猪脂肪GLUT4蛋白的大量提取纯化及鉴定

目的:寻找提取纯化具有12次跨膜结构的葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的新方法,并通过晶体结构的解析来研究二型糖尿病的发生机制。方法:首次选用猪肉皮下脂肪作为GLUT4蛋白提取的原材料,采用组织匀浆,差速离心方法初步提取分离了富含GLUT4的组分,进一步通过硫酸铵沉淀法初步纯化到大量的GLUT4蛋白。结果:通过单抗1F8对每一个组分进行Westem Blot检测,证明了分子量55kD处的蛋白即是GLUT4。150g脂肪组织通过组织匀浆和差速离心后,于35%-55%的硫酸铵沉淀浓度范围内得到40mg纯度达到50%的GLUT4。纯化后的GLUT4可以在0.5%DM下稳定存在三天。结论:发展了快速有效提取GLUT4的新方法,为进一步蛋白结晶打下基础。     

Ⅳ型膜蛋白插入内质网膜的转运机制研究

Ⅳ型膜蛋白是一种特殊的尾部锚定的膜蛋白,如囊泡运输相关的Syb2、负责蛋白转运的SRP受体和Sec61、调节细胞凋亡的Bcl-2等,在细胞中发挥了重要的作用。同大部分膜蛋白的翻译同步转运机制相比,Ⅳ型膜蛋白插入内质网膜的过程属于翻译后转运机制。Ⅳ型膜蛋白从核糖体中翻译结束并释放后,经过一系列的多分子协同作用转运到内质网膜上,再由内质网上的通道蛋白或整合酶整合转运进入内质网。近年来,基于体外翻译与重组实验的不断创新,鉴定出了一些非常重要的转运分子,如TRC复合物的40KD亚基,为了解这类特殊膜蛋白的合成转运机制提供了大量可靠的证据,但仍然有许多关键的内容与机制需要进一步的探索与发现。     

河豚毒素中和性单抗的制备、鉴定及TTX检测方法的建立

目的研制河豚毒素中和性单抗,建立基于河豚毒素单抗的河豚毒素检测方法。方法用TTX-KLH免疫Balb/c小鼠,用TTX-BSA间接ELISA筛选,建立杂交瘤细胞系,腹腔接种Balb/c小鼠诱生腹水,Protein A Sepharose CL4B亲和柱纯化,SDS-PAGE、间接ELISA鉴定;用常规法确定TTX对昆明小鼠的LD50;将单抗和TTX混合物注入小鼠腹腔,检测单抗对TTX的中和能力;建立检测TTX的竞争ELISA法。结果获得了2株TTX中和性单抗,腹水用Protein A Sepharose CL 4B纯化后抗体纯度大于95%;常规间接ELISA检测,显示单抗5E7的结合能力高于5E4。单抗对2 LD50 TTX攻击昆明小鼠的保护率为50%,建立了基于中和性单抗的TTX检测方法,TTX的最小检出浓度为1.56μg/mL。结论获得了TTX中和性单抗,对致死剂量TTX攻击昆明小鼠的保护率为50%,建立了基于中和性单抗的TTX检测方法,TTX的最小检出浓度为1.56μg/mL。     

Exocyst在囊泡转运和细胞分泌过程中功能与结构的研究进展

Exocyst是由八个亚基蛋白组成的高度保守的复合物,目前被证实在细胞胞吐和囊泡转运,特别是囊泡与质膜的拴系阶段过程中发挥着十分重要的作用。本文综述了Exocyst在细胞中的定位、功能和结构方面的最新研究发现,以及复合物各亚基之间的相互作用和组装机制。当前的结晶学实验和电镜实验结果为Exocyst复合物的组装和解离机制提供了重要线索和证据。Exocyst功能与结构研究发现有助于我们进一步洞悉Exocyst复合物在囊泡转运和分泌过程中作用机制。     

活性乳酸菌饮料对人体肠道菌群影响的研究

目的 探讨一种活性乳酸菌饮料对人体肠道菌群的影响作用.方法 采用卫生部《保健食品检验与评价技术规范》调节肠道菌群功能检验方法进行检验.结果 试食组试验前后自身比较：肠道内双歧杆菌、乳杆菌数量明显增加（P＜0.01）,肠球菌数量增加（P＜0.05）,产气荚膜梭菌数量明显减少（P＜0.01）,肠杆菌和拟杆菌无明显变化;试验后对照组与试食组组间比较：双歧杆菌数量明显增加（P＜0.01）,乳杆菌的数量增加（P＜0.05）,肠杆菌、肠球菌、产气荚膜梭菌和拟杆菌无明显变化.结论 活性乳酸菌饮料具有调节人体肠道菌群、改善肠道内环境的作用.     

藻红蓝蛋白裂合异构酶E基因突变体的构建、表达与酶活性检测

通过诱变分别得到PecE的N端,C端和中间位置缺失突变的一系列突变基因的编码产物,测定了这5种缺失蛋白质的酶活性的大小。实验结果显示：来自层理鞭枝藻(M．laminosus,UTEX 1931)的PecE[简称PecE(UTEX 1931)]与来自层理鞭枝藻(M．laminosus,．PCC 7603)的PecE[简称：PecE(PCC 7603)]有81％的同源性。PecE(UTEX1931)／PeeF(PCC 7603)的酶催化活性与PecE(PCC 7603)／PecE(PCC 7603)的酶催化活性相当。PecE(UTEX 1931)的N端缺失22个氨基酸的蛋白质显示出了约20％的催化活性;而N端缺失36个氨基酸、56个氨基酸的蛋白质,C端缺失23个氨基酸的蛋白质和PecE(PCC 7603)中间缺失27个氨基酸的蛋白质均丧失活性,结果对酶的结构以及对酶活性的影响提供了重要信息。     

血清胱抑素C作为新型肾功指标在狼疮肾炎中的临床意义

目的:探讨血清胱抑素C在狼疮肾炎的诊断及治疗监测中的临床意义。方法:检测106名狼疮肾炎患者的血清胱抑素C(sCysC)、血清肌酐(sCr)、尿素氮(BUN)、肾小球滤过率(GFR) 24小时尿蛋白(uTP)、血清白蛋白(sAlb)、C-反应蛋白(CRP)水平,分析sCysC与上述指标的相关性及其在治疗过程中的动态变化,并与传统肾功能指标(sCr、BUN)进行比较。结果:①治疗前,血清sCysC水平与uTP、sAlb、SLEDAI、CRP均显著相关,且优于sCr及BUN。②治疗中血清sCysC水平与uTP、sAlb的相关性均优于sCr及BUN。③血清sCysC水平随激素及免疫抑制剂治疗显著改善这一趋势见于BUN并未见于Scr;激素及CTX治疗结束后血清sCysC水平显著改善这一趋势见于Scr并未见于BUN。④治疗前/sCr与sCysC联合计算所得eGFR与各项指标相关性最高。结论:sCysC在狼疮肾炎早期肾损害诊断、治疗过程以及监测疗效的敏感性均优于传统sCr和BUN。sCysC单独及sCysC联合sCr计算的GFR均优于单独sCr计算获得的GFR。sCysC在LN中不仅可作为肾功能的新型评价标志物,可能也作为炎症反应的标志物。     

直肠癌根治术治疗直肠癌的疗效及对b FGF、MTL及GDF-15的影响

目的:探讨直肠癌根治术治疗直肠癌的疗效及对重组人碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)、胃动素(MTL)及生长分化因子-15(GDF-15)的影响。方法:选择2016年01月-2019年12月在我院接受治疗的104例直肠癌患者,采用抽签法分为观察组(n=54)和对照组(n=50)。对照组给予传统开腹直肠癌根治术治疗,观察组给予腹腔镜直肠癌根治术治疗。比较手术情况、血清b FGF、MTL、GDF-15、C反应蛋白(CRP)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、血管活性肠肽、胃泌素变化情况及并发症发生情况。结果:观察组手术时间显著高于对照组,术中出血量、住院时间、术后排气时间及切口长度均显著低于对照组,差异显著(P0.05);治疗前,两组血清b FGF、MTL及GDF-15水平无明显差异;治疗后,两组血清b FGF、MTL及GDF-15水平均显著降低,且观察组上述指标均低于对照组(P0.05);治疗前,两组应激反应水平无明显差异;治疗后,两组血清CRP、MDA水平均显著升高,且观察组上述指标均低于对照组,两组SOD均显著下降,观察组高于对照组(P0.05);治疗前,两组胃肠激素水平无明显差异;治疗后,两组血管活性肠肽均显著升高,且观察组低于对照组,胃泌素水平均显著降低,且观察组均高于对照组(P0.05);两组并发症总发生率为5.56%、26.00%,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:在直肠癌患者中应用腹腔镜直肠癌根治术效果显著,可有效改善患者血清b FGF、MTL及GDF-15,且并发症较少。     

植物Metacaspase研究进展

过敏性坏死反应是植物的一种重要的抗病机制, 类似于动物细胞凋亡, 它是一种程序性细胞死亡(programmed cell death, PCD)过程。目前, 已经确定半胱天冬蛋白酶(caspase)在动物PCD过程中起核心作用。在植物中, 尚未发现其直系同源蛋白, 但是有一类与其结构相似的蛋白酶, 称为metacaspase。在植物不同的PCD过程中, 有的依赖于metacaspase, 而有的则不依赖于该类蛋白酶。目前对metacaspase的结构和功能已有了初步的研究, 对其深入的研究则进展缓慢, 其具体的生物学功能和在PCD信号路径中的定位有待进一步探索。