卡介苗对枯否细胞生物特性影响的免疫细胞化学研究

卡介苗(BCG)是增强肝枯否细胞(KC)抗肝癌细胞作用的最佳免疫制剂之一。本实验是给大鼠BCG后,应用溶菌酶免疫细胞化学法显示KC,以图象分析系统测定KC的数量、分布和面积,以细胞分光光度计测定KC溶菌酶活性;分离KC体外受BCG作用后,用ELISA法测定RC的Fc受体表达。结果显示:BCG使KC数量增多一倍,尤以肝小叶周边带为显著;KC体积明显增大,细胞面积增大55.71％,周边带KC面积增大一倍上;细胞溶菌酶光密度增大64.35％;Fc受体表达增强64.82％。上述结果是BCG增强KC抗肝癌细胞作用有关细胞学机制。     

大鼠胰岛分离条件的优化

目的:优化大鼠胰岛分离纯化的条件,为胰岛移植实验奠定基础。方法:通过胆总管灌注胶原酶P来消化大鼠胰腺,分离胰岛,采用不连续密度梯度Ficoll离心法纯化胰岛,观察胶原酶浓度、消化时间以及大鼠体重对胰岛分离结果的影响。双硫腙染色鉴定胰岛,丫啶橙/碘丙啶染色鉴定胰岛细胞活率,糖刺激胰岛素释放试验评价胰岛功能。结果:胶原酶浓度、消化时间以及大鼠体重对胰岛分离结果有重要影响。1mg/ml胶原酶P在37℃静止消化45分钟条件下,胰岛分离效果最佳,效果较其他酶浓度和消化时间条件下好(P＜0．05)。体重350g的大鼠的胰岛收获量778．33±80．21IEQ/胰腺,而体重250g的大鼠的胰岛收获量655．00±56．56 IEQ/胰腺(P＜0．05)。优化条件下分离的胰岛其纯度＞90%,胰岛细胞活率＞90%,低糖(2．8mmol/L)、高糖(16．7mmol/L)刺激胰岛素释放分别为(5．40±1．75)mIU/L/30IEQ,(12．27±2．55)mIU/L/30IEQ(P＜0．05),刺激指数为2．33±0．29。结论:胶原酶浓度、消化时间以及大鼠体重影响胰岛分离结果,优化分离条件可改善大鼠胰岛分离结果。     

济南假单胞制剂PJV对大鼠肝大颗粒淋巴细胞数量、酶活性及自然杀伤活性的影响

本文通过细胞分离、细胞化学染色、电镜观察及~3H-TdR释放试验体外检测细胞毒活性等方法,研究了在生物反应调节剂—济南假单胞制剂PJV作用下,大鼠肝大颗粒淋巴细胞(LGL)和枯否细胞(KC)的数量、形态及其免疫生物特性等变化。结果表明,PJV的应用可引起肝内LGL数量增长达4倍,其体外杀伤肿瘤细胞活性增长约2倍,细胞内ACP活性明显提高。肝KC数量及活性也有明显增加。本文还讨论了肝LGL与KC的相互关系。     

小鼠SOCS1基因重组腺病毒载体的构建及其在树突状细胞中的表达

目的:构建含小鼠细胞因子信号抑制因子-1基因(SOCS1)的重组腺病毒载体(Ad5F35-SOCS1),探讨其介导SOCS1基因在小鼠树突状细胞中的表达。方法:设计含AgeI和NheI酶切位点的SOCS1基因上下游引物,以质粒pEF-FLAG-1/mSOCS1为模版,通过PCR扩增获得SOCS1全部序列,片段回收后经AgeI和NheI酶切,再定向插入到经AgeI和NheI酶切的质粒pDc316-LacZa中,获得重组穿梭质粒pDC316-SOCS1,经AgeI和NheI酶切、PCR及测序等鉴定后,用脂质体将穿梭质粒pDC316-SOCS1与腺病毒骨架质粒pBHGF35共转染293细胞,经位点特异性重组获得重组腺病毒Ad5F35-SOCS1,行PCR鉴定,经293细胞扩增、纯化制备高滴度病毒液,TCID50法测定病毒滴度。用获得的重组腺病毒感染小鼠树突状细胞,以免疫组化检测SOVD1的表达。结果:成功构建了含小鼠SOCS1基因的重组腺病毒载体,病毒感染滴度为1.4×10~9IU/ml,该载体能有效介导SOCS1基因在小鼠树突状细胞中的表达。结论:重组腺病毒载体能将SOCS1基因转入小鼠树突状细胞并有效表达,为基因转染制备耐受性树突状细胞奠定了基础。     

小鼠肝脏树突状细胞前体分离培养及影响其成熟因素的初步探讨

本次首次建立了从小鼠肝脏分离、培养、扩增肝树突状细胞（ｈｅｐａｔｉｃｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌ,ＨＤＣ）前体的方法。采用经门静脉插管胶原酶二步循环灌流法及Ｐｅｒｃｏｌ不连续密度梯度离心法分离非肝细胞,得到含ＨＤＣ前体组分,将其分三组培养：第一组加入重组小鼠粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子（ＭｒＧＭＣＳＦ）,待培养９天后,将细胞转移至鼠尾胶原上继续培养。第二组加入ＭｒＧＭＣＳＦ培养,但细胞不转移。第三组为对照组,仅加完全培养液。结果显示：第一、二组细胞于培养４天可见有许多细胞集落形成,第一组细胞转移至鼠尾胶原上培养１天后,细胞集落减少,而培养液中ＤＣ密度明显增加,光镜和扫描、透射电镜观察证明培养ＨＤＣ纯度达９５％,第二组则无上述细胞释放现象。实验结果提示,ＨＤＣ前体在体外受细胞因子刺激能大量扩增,但必须在胶原存在下才能分化成熟     

骨髓源性肝干细胞的研究

近年来全球掀起了有关干细胞的研究热潮 ,除血液干细胞、胚胎干细胞和神经干细胞外 ,肝干细胞也是引人注目的内容之一。肝干细胞的存在与否曾是一个争议性问题 ,目前已趋于肯定。自从Ｐｅ ｔｅｒｓｅｎｅｔａｌ[1] 有关骨髓细胞能分化为肝上皮细胞系的论文发表后 ,关于血源性干细胞能转化为肝实质细胞的事实引起了广泛的关注[2～ 4 ] ,本文就有关研究进展综述如下。1.肝内干细胞成体动物肝脏内有干细胞吗 ?这个问题已经争论了半个多世纪 ,目前通过体内、外实验证实了肝干细胞的存在 ,肝的卵圆细胞和小肝细胞作为肝干细胞或肝前体细胞的观点…     

环孢素A对大鼠心脏移植中血红素氧化酶-1表达的影响

目的　研究血红素氧化酶 1(HO 1)在大鼠同种异体心脏移植模型中的组织表达以及环孢素A (CsA)对该表达的影响。方法　心脏移植大鼠分为Ⅰ组 (对照组 )、Ⅱ组 (CsA 7 5mg/KgB W .)和Ⅲ组 (CsA 15mg/KgB .W .)。依据国际心肺移植组织 (ISHLT) 1990年心脏急性排异反应分级标准进行排异反应分析 ;免疫组化方法检测HO 1的表达。结果　心脏移植后 ,供者心脏和主动脉标本中 ,1和 3天时出现轻度炎性浸润 ,排异反应为 1A或 1B级 ;11天和 12天时出现弥漫性炎性浸润和心肌坏死 ,排斥级别达 3B或 4级。CsA治疗可使心脏移植排异反应降低 1～ 2 5级。移植后HO 1广泛表达于受体各类组织中 ,其中尤其以肝、肾、脾等器官表达增强比较明显 ,供心心肌细胞、血管内皮细胞和部分浸润淋巴细胞的HO 1表达均显著升高 ,CsA在一定时间内可明显增强供者心脏及主动脉的HO 1表达 ,减低移植排斥反应 ,从而延长移植心脏存活时间。结论　HO 1在心脏移植后受者体内表达广泛增强 ,CsA治疗可增强HO 1表达 ,这可能与其减弱移植排斥反应机制相关。