大鼠再生肝中表达上调基因的筛选与鉴定

采用新发展的抑制差减杂交技术（suppression subtractive hybridization,SSH）在基因组水平筛选再生肝中高表达基因。大鼠肝部分切除后24h的再生杆组织来源的cDNA作为受检者（tester）,正常肝组织的cDNA作为驱动者（driver）,进行差减杂交,获得一900个克隆的差减杂交库,随后对差减克隆进行了差异筛选,得到50个在再生肝中高表达的强阳性克隆,序列测定和同源比较表明这些克隆代表了37个基因,其中13个与已报道的肝再生相关的基因同源,15个为忆知基因但首次发现与肝再生相关,9个为新的基因（EST）已被GenBank收录。制备了标准化RNA点杂交膜,通过对上述部分基因的RNA点杂交分析,不但确认了这些基因在再生肝中表达水平的升高,同时发现它们在肝再生过程中有不同的表达模式。实验结果提示这些基因在肝再生过程中具有重要功能。     

HBV基因组中GRE相关的DNA片段能介导多种激素对转录的调节作用

乙型肝炎病毒(HBV)能引起急性和慢性的乙型肝炎,慢性HBV感染可能导致肝硬变,最终引发肝细胞癌(HCC)。在世界范围内慢性HBV感染几乎波及三亿人,其中四分之三在亚洲。一些研究结果表明男性遭受慢性HBV感染、肝损伤和肝细胞癌的危险性高于女性。许多临床报告证明,给慢性HBV患者服用可的松类甾类激素可使患者血清中的HBsAg水平上升,同样的激素处理也能使培养细胞中的HBcAg表达水平升高。1988年Tur-Kaspa等用DNaseⅠ足迹法证实HBV基因组含有一个糖皮质激     

斑马鱼与人类疾病模型的研究

斑马鱼是一种很好的用于研究脊椎动物胚胎学和发育遗传学的模型生物,它有其他模型生物所不具备的优点。最近研究较多的是在斑马鱼中建立人类疾病研究模型。本文就斑马鱼在造血障碍和心血管障碍等方面的疾病模型建立及主要的技术做简要论述。     

新的端粒酶活性抑制蛋白LPTS-L的制备

LPTS基因是利用定位候选克隆策略克隆的一个新的肝相关候选肿瘤抑制基因。LPTS基因编码一个全长为328氨基酸的蛋白质(LPTS-L),该蛋白具有抑制细胞端粒酶活性的功能。为了进一步研究LPTS-L蛋白的结构与功能,利用DNA重组技术,将LPTS-L的cDNA克隆到表达载体pET-24a中构建重组克隆pET-24-LPTS,并在大肠杆菌BL-21中进行融合表达,获得可溶形式的LPTS-L融合蛋白。采用Ni Sepharose4B柱亲和层析,可以获得纯度较高的蛋白,但不适合大量制备。通过设计引物去掉了pET-24a载体上的6×His tag将LPTS-L基因进行了非融合表达,然后采用磷酸纤维素P11阳离子交换层析纯化LPTS-L蛋白,纯度可达到55%。再经Sephadex G-100凝胶过滤,LPTS-L蛋白的纯度可达到80%。Western blot实验显示经纯化后的LPTS-L蛋白可与兔抗GST-LPTS-L的多抗发生特异性结合。采用TRAP法测定蛋白质活性,结果显示纯化得到的LPTS-L蛋白可抑制端粒酶的活性,与采用Ni Sepharose4B纯化获得的LPTS-L融合蛋白比较,其抑制效率基本一致。因此,所建立的技术可以有效地制备LPTS-L蛋白。     

HBV基因中GRE相关DNA片段能介导多种激素对转录的调节作用

本文用寡聚核苷酸介导的定点突变改造乙型肝炎病毒(HBV)基因中的糖皮质激素应答元件(glucocorticoid response element,GRE),并将改变前后的GRE相关DNA片段与氯霉素乙酰基转移酶(CAT)基因融合,与多种激素受体的表达质粒共转染肝细胞,分别用不同的激素处理,测定CAT基因的表达活性以确定HBV上GRE相关DNA片段对各种激素的应答。结果表明HBV上GRE相关DNA片段能介导异源基因对糖皮质激素、孕激素和雌激素的应答。不含Enl的GRE相关片段与CAT基因融合后,在不加激素诱导的情况下,CAT基因活性明显降低。     

Identification and characterization of scaffold-associated region (SAR) of rRNA gene of silkworm Attacus ricini

Ｓｃａｆｆｏｌｄａｓｓｏｃｉａｔｅｄｒｅｇｉｏｎ(ＳＡＲ)ａｎｄｍａｔｒｉｘａｔｔａｃｈｍｅｎｔｒｅｇｉｏｎ(ＭＡＲ)ａｒｅｋｎｏｗｎａｓｃｉｓａｃｔｉｎｇＤＮＡｅｌｅｍｅｎｔｓ,ｗｈｉｃｈｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙｂｉｎｄｔｏｎｕｃｌｅａｒｓｃａｆｆｏｌｄｏｒｎｕｃｌｅａｒｍａｔｒｉｘ.ＳＡＲ/ＭＡＲａｒｅｕｓｕａｌｌｙ300—1000ｂｐｌｏｎｇ,ＡＴｒｉｃｈ,ａｎｄｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅＩＩｃｏｎｓｅｎｓｕｓｓｅｑｕｅｎｃｅａｎｄｏｔｈｅｒＡＴｒｉｃｈｓｅｑｕｅｎｃｅｍｏｔｉｆｓ[1].…     

LPTS抗体的制备和活性检测

LPTS是利用定位候选克隆策略 ,得到的一个新的肝相关候选肿瘤抑制基因 (anovelliver relatedputativetumorsuppressor) ,为了进一步研究其结构与功能 ,利用DNA重组技术 ,将LPTS的cDNA克隆到融合表达载体pET 2 4a中 ,在E .coli中表达 ,以Ni+柱亲和层析 ,获得纯化的 6×His LPTS融合蛋白。以此为抗原免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体 ,ELISA法检测其滴度达 2 0 0 0 0以上 ,经亲和层析纯化 ,Western印迹结果表明 ,该纯化抗体可与真核表达的HA LPTS蛋白和内源性的LPTS蛋白特异性结合 ;免疫荧光分析显示SMMC 772 1细胞内源性表达的LPTS蛋白呈点状分布于细胞核内。以上结果表明获得了效价高 ,活性强的针对LPTS蛋白的多克隆抗体 ,可用于对LPTS的结构和功能研究。     

核骨架结合元件功能研究的进展

细胞核骨架结合元件（ｎｕｃｌｅａｒｓｃａｆｏｌｄ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｒｅｇｉｏｎ,ＳＡＲ）或称核基质结合元件（ｎｕｃｌｅａｒｍａｔｒｉｘ－ａｔｔａｃｈｍｅｎｔｒｅｇｉｏｎ,ＭＡＲ）,是８０年代发现的一个新的ＤＮＡ元件。到９０年代初,由于发现ＳＡＲ／...     

蓖麻蚕rDNA转录起始区核酸酶S1的敏感位点的特征结构

曾报道,蓖麻蚕rRNA基因的非转录间隔区内有1个单链核酸酶S1的超敏感位点,它具有d(AT)₁₈的特征结构^[1] .蓖麻蚕经饥饿,再食后.发现在该S1超敏感位点的下游还存在1个敏感位点,而在饥饿的情况下,未能检测到染色质上的这个敏感位点^[2].新确定的这个可诱导的单链核酸酶的敏感位点,它是一个d(GT)₁₀…d(AT)₁₀的特殊结构,具有易解链的特征.这个新确定的核酸酶S1的敏感点结构可能直接参与了rDNA的转录和复制的调控.