藏羚羊成纤维细胞系的建立及其核型分析

藏羚羊(Pantholops hodgsonii)是我国特有的国家Ⅰ级重点保护野生动物,生存在高海拔低氧环境下,具有高原生物的细胞遗传特性。实验采用组织块贴壁培养法进行原代培养,后经差异贴壁法联合消化排除法纯化,成功构建了藏羚羊成纤维细胞系,并对培养不同代次细胞的形态、生长动力学、染色体核型等进行了研究。结果表明,培养得到的藏羚羊细胞为典型的成纤维细胞,第7、10、15代细胞群体倍增时间分别为26、48、50 h。细胞的生长均为"S"型。染色体中二倍体染色体(2n=60)占主体,所占比例为65%～91%,包括性染色体X、Y在内均为端着丝粒类型,染色体组的总相对长度为193.45,平均相对长度为3.22,未发现随体、次缢痕等特殊标志性特征。     

藏羚与几种牛科动物成纤维细胞的特性比较

为研究高原低氧环境对哺乳动物细胞生长特性的影响,本文以高原低氧动物藏羚和同科的阿尔巴斯白绒山羊、蒙古绵羊及鲁西黄牛的耳源组织细胞为材料,利用DMEM /F12 培养液进行培养,建立了4 种动物的体外培养成纤维细胞系,并对其进行形态学观察、生长曲线绘制、凋亡检测、核型分析等生物学特性检测。结果表明:4 种动物的细胞经差异贴壁法联合消化排除法,可获得纯化的成纤维细胞,细胞形态一致且活力稳定,4 种动物细胞的形态与生长曲线无明显差异;藏羚、绒山羊、绵羊、牛同代次细胞生长倍增时间分别为26 h、22 h、23 h 和22 h;经流式细胞仪检测,细胞凋亡率分别为5.5% 、2. 7% 、8. 6% 和1.5% ;藏羚、绒山羊、绵羊与牛的染色体数目分别为60、60、54 和60。藏羚与绒山羊、牛染色体数目相同,且除性染色体外,其余均为端部着丝粒类型,而绵羊存在6 条中着丝粒类型染色体。该结果表明,在体外培养条件下,藏羚的体细胞生长特性与同科的其他物种的细胞生长特性存在明显差异。这为从细胞水平上研究藏羚对环境低氧适应的分子机理提供了基础。     

EGFP小鼠ES细胞来源的生殖系嵌合小鼠的获得和鉴定

生殖系嵌合体的获得是实现ES细胞介导的转基因途径的决定步骤,而嵌合体的制作及生殖系嵌合体的获得则是判定ES细胞系是否具有配子分化能力的有效方法。利用一株表达绿色荧光蛋白的杂种ES细胞系制备出嵌合体小鼠,共获得9只表达绿色荧光蛋白的嵌合体小鼠,其中有8只雄性, 1只雌性,目前均发育成健康成年小鼠。流式细胞检测显示了绿色荧光蛋白在嵌合鼠以下器官的表达情况:心(77.96±15.78) %、脾(84.06±3.60) %、肾(42.49±19.79) %、骨髓(52.02±18.78) %。昆明雌鼠与雄性嵌合鼠杂交1代(F1)毛色表型分析显示该株ES细胞具有生殖系嵌合能力。     

国产丝裂霉素处理的胎儿成纤维细胞支持具有生殖系转化能力的小鼠胚胎干细胞的分离

应用于胚胎干细胞（embryonic stem cells, ES细胞）培养的国产药物可以降低ES细胞的实验成本。研究中以浙江海正药业生产的丝裂霉素（mitomycin，国药准字H33020786）处理小鼠胎儿成纤维细胞，用于胚胎干细胞建系。并制备饲养层，将小鼠囊胚种植在该饲养层上。4—6天后，挑选形态良好的 内细胞团(inner cell mass)来源的克隆在胰酶中进行消化，将消化下来的细胞团块传至新鲜的饲养层上。之后，每2—3天传代一次。结果表明，经该丝裂霉素处理的胎儿成纤维细胞支持具有生殖系嵌合能力的胚胎干细胞的分离。     

国产丝裂霉素处理的胎儿成纤维细胞支持具有生殖系转化能力的小鼠胚胎干细胞的分离

应用于胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES细胞)培养的国产药物可以降低ES细胞的实验成本。研究中以浙江海正药业生产的丝裂霉素(mitomycin,国药准字H33020786)处理小鼠胎儿成纤维细胞,用于胚胎干细胞建系。并制备饲养层,将小鼠囊胚种植在该饲养层上。4-6天后,挑选形态良好的内细胞团(inner cell mass)来源的克隆在胰酶中进行消化,将消化下来的细胞团块传至新鲜的饲养层上。之后,每2-3天传代一次。结果表明,经该丝裂霉素处理的胎儿成纤维细胞支持具有生殖系嵌合能力的胚胎干细胞的分离。     

鸟类羽毛色素的合成机理与调控机制

鸟类作为色彩最丰富的陆生脊椎动物,其体表覆盖着颜色多样的羽毛,在伪装、择偶、信号识别等多方面具有重要功能,因此羽毛颜色引起了研究者的极大兴趣。羽毛颜色总体分为由化学物质产生的色素色和由物理结构产生的结构色,其中常见色素有两大类。根据近年来对羽毛色素的研究进展,本文总结了黑色素和类胡萝卜素的类型、合成途径、获取途径以及相关基因,为深入研究羽毛色素合成、代谢的分子调控机制提供科学依据。     

EGFP小鼠ES细胞来源的生殖系嵌合小鼠的获得和鉴定

生殖系嵌合体的获得是实现ES细胞介导的转基因途径的决定步骤，而嵌合体的制作及生殖系嵌合体的获得则是判定ES细胞系是否具有配子分化能力的有效方法。利用一株表达绿色荧光蛋白的杂种ES细胞系制备出嵌合体小鼠，共获得9只表达绿色荧光蛋白的嵌合体小鼠，其中有8只雄性，1只雌性，目前均发育成健康成年小鼠。流式细胞检测显示了绿色荧光蛋白在嵌合鼠以下器官的表达情况：心(77.96±15.78)%、脾(84.06±3.60)%、肾(42.49±19.79)%、骨髓(52.02±18.78)%。昆明雌鼠与雄性嵌合鼠杂交1代（F1）毛色表型分析显示该株ES细胞具有生殖系嵌合能力。     

牛肌肉生长抑制素基因突变的遗传效应与育种应用

肌肉生长抑制素（myostatin,MSTN）基因主要在骨骼肌中表达,参与调控骨骼肌的生长发育。MSTN基因在不同物种中具有极强的进化保守性,同时还具有较多的突变多态性。在牛的不同品种中,存在不同位点的有义突变,突变型牛均表现为骨骼肌发达,呈现双肌表型,生长速度与产肉率显著提高。同时,该基因突变也引起显著的生理性遗传效应。对国内外肉牛的MSTN基因突变类型、突变后遗传效应及在肉牛育种应用等方面作了重点阐述,以期为我国地方品种肉牛改良和选育研究提供参考。