大肠杆菌表达重组人生长激素的纯化

目的 :获得具有生物学活性的重组人生长激素 (rhGH)。方法 :PBV -GH/DH5α菌体经超声破菌、反复洗涤后获得包涵体。将包涵体变性、复性 ,用硫酸铵盐析 ,离子交换层析和凝胶层析进行纯化。产物经SDS -PAGE、HPLC、N末端 15个氨基酸序列检测验证。结果 :终产物rhGH纯度达 98.2 % ,比活性大于 3.0IU/mg。分子量为 2 2kDa ,N末端氨基酸序列与DNA序列推导的氨基酸序列完全一致。结论 :从自构建的PBV -GH/DH5α工程菌中获得高纯度、高活性重组人生长激素。其纯化工艺为中试生产提供可靠依据。     

10个品系小鼠的RAPD 分析

小鼠是应用最为广泛的实验动物,预先了解品系或近交系的遗传纯度或系间遗传距离,对于试验材料的选取和实验结果分析都有很大帮助.传统的实验动物遗传监测多限于基因表型的检测,检测位点在整个基因组中所占比例小,分布不均.由于RAPD方法的优势,用一系列引物可检测出覆盖整个基因组的遗传改变,在动、植物品系鉴定和遗传监测方面已取得大量成果(陈洪等,1994;沈曦等,1999),但对多品系小鼠的研究报道较少.因此,本研究选用10个常用小鼠品系,筛选较好的多态标记,建立各品系的RAPD图谱,以区分不同品系的小鼠,为今后的质量监测工作提供参照标准;同时根据RAPD扩增结果计算出各品系间的相对遗传距离,在DNA水平探讨不同品系小鼠间的亲缘关系.     

干扰素诱导蛋白P56与糖皮质激素受体的相互作用及对其转录活性的影响

糖皮质激素受体（GR）在严重创伤早期及全身性炎症反应中具有重要作用,为寻找与GR相互作用的新的蛋白质,以期调节GR的功能活性,应用酵母双杂交技术,以糖皮质激素受体配体结合区（GR-LBD）为诱饵蛋白,在人骨髓cDNA文库中筛选到42个阳性克隆.测序结果表明,其中一个克隆为干扰素诱导蛋白P56的大部分编码序列（221～1 642 bp,编码第53位至第478位氨基酸）.利用酵母双杂交实验再次验证P56与GR具有结合作用.并用PCR方法从酵母质粒中扩增出P56片段,进行GST-P56原核融合蛋白表达与纯化,及真核表达与免疫共沉淀.蛋白质结合实验表明,P56与GR-LBD在体内外有结合作用.CAT报告基因检测表明P56抑制GR的转录激活能力.     

辅酶Q_(10)对缺血心肌线粒体功能和形态的影响

辅酶Q_(10)(CoQ_(10))参与呼吸链及电子传递,在氧化还原系统中作为可逆的受氢体行使着催化功能。文献报道CoQ_(10)能保护或改善缺血心肌的功能、代谢和形态,临床用于治疗冠心病、充血性心衰、心肌炎、心律失常等心血管疾病。本文通过观察CoQ_(10)对缺血心肌线粒体功能和形态的影响,以探讨其保护缺血心肌的作用机制。     

JAB1与糖皮质激素受体的相互作用及对其转录活性的影响

应用酵母双杂交方法筛选到与糖皮质激素受体(GR)结合的蛋白JAB1,进一步验证JAB1与GR的结合作用并证明其对GR的影响.构建与Gal4-BD融合表达的载体pGBKT7-GR LBD,与构建于pACT2载体上的人骨髓cDNA文库杂交,在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp选择培养板上培养,经X-α-gal检测,阳性克隆片段插入pGEM^®-T Vector 载体,测序,再经酵母双杂交和GST pull down蛋白质结合实验验证其结合作用,应用反映GR转录活性的CAT报告基因检测JAB1对GR的调节活性.结果在人骨髓cDNA文库中,筛选到42个X-α-gal检测变蓝且含有pACT2质粒序列的克隆,其中有5个克隆的序列皆为Jun活性区结合蛋白JAB1的一部分.酵母双杂交和蛋白质结合实验表明,JAB1与COS7真核表达的GR-LBD在体外有结合作用.JAB1加强GR转录激活的能力.     

羽叶三七根茎的三萜皂甙成分及其化学分类学意义

羽叶三七(Panax japonicus C. A. Meyer var. bipinnalifidus (Scem.) Wu et Feng)又称疙瘩七,产我国西北部至西南部山区,是人参届植物中分布海拔和纬度均较高的一个种类。在陕西省秦岭地区主要产于南北坡海拔2100—2900米的针叶林下阴湿处。民间以其根茎入药,具有清热解毒、顺气健胃、活血祛瘀、滋补强壮之效。作为国产人参属植物皂甙成分系统研究的一个部分,本文报告秦岭产羽叶三七根茎的皂甙成分,并讨论其化学分类学意义。