胞病毒微型复制子的构建

摘要：【目的】构建RSV微型复制子（minireplicon）并进行功能学研究。【方法】构建含RSV病毒前导序列（Leader, genomic promoter, Le）、转录起始信号（gene start, GS）、多克隆酶切位点、转录终止信号（gene end, GE）和尾随序列(Trailer, antigenomic promoter, Tr)的基因片段GSGE,通过引入T7 RNA多聚酶（T7 RNA polymerase, T7 RNP）启动子、克隆入载体px8δT和插入增强型绿色荧光蛋白（Enhanced Green Fluorescent Protein, EGFP）等多步操作,获得RSV微型复制子重组质粒px8δT/GSGE1/EGFP和px8δT/GSGE2/EGFP。同时构建可表达大蛋白（large protein,L）的质粒pcDNA3.1/L及表达转录延长/转录终止抑制因子（M2 ORF 1 protein,M2-1）的质粒pcDNA3.1/M2-1。通过脂质体法共转染RSV微型复制子质粒及四种RSV核壳体蛋白质粒至可表达T7 RNP的BSRT7/5细胞系,倒置荧光显微镜及流式细胞仪分析EGFP的表达情况。【结果】成功构建了px8δT/GSGE1/EGFP和px8δT/GSGE2/EGFP及pcDNA3.1/L和pcDNA3.1/M2-1,五质粒共转染BSRT7/5细胞,倒置荧光显微镜及流式细胞仪均观察到绿色荧光的表达。【结论】构建的RSV微型复制子具有转录和复制功能,将有助于进一步开展以RSV反向遗传操作为基础的RSV疫苗研究。     

抗呼吸道合胞病毒融合蛋白单链抗体的筛选及初步鉴定

目的：从大容量噬菌体抗体库中筛选人源性抗呼吸道合胞病毒F蛋白的单链抗体。方法：以RSV F蛋白为靶抗原,通过“吸附-洗涤-洗脱-扩增”过程从天然人源性噬菌体抗体库中筛选特异性抗F蛋白单链抗体。5轮筛选后,单克隆经ELISA检测,阳性克隆进行核酸序列分析,并将阳性克隆噬菌体感染E.coli HB2151,经IPTG诱导,制备抗RSV F蛋白的可溶性单链抗体,并进行Western及Dot blot分析。结果：经过筛选,获得了18株能与F蛋白特异性结合的阳性克隆,取OD值最高的克隆E4经测序并检索Kabat数据库分析,显示其基因与人免疫球蛋白可变区基因具有高度同源性,Western及Dot blot分析表明为单链抗体。结论：利用天然人源性噬菌体抗体库技术制备出高特异性的人源性抗RSV F蛋白单链抗体。     

Nigeiqianlm胃镜引导下放置十二指肠营养管治疗食管癌术后吻合口瘘的临床效果及应用体会

目的:探讨胃镜引导下置入十二指肠营养管治疗食管癌术后并发吻合口瘘的临床效果及其应用体会。方法:在2008年1月至2011年9月入我科治疗的3126例食管癌手术患者中,49例术后并发吻合口瘘,患者经胃镜引导下置营养管于十二指肠降部,给予肠内营养治疗。术前1天、术后第5天、第7天、出院时分别测定患者体重,术后第1天起逐日观察患者肛门排气、排便等胃肠功能恢复情况。结果:49例患者中首次置管成功47例,成功率96%,置管时间10～20min,平均12min,置管及术后未发生严重并发症;鼻肠营养管肠内营养术后第7天体重下降≤2kg;肠道功能恢复快,术后肛门排气时间≤3d。结论:置入营养管的长度要较胃镜观察长约20cm并妥善固定可提高首次置管成功率。胃镜引导下置入十二指肠营养管对食管癌术后并发吻合口瘘的患者是一种安全、方便、有效的肠内营养途径,对此类患者的营养治疗起重要支持作用,具有临床应用价值。     

人乳头瘤病毒（HPV）及其诱发子宫颈癌的新进展

子宫颈癌是一类发病率仅次于乳腺癌并严重危害女性生殖系统健康的最常见的妇科恶性肿瘤,在发展中国家,是女性癌症死亡的第一因素。自德国科学家哈拉尔德.楚尔豪森（Harald zur Hausen）因发现人乳头瘤病毒（Human papillomavirus,HPV）导致子宫颈癌而获得2008年度的诺贝尔生理学或医学奖后,全世界广泛认可人乳头瘤病毒（HPV）是引起子宫颈癌的最主要生物学因素。HPV病毒的持续感染在子宫颈癌的发生、发展过程中起了重要作用。本文就HPV病毒的生物学结构、女性生殖道HPV病毒的感染途径以及HPV病毒诱发子宫颈癌机制的最近的研究进展进行扼要综述。     

营养因子对苏云金芽胞杆菌4.0718 产杀虫蛋白Cry1和Cry2的影响

为了提高杀虫蛋白Cry1和Cry2产量,首先采用Plackett-Burman设计筛选出发酵培养基中影响苏云金芽胞杆菌4.0718表达毒蛋白Cry1的显著性因子为黄豆饼粉和MnSO4·H2O,Cry2的产量在该配方中无显著性影响因子.然后利用最速上升实验逼近Cry1最大产出区域,找到后续试验中心点.最后通过响应面优化得到黄豆饼粉和MnSO4·H2O的最佳浓度为11.5 g/L和0.02 g/L,使Cry1和Cry2产量分别达到0.32 mg/mL和0.11 mg/mL,比原优选配方产量提高了两倍多.该优化配方发酵液对棉铃虫的半致死浓度(LC50)为1.09 μL/mL,杀虫活性比原优化配方显著提高.     

生物反馈联合电刺激在女性盆底功能障碍性疾病治疗中的临床应用

目的:分析生物反馈联合电刺激对女性盆底功能障碍性疾病(PFD)的治疗效果。方法:选择2011年1月至2016年3月我院收治的1000例PFD患者为研究对象,按随机数字表法分为实验组和对照组,每组各500例。实验组给予生物反馈联合电刺激,对照组给予功能性电刺激治疗。比较两组治疗前后盆底肌肉肌力分级的变化,测定盆底功能相关指标的改善及患者治疗前后排尿情况。结果:治疗后2组盆底肌力分级均呈明显上升趋势(Z=52.587,37.581;P0.001),且观察组改善效果优于对照组(Z=27.588,P0.001);治疗后实验组盆底肌肉肌力正常率高于对照组,差异有统计学意义(x~2=68.323,P0.05);治疗后实验组最大收缩压、持续收缩压提升幅度较大,膀胱颈移动度明显减小,与对照组各项指标对比差异有统计学意义(P0.05),且治疗后两组排尿情况均有所好转,实验组效果优于对照组(P0.05)。结论:生物反馈联合电刺激对女性PFD具有较好的效果,能提高患者盆底最大收缩压、持续收缩压,减小膀胱颈移动度,改善患者排尿功能。