洋葱伯克霍尔德菌T1828质粒消除方法及条件

采用十二烷基硫酸钠和提高生长温度结合法、紫外线涂布平板法、冻融法、吖啶橙法和黄芩甙提取液消除法等方法消除洋葱伯克霍尔德菌T1828菌株质粒,探讨适合洋葱伯克霍尔德菌质粒消除的方法,并研究最佳质粒消除条件。结果表明十二烷基硫酸钠和提高生长温度结合法最适合于洋葱伯克霍尔德菌T1828质粒消除,同时最佳消除条件为:在T1828培养16 h后加入SDS使其终浓度0.1%,36°C处理18 h,消除率达到49%。筛选到的无质粒突变株可以用于进一步的研究。     

一株产冠菌素新菌种的分离与鉴定

【目的】从不同样本中分离筛选性能稳定的产冠菌素菌株。【方法】根据冠菌素引起植物叶片产生弥散性黄萎病、块茎膨大的特性,采集各种植物病叶、病枝及感病植物的土壤,采用穿刺法与系列稀释法分离筛选菌株;液相色谱测定菌株产生的冠菌素;在电子和光学显微镜下观察菌体形态;根据生理生化试验、(G+C)mol%含量、16S rDNA序列分析等对菌株进行鉴定;对分离提纯的发酵产物进行紫外、质谱和红外分析。【结果】菌株BBC933为革兰氏阴性菌,端生鞭毛,短杆状,无芽孢。在41℃下不生长,细胞内有聚β-羟基丁酸盐颗粒积累,没有精氨酸双水解酶和氧化酶,不能水解淀粉、明胶,不进行硝酸还原及反硝化作用,过氧化氢酶反应呈阳性。菌株的(G+C)mol%含量为67.2%,根据该菌株16S rDNA序列的同源性分析,构建系统发育树。【结论】菌株BCC933鉴定为洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholder cepacia),具有产冠菌素性能。国内外未曾见报道洋葱伯克霍尔德氏菌产冠菌素。     

质粒消除对冠菌素产生菌T1828生物学效应的影响

采用十二烷基硫酸钠（SDS）和提高生长温度结合法消除T1828菌株质粒后,筛选到无质粒突变株ZWL-15。以原始亲株T1828和无质粒突变株ZWL-15为出发菌株,考察了两者部分生物学特性。结果表明,菌株ZWL．15生长速率快于T1828,进入对数期和稳定期的时间分别提前1h和4h。在菌株ZWL-15发酵过程中添加0．01％的SDS有利于冠菌素的合成,最适发酵温度比T1828升高5℃,达到35℃,发酵周期提前4h,COR相对值是T1828的两倍左右。ZWL-15传代实验表明该突变株很稳定,且对氨苄青霉素敏感,氨苄青霉素基因初步定位于该菌属质粒上。